本发明属于医药
技术领域：
，涉及一种芳香甲酰胺类化合物及其在制备抗甲型流感病毒药物中的应用。
背景技术：
：流行性感冒(以下简称流感)是由流感病毒引起的严重上呼吸道疾病。流感病毒能造成人、猪、马、狗和禽类等各类生物产生流感。流感病毒是rna病毒，属于正粘病毒科。根据核蛋白和基质蛋白可将流感病毒分为三个亚型：甲型、乙型和丙型。甲型流感病毒(influenzaavirus，iav)又可根据血细胞凝聚素(hemagglutinin，ha)和神经氨酸苷酶(neuraminidase，na)这两种表面糖蛋白的抗原性差异，将甲型流感病毒分为多种亚型，例如h1n1、h2n2、h5n1亚型等。1918年西班牙的h1n1流感夺去了两千多万人的生命，2005年的h5n1流感导致了上百人死亡，且死亡率高达60％。2013年，我国首次发现了h7n9病例；据国家卫计委疾病预防控制局报道，2017年1月份因感染禽流感h7n9而死亡的人数为79人。此外每年禽流感(h5n1、h7n9等)使我国家禽行业蒙受了巨大的经济损失。当前，临床上治疗流感的药物主要有两大类：m2离子通道抑制剂，通过阻止胞内病毒的酸化进而抑制病毒的脱壳过程，被fda批准的药物有金刚烷胺和金刚烷乙胺；神经氨酸苷酶抑制剂，通过抑制子代病毒从宿主细胞的释放过程进而达到抗流感病毒的作用，被fda批准的药物有奥司他韦和扎那米韦。近年来，m2离子通道抑制剂和神经氨酸苷酶抑制剂耐药突变株的频繁出现使得研发新型结构骨架或新靶点的抗流感病毒药物显得尤为重要。技术实现要素：本发明的目的是提供一类通式i所示的芳香甲酰胺类化合物或其药理或生理上可接受的盐，其中，r1为h、4-f、4-cl、4-br、4-cn、4-cf3、4-ch3、4-och3、2-no2、3-no2、4-no2或3-cl；r2为x为c或s；n为0或3。优选地，本发明提供了如下表1所示的化合物：本发明通过体外抗甲型流感病毒活性实验，发现上述芳香甲酰胺类化合物可以用于制备抗甲型流感病毒药物。更优选地，尤其是下列化合物：n-(2-(苄硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺、n-(2-((4-氯苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺、n-(2-((4-氰基苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺、n-(2-((3-硝基苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺、n-(2-((4-硝基苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺、n-(2-((4-氯苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基噻吩-3-甲酰胺、n-(2-((4-氟苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺、n-(2-((4-溴苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺、2，5-二甲基-n-(2-((4-硝基苄基)硫基)乙基)噻吩-3-甲酰胺、n-(2-((4-氰基苄基)硫基)乙基)-2，5-二甲基噻吩-3-甲酰胺、n-苄基2，5二甲基呋喃-3-甲酰胺。本发明还提供上述结构式所表示的芳香甲酰胺类化合物的制备方法。通过下式i所示反应合成得到带r的芳香杂环羧酸衍生物。具体操作步骤可以为：将次氯酸钙(3.1g，21.71mmol)溶解在6ml温水中,然后将溶有碳酸钾(2.6g，18.82mmol)和氢氧化钾(727.5mg，30.39mmol)的3ml温热的水溶液缓慢滴加到上述溶液中，并充分搅拌直到半固体凝胶变成液体。悬浮液过滤并用10ml冲洗固体得滤液，并将滤液加热至55℃,然后边搅拌边缓慢滴加3-乙酰基-2,5-二甲基呋喃(5d)(1g，7.237mmol)，加毕，将反应温度保持在60-70℃。反应1个小时后，tlc监测反应，反应完毕加入亚硫酸钠除掉过量的次氯酸，冷却溶液并酸化，然后用乙酸乙酯萃取(3×30ml)，饱和食盐水和无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析分离得到2,5-二甲基-3-呋喃酸(6d)作为反应iv的原料。其他带r的芳香杂环羧酸衍生物的制备方法同上。通过下式ii所示反应合成得到1-(溴甲基)-2-硝基苯(2a)和1-(溴甲基)-3-硝基苯(2b)。具体操作步骤可以为：在冰浴条件下，将pbr3(494.8mg，1.828mmol)缓慢滴加到(2-硝基苯基)甲醇或(3-硝基苯基)甲醇(400mg，2.612mmol)的乙醚溶液中，然后冰浴搅拌2到4个小时。tlc监测反应，反应完毕，用10ml水淬灭反应并用乙酸乙酯萃取(3×30ml)，饱和食盐水和无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析分离得到1-(溴甲基)-2-硝基苯(2a)或1-(溴甲基)-3-硝基苯(2b)作为反应iii的原料。通过下式iii所示反应合成得到带r1的2-(苄硫基)乙胺衍生物。具体操作步骤可以为：将氢氧化锂(105.4mg，4.40mmol)溶于3ml水，然后加入9ml乙醇，将上述溶液滴加到盛有半胱胺盐酸盐(200mg，1.76mmol)的25ml的圆底烧瓶中，最后加入氯化苄(234.2mg，1.85mmol)，35℃油浴搅拌40min。tlc监测反应，反应完毕，浓缩反应液，然后乙酸乙酯萃取(3×30ml)，饱和食盐水和无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析分离得到2-(苄硫基)乙胺(2i)作为反应iv的原料。其他带r1的2-(苄硫基)乙胺衍生物的制备方法同上。通过合成，获得带r的芳香杂环羧酸衍生物，然后取1.05当量的带r1的2-(苄硫基)乙胺衍生物，hobt和edci于5ml的圆底烧瓶中，通入氩气，最后加入3mldmf室温反应过夜，tlc监测反应，反应完全后，柱层析分离即为目标化合物。反应式如下面iv式所示。其中，r1为h、4-f、4-cl、4-br、4-cn、4-cf3、4-ch3、4-och3、2-no2、3-no2、4-no2或3-cl；r2为x为c或s；n为0或3。具体操作过程可以如下：取0.4mmol反应i的羧酸衍生物和0.42mmol(1.05eq.)反应iii的带r1的2-(苄硫基)乙胺衍生物以及hobt(0.4mmol)和edci(0.4mmol)加入到含有磁子的5ml单口圆底烧瓶中，通入氩气，最后加入3mldmf使其溶解，室温搅拌过夜，tlc监测反应进行，原料基本反应完全后，柱层析分离得到纯的芳香甲酰胺类化合物。本发明的再一目的是提供一种抗甲型流感病毒的药用组合物，包含上述芳香甲酰胺类化合物或其药理或生理上可接受的盐与药学上可接受的载体或赋形剂组成。本发明涉及的芳香甲酰胺类化合物，可以有效抑制甲型流感病毒的活性，其对细胞的毒性小，可用于制备抗甲型流感病毒的药物。具体实施方式通过以下详细说明可以进一步理解本发明的特点和优点。所提供的实施例仅是对本发明方法的说明，而不以任何方式限制本发明揭示的其余内容。【实施例1】：n-(2-(苄硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys1)的制备取2,5-二甲基-3-呋喃酸(56mg，0.4mmol)、2-(苄硫基)乙-1-胺(70.3mg，0.42mmol)、hobt(54mg，0.4mmol)和edci(76.7mg，0.4mmol)，加入到含有磁子的5ml单口圆底烧瓶中，通入氩气，最后加入3mldmf使其溶解，室温搅拌过夜，tlc监测反应进行，原料基本反应完全后，柱层析分离得到纯净的目标化合物yys-1，产物为无色液体，产率为78％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.32–7.27(m,4h),7.26–7.20(m,1h),6.19(s,1h),6.00(d,j＝0.7hz,1h),3.72(s,2h),3.49(dd,j＝12.5,6.2hz,2h),2.62(t,j＝6.4hz,2h),2.52(s,3h),2.22(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.19,155.09,149.92,138.09,128.86,128.62,127.17,115.95,104.14,37.75,35.76,31.22,13.51,13.30.hrms(esi)calcdforc16h19no2s[m+h]+290.1215,found290.1208.【实施例2】：n-(2-((3-氯苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys2)的制备制备方法如实施例1，产物为无色液体，产率为39％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.33(s,1h),7.26–7.15(m,3h),6.11(s,1h),5.99(s,1h),3.69(s,2h),3.51(q,j＝6.2hz,2h),2.64(t,j＝6.4hz,2h),2.53(d,j＝2.8hz,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.24,155.25,150.02,140.22,134.41,129.84,128.90,127.39,127.03,115.80,104.01,37.73,35.30,31.33,13.51,13.29.hrms(esi)calcdforc16h18clno2s[m+h]+324.0825,found324.0818.【实施例3】：n-(2-((4-氯苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys3)的制备制备方法如实施例1，产物为无色液体，产率为11％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.31–7.21(m,4h),6.07(s,1h),5.98(d,j＝0.5hz,1h),3.69(s,2h),3.51(dd,j＝12.4,6.3hz,2h),2.62(t,j＝6.4hz,2h),2.53(s,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.19,155.22,150.04,136.60,132.93,130.20,128.76,115.79,103.98,37.72,35.09,31.19,13.51,13.31.hrms(esi)calcdforc16h18clno2s[m+h]+324.0825,found324.0818.【实施例4】：n-(2-((4-氰基苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys4)的制备制备方法如实施例1，产物为无色液体，产率为56％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.66–7.55(m,2h),7.45(d,j＝8.4hz,2h),6.12(s,1h),5.99(s,1h),3.77(s,2h),3.52(q,j＝6.5hz,2h),2.62(t,j＝6.6hz,2h),2.53(s,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.24,155.29,150.07,143.90,132.40,129.65,118.75,115.73,110.91,103.94,37.89,35.54,31.28,13.50,13.30.hrms(esi)calcdforc17h18n2o2s[m+h]+315.1167,found315.1160.【实施例5】：n-(2-((3-硝基苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys5)的制备制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为47％，熔点为113–115℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.21(d,j＝1.5hz,1h),8.09(d,j＝8.2hz,1h),7.67(d,j＝7.5hz,1h),7.56–7.43(m,1h),6.28–6.13(m,1h),6.01(s,1h),3.83(s,2h),3.54(q,j＝6.2hz,2h),2.65(t,j＝6.4hz,2h),2.53(s,3h),2.23(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.27,155.31,150.06,148.33,140.49,135.07,129.53,123.70,122.22,115.71,103.95,37.96,35.23,31.38,13.48,13.26.hrms(esi)calcdforc16h18n2o4s[m+h]+335.1066,found335.1057.【实施例6】：n-(2-((4-硝基苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys6)的制备制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为19％，熔点为105–106℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.19–8.15(m,2h),7.51(d,j＝8.7hz,2h),6.72(d,j＝0.8hz,1h),6.10(s,1h),3.82(s,2h),3.55(q,j＝6.4hz,2h),2.65(t,j＝6.5hz,2h),2.63(s,3h),2.39(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.60,147.03,145.95,142.80,136.18,131.01,129.74,123.99,123.88,38.02,35.24,31.34,15.03,14.87.hrms(esi)calcdforc16h18n2o4s[m+h]+335.1066,found335.1058.【实施例7】：n-(2-((4-氯苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基噻吩-3-甲酰胺(yys7)的制备制备方法如实施例1，产物为无色液体，产率为29％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.35–7.14(m,4h),6.72(d,j＝0.9hz,1h),6.15(s,1h),3.69(s,2h),3.52(dd,j＝12.5,6.1hz,2h),2.66–2.60(m,5h),2.39(s,3h).13cnmr(100,cdcl3)δ164.62,142.59,136.59,136.04,132.95,131.22,130.21,128.77,124.15,37.90,35.06,31.17,15.04,14.85.hrms(esi)calcdforc16h18clnos2[m+h]+340.0597,found340.0590.【实施例8】：n-(2-((4-氟苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys8)的制备制备方法如实施例1，产物为黄色固体，产率为21％，熔点为79–80℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.35–7.22(m,2h),7.02–6.95(m,2h),6.73(d,j＝0.9hz,1h),6.18(s,1h),3.71(s,2h),3.53(dd,j＝12.5,6.1hz,2h),2.68–2.60(m,5h),2.38(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.61,142.57,136.03,133.77,133.74,131.23,130.44,130.36,124.15,115.59,115.38,37.88,34.98,31.16,15.02,14.84.hrms(esi)calcdforc16h18fno2s[m+h]+308.1121,found308.1115.【实施例9】：n-(2-((4-溴苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys9)的制备制备方法如实施例1，产物为无色液体，产率为37％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.47–7.37(m,2h),7.24–7.14(m,2h),6.06(s,1h),5.98(d,j＝0.6hz,1h),3.67(s,2h),3.51(dd,j＝12.5,6.2hz,2h),2.62(t,j＝6.5hz,2h),2.53(s,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.20,155.19,150.02,137.15,131.70,130.56,121.00,115.82,104.01,77.44,77.12,76.80,37.77,35.15,31.19,13.51,13.31.hrms(esi)calcdforc16h18brno2s[m+h]+370.0299,found370.0291.【实施例10】：2,5-二甲基-n-(2-((4-(三氟甲基)苄基)硫基)乙基)呋喃-3-甲酰胺(yys10)的制备制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为36％，熔点为62–63℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.57(d,j＝8.1hz,2h),7.44(d,j＝8.0hz,2h),6.06(s,1h),5.98(s,1h),3.77(s,2h),3.53(q,j＝6.3hz,2h),2.63(t,j＝6.5hz,2h),2.53(s,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.22,155.27,150.07,142.28,129.19,125.58,125.54,115.76,103.93,37.75,35.30,31.27,13.48,13.25.hrms(esi)calcdforc17h18f3no2s[m+h]+358.1089,found358.1082.【实施例11】：2，5-二甲基-n-(2-((4-甲基苄基)硫基)乙基)呋喃-3-甲酰胺(yys11)的制备制备方法如实施例1，产物为无色液体，产率为61％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.20(d,j＝8.0hz,2h),7.11(d,j＝7.8hz,2h),6.12(s,1h),5.99(s,1h),3.69(s,2h),3.49(dd,j＝12.4,6.0hz,2h),2.62(t,j＝6.4hz,2h),2.52(s,3h),2.32(s,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.16,155.10,149.94,136.84,134.94,129.32,128.74,115.92,104.10,37.64,35.42,31.18,21.12,13.50,13.31.hrms(esi)calcdforc17h21no2s[m+h]+304.1371,found304.1364.【实施例12】：n-(2-((4-甲氧基苄基)硫基)乙基)-2,5-二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys12)的制备制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为49％，熔点为79–81℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.26–7.15(m,2h),6.89–6.74(m,2h),6.23(s,1h),6.00(s,1h),3.77(s,3h),3.68(s,2h),3.49(q,j＝6.2hz,2h),2.61(t,j＝6.4hz,2h),2.52(s,3h),2.22(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.22,158.67,155.08,149.90,129.99,129.93,115.95,113.97,104.14,55.24,37.81,35.13,31.07,13.49,13.27.hrms(esi)calcdforc17h21no3s[m+h]+320.1320,found320.1311.【实施例13】：2，5-二甲基-n-(2-((2-硝基苄基)硫基)乙基)呋喃-3-甲酰胺(yys13)的制备制备方法如实施例1，产物为黄色液体，产率为67％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.97(dd,j＝8.1,1.2hz,1h),7.56(m,1h),7.50–7.37(m,2h),6.19(s,1h),6.04(d,j＝0.7hz,1h),4.10(s,2h),3.52(q,j＝6.2hz,2h),2.68(t,j＝6.4hz,2h),2.53(d,j＝3.0hz,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.21,155.19,150.00,148.60,133.83,133.24,132.12,128.44,125.49,115.81,104.07,37.84,33.20,32.03,13.50,13.30.hrms(esi)calcdforc16h18n2o4s[m+h]+335.1066,found335.1058.【实施例14】：n-(2-((4-氯苄基)硫基)乙基)呋喃-3-甲酰胺(yys14)的制备制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为60％，熔点为126–128℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.93(s,1h),7.43(s,1h),7.32–7.22(m,4h),6.61(s,1h),6.39(s,1h),3.69(s,2h),3.53(q,j＝6.3hz,2h),2.62(t,j＝6.5hz,2h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ162.72,144.84,143.85,136.55,132.97,130.20,128.79,122.38,108.25,38.03,35.13,31.00.hrms(esi)calcdforc14h14clno2s[m+h]+296.0512,found296.0505.【实施例15】：n-(2-((4-氯苄基)硫基)乙基)呋喃-2-甲酰胺(yys15)的制备制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为34％，熔点为91–93℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.45(dd,j＝1.7,0.8hz,1h),7.31–7.24(m,4h),7.11(dd,j＝3.5,0.8hz,1h),6.70(s,1h),6.50(dd,j＝3.5,1.8hz,1h),3.72(s,2h),3.57(q,j＝6.4hz,2h),2.64(t,j＝6.5hz,2h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ158.41,147.76,144.02,136.55,132.95,130.22,128.77,114.40,112.22,37.75,35.17,31.02.hrms(esi)calcdforc14h14clno2s[m+h]+296.0512,found296.0505.【实施例16】：n-(2-((4-氯苄基)硫基)乙基)-5-甲基呋喃-2-甲酰胺(yys16)的制备制备方法如实施例1，产物为黄色液体，产率为55％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.45(dd,j＝1.7,0.8hz,1h),7.27(s,4h),7.11(dd,j＝3.5,0.8hz,1h),6.70(s,1h),6.50(dd,j＝3.5,1.8hz,1h),3.72(s,2h),3.57(q,j＝6.4hz,2h),2.64(t,j＝6.5hz,2h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ158.69,154.70,146.04,136.59,132.90,130.23,128.74,115.79,108.64,37.81,35.16,31.05,13.88.hrms(esi)calcdforc15h16clno2s[m+h]+310.0669,found310.0662.【实施例17】：n-(2-((4-氯苄基)硫基)乙基)-2-甲基噻唑-4-甲酰胺(yys17)的制备制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为61％，熔点为190–191℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.74(t,j＝5.6hz,1h),8.17(s,1h),7.43–7.32(m,4h),3.78(s,2h),3.44–3.37(m,2h),2.66(s,3h),2.58–2.53(m,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ169.50,159.84,142.63,137.71,134.82,131.35,130.67,128.31,38.67,33.91,29.89,19.12.hrms(esi)calcdforc15h17cln2os2[m+h]+341.0549,found341.0542.【实施例18】：n-(2-((4-氯苄基)硫基)乙基)-2-甲基苯甲酰胺(yys18)的制备制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为21％，熔点为104–105℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.36–7.28(m,2h),7.25(d,j＝5.5hz,4h),7.19(m,2h),6.22(s,1h),3.70(s,2h),3.54(dd,j＝12.6,6.2hz,2h),2.63(t,j＝6.4hz,2h),2.41(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ170.21,136.59,136.17,136.06,132.95,131.05,130.25,129.99,128.78,126.76,125.77,38.11,35.04,31.10,19.85.hrms(esi)calcdforc17h18clnos[m+h]+320.0876,found320.0867.【实施例19】：2，5-二甲基-n-(2-((4-硝基苄基)硫基)乙基)噻吩-3-甲酰胺(yys19)的制备制备方法如实施例1，产物为黄色固体，产率为67％，熔点为103–106℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.21–8.13(m,2h),7.50(d,j＝8.7hz,2h),6.04(s,1h),5.97(s,1h),3.81(s,2h),3.53(q,j＝6.4hz,2h),2.64(t,j＝6.6hz,2h),2.53(s,3h),2.24(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.15,155.33,150.12,147.04,145.98,129.71,123.86,115.68,103.85,37.90,35.32,31.42,13.47,13.26.hrms(esi)calcdforc16h18n2o3s2[m+h]+351.0837,found351.0830.【实施例20】：n-(2-((4-氰基苄基)硫基)乙基)-2，5-二甲基噻吩-3-甲酰胺(yys20)的制备制备方法如实施例1，产物为无色液体，产率为64％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.60(m,2h),7.45(d,j＝8.2hz,2h),6.05(s,1h),5.98(s,1h),3.77(s,2h),3.52(q,j＝6.4hz,2h),2.62(t,j＝6.6hz,2h),2.53(s,3h),2.25(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.17,155.29,150.08,143.85,132.39,129.63,118.69,115.74,110.99,103.89,37.87,35.57,31.35,13.47,13.27.hrms(esi)calcdforc17h18n2os2[m+h]+331.0939,found331.0932.【实施例21】：2，5-二甲基-n-(4-苯基丁基)呋喃-3-甲酰胺(yys21)的制备制备方法如实施例1，产物为无色液体，产率为51％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.33–7.24(m,2h),7.19(m,3h),6.70(d,j＝0.9hz,1h),5.77(s,1h),3.39(dd,j＝12.9,6.9hz,2h),2.67–2.61(m,5h),2.37(s,3h),1.76–1.55(m,4h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.73,142.13,135.96,131.60,128.44,128.37,125.85,124.09,39.41,35.52,29.35,28.79,15.03,14.78.hrms(esi)calcdforc17h21no2[m+h]+272.1651,found272.1642【实施例22】：n-苄基2，5二甲基呋喃-3-甲酰胺(yys22)的制备制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为59％，熔点为109–112℃。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.34–7.18(m,5h),6.29(s,1h),6.02(s,1h),4.50(d,j＝5.8hz,2h),2.52(s,3h),2.20(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ164.25,155.38,149.89,138.65,128.64,127.71,127.35,115.87,104.15,43.22,13.52,13.28.hrms(esi)calcdforc14h15no2[m+h]+30.1181,found230.1175.表1本发明方法合成的目标化合物yys1-22的化学结构【实验例23】：芳香甲酰胺类化合物药理实验(1)芳香甲酰胺类化合物细胞毒性测定：黄色的噻唑兰，简称mtt，可透过细胞膜进入细胞内，活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性mtt还原为难溶于水的蓝紫色的针状formazan结晶并沉积在细胞中，结晶物可被20％(质量比体积)sds溶解，用酶联免疫检测仪在575nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。实验时，将mdck细胞以每孔2×104的密度传至96孔板中，在37℃培养24小时后，吸走培养基，将含有各种浓度梯度化合物的细胞培养基加到每个孔。24小时后，每孔加入5mg/ml的mtt溶液，细胞板在37℃的co2孵化器中培养4h。接着将助溶液加入到溶血细胞，在37℃孵化3h，酶标仪测定575nm波长下的od值。化合物的抑制率(％)＝[1-(e-n)/(p-n)]×100，其中“e”代表给药组的od值，“p”代表未给药组的od值，“n”代表空白组od值。化合物的半数抑制浓度(cc50)作为该化合物细胞毒性的指标。(2)芳香甲酰胺类化合物体外抗h5n1活性：通过病毒蚀斑数减少分析来评估化合物的抗病毒活性。铺满mdck细胞的6孔板按照70pfu/孔接入流感病毒(h5n1)，40分钟后除去含病毒培养基并加入含有特定浓度待测药物的培养基，培养基含有终浓度为0.001％deae-dextran、2ug/mltpck-trypsin和0.5％agarose。在37℃5％co2条件下培养48-72小时后，用3％的福尔马林固定细胞，用0.5％结晶紫对细胞进行染色并计算病毒蚀斑数。ec50是指特定药物有效抑制病毒产生蚀斑数至对照孔的50％所需的浓度。本发明以金刚烷胺对照，对合成的22个化合物进行细胞毒性和抗甲型流感病毒h5n1活性检查，并计算了化合物的选择性指数si，结果见表2.表2本发明合成的目标化合物yys1-22抗h5n1活性和细胞毒性的结果compoundsec50(μm)cc50(μm)si(cc50/ic50)yys17.716±2.909115.173±30.20114.9yys254.545±16.44053.514±13.2470.9yys38.541±3.15351.476±10.5616.0yys45.302±1.450>100>18.9yys59.970±2.548109.662±27.42311.0yys61.247±0.335>100>80.2yys71.639±0.40068.638±23.97841.9yys813.771±5.09586.766±15.2256.3yys915.113±4.74994.029±19.7136.2yys1044.763±11.696113.069±15.8372.5yys1127.460±8.477>100>3.6yys1234.431±10.804>100>2.9yys13na91.749±21.621-yys1456.342±15.866>100>1.8yys1531.550±9.28168.192±21.0972.2yys1660.243±17.00150.418±10.3610.8yys17na>100-yys1835.429±12.11578.724±24.1682.2yys192.519±0.763>100>48.3yys201.338±0.318>100>93.0yys21na104.400±19.494-yys2225.148±8.92881.429±16.8793.2金刚烷胺0.551±0.161>100>181.5上述实验结果表明：合成的化合物大多数都具有很好抗h5n1活性，例如化合物yys1(ec50＝7.716±2.909μm,si＝14.9)、yys4(ec50＝5.302±1.450μm,si>18.9)、yys5(ec50＝9.970±2.548μm,si＝11.0)、yys6(ec50＝1.247±0.335μm,si>80.2)、yys7(ec50＝1.639±0.400μm,si＝41.9)、yys19(ec50＝2.519±0.763μm,si>48.3)、yys20(ec50＝1.338±0.318μm,si＝93.0)等，尤其是化合物yys6和yys20显示了接近亚微摩尔水平的生物活性。当前第1页12