14个功能性杀伤细胞免疫球蛋白样受体KIRs基因同步测序分型的方法与流程

本发明涉及生物医学，特别是dna测序分型领域。本发明提供一种适合于高通量化的全部14个功能性kirs基因同步扩增、同步测序分型的方法。

背景技术：

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killerimmunoglobulin-likereceptors,kirs)属于免疫球蛋白超家族，表达于自然杀伤细胞(nk细胞)和部分t细胞表面。按胞外结构域的数量，可分为kir2d及kir3d亚家族；根据胞浆区长短和免疫受体酪氨酸抑制性基序(itim)的有无，kir功能上分为抑制型(l型)和激活型(s型)。kir分子与靶细胞表面hlaⅰ类抗原结合，传导激活或抑制信号，调节nk细胞的活性，在移植免疫、肿瘤免疫和机体抗感染中均发挥重要作用。

kir基因家族位于人类第19号染色体上，呈共显性表达，除两个假基因2dp1和3dp1外，还包括14种功能性kir基因(kir2dl1、2dl2、2dl3、2dl4、2dl5、2ds1、2ds2、2ds3、2ds4、2ds5、3dl1、3dl2、3dl3、3ds1)^[1]。kir基因结构复杂：功能性kir3d基因中除了kir3dl3缺失第6外显子外，其余的功能性kir3d基因(3dl1、3dl2、3ds1)均含有9个外显子、8个内含子以及5’-启动子区和3’-utr区。各个外显子分别编码不同的肽结构域，其中第1外显子和第2外显子编码引导肽，第3外显子、第4外显子、第5外显子分别编码胞外区的d0、d1、d2结构域，第6外显子编码茎部结构域，第7外显子编码跨膜区，第8外显子和第9外显子编码胞浆区；kir2d基因中，kir2ds1～3、2ds1～5等8个基因的第3外显子为假外显子(pseudoexon)，不能编码相应的d0胞外结构域；kir2dl4、2dl5均缺失第4外显子，无d1胞外结构域。

在国际ipd-kir数据库^[2](http://www.ebi.ac.uk/cgi-bin/ipd/kir/)中，被收录的kir基因组序列全长为9901～17009bp。每个功能性kir基因的编码区序列(codingsequence,cds)全长仅915～1368bp(见表3)，而非编码区序列长达8773～15641bp(见表4)，非编码区序列中位于第6外显子两翼的第5内含子及第6内含子序列长度占相应的kir基因组全长序列的44.0％～61.2％(见表4)。

功能性kir基因的第1外显子(长度为34或40bp)和第2外显子(长度均为36bp)，长度短，snps多态性有限：2dl2、2dl4及2ds4基因第1、第2外显子无snps多态性，其余的存在1～3个snps位点。介于第1外显子、第2外显子之间的第1内含子，长度为199～2280bp。由于第1、第2外显子长度短、snps多态性有限，常规测序分型时并非每个kir基因均需要检测；必要检测时宜进行pcr单独扩增，并且pcr扩增产物涵盖完整的第1外显子、第1内含子和第2外显子不会导致扩增产物片段过长。

第3、第4和第5外显子，每个外显子的长度相对较长(282～300bp)，snps多态性丰富，应对编码胞外结构域的外显子及外显子之间的内含子进行单独pcr扩增。鉴于kir2dl1～3及kir2ds1～5共8个基因的第3外显子为假性外显子，无需检测，扩增产物涵盖完整的第4外显子、第4内含子及第5外显子，对第4、第5外显子进行双向测序；kir2dl4和2dl5无第4外显子，扩增产物涵盖完整的第3外显子、第5外显子以及介于其间的内含子序列，对第3、第5外显子进行双向测序；其余4个功能性kir基因(kir3ds1、3dl1～3)，扩增产物涵盖完整的第3外显子、第4外显子、第5外显子及介于其间的内含子序列，对第3、第4和第5外显子进行双向测序。

第6外显子(kir3dl3缺失该外显子)，长度仅51bp，基于的ipd-kirdatabase(release2.6.0)，4个kir基因(2ds4、3dl1、3dl2及3ds1)的第6外显子无snps位点，其余的功能性kir基因有1～2个snps位点。由于第6外显子snps多态性分布有限，并且位于第6外显子两翼的第5、第6内含子序列长达4937～9841bp(见表4)，因此检测第6外显子的多态性，须对第6外显子进行pcr单独扩增，以免因扩增完整的第5内含子和/或第6内含子的序列而导致扩增产物片段过长、扩增时间过长并影响扩增效率。

第7、第8、第9外显子的长度分别为102～105bp、51～53bp、8～270bp；第7、第8内含子长度分别为460～462bp、98～118bp。因此，扩增完整的第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子序列，不会导致扩增产物片段过长。

基于上述全部功能性kir基因的基因组全长序列的结构、snps多态性分布以及外显子两翼内含子的长度等特征，对于制定科学、高效的pcr扩增策略至关重要。

kir基因的多态性，体现在kir等位基因多态性及单倍体组成上。截止2017年4月，国际ipd-kirdatabase(release2.6.0)公布的功能性kir等位基因总数已达698个，其中不表达kir等位基因7个；在14个功能性kir基因中，多态性最为丰富的kir3dl2具有112个等位基因(表5)。

鉴定kir等位基因具有功能性意义。不同的kir基因表达水平不同，mcerlean等^[3]发现不同的kir基因mrna表达水平由高到低依次为：kir3dl2>kir2ds2>kir3ds1>kir2ds5>kir2dl5>kir2ds3>kir2dl1>kir3dl1>kir2ds1>kir2dl2>kir2dl4>kir2ds4>kir2dl3。同一kir基因中不同的等位基因其表达水平、亲和力及介导的激活/抑制能力也存在差异。yawata等^[4]报道kir3dl1等位基因在nk细胞膜上表达水平由高到低依次为：kir3dl1*01502>*020>*001>*007>*005，介导的抑制性作用强弱依次为：kir3dl1*001>*005>*01502>*020>*007；kir3dl1*005在细胞表面表达水平低，但介导的抑制能力较强。高加索人群中最常见的kir3dl1*004等位基因，不表达于细胞表面^[5]。kir2ds4*003、*004、*006、*007、*008、*009、*010、*012和*013在第5外显子cdsnt454～nt475位置存在22bp的缺失，引起阅读框移位，编码截短的多肽不能正常表达于细胞表面^[6]。鉴于不同的kir基因表达水平不同，同一kir基因中不同的等位基因其表达水平、介导的激活/抑制能力也存在差异，鉴定和甄别常见型无激活/抑制效应的kir等位基因十分必要。研究和建立高通量、高分辨水平的kir基因同步测序分型的方法，在等位基因水平的基础上开展kir应用研究尤为迫切。

当前，普遍采用的序列特异性引物-聚合酶链反应(sequencespecificprimer-polymerasechainreaction,pcr-ssp)及序列特异性寡核苷酸探针-聚合酶链反应(sequencespecificoligonucleotideprobe-pcr,pcr-ssop)商品化试剂盒仅能鉴定kir基因的有无，不能达到精细的等位基因水平和甄别全部的不表达kir等位基因及变异体。

测序分型(sequence-basedtyping,sbt)方法为基因分型的金标准。但迄今为止，国际上尚无商品化的kir测序分型试剂盒及相应的判定kir基因型的分析软件；也没有国际公认的kir基因测序分型方法。由于kir等位基因序列高度同源，并且基因组全长序列中内含子的序列特别长，给kir基因特异性pcr扩增带来很大困难。目前业已报道的kir测序分型方法存在以下问题：(1)仅对kir基因的部分外显子进行了测序分型^[7,8,9]，不能获得完整的编码区序列和分析各外显子的多态性，易出现模棱两可的测序分型结果。(2)测序分型时pcr扩增的目的基因片段虽涵盖了全部的编码区，但扩增产物片段过长，如扩增kir3ds1第3外显子至3’-utr的基因片段长达12.2kb，单次循环中68℃链延伸的时间达13min^[10]，扩增所需的时间超过10小时，对样本dna质量和dna聚合酶的要求很高。(3)kir基因的序列高度同源，有时采用的扩增目的基因片段的pcr引物存在非特异性扩增/协同扩增的现象，比如：受检者携带有kir2dl1和2ds1基因，扩增2dl1第1～第5外显子序列的同时，2ds1的序列也被一并扩增。对于非特异性扩增产物，需设计pcr引物采用巢式pcr进行二次扩增，实验操作繁琐^[11]。(4)对kir基因各目的基因片段进行pcr扩增时，由于pcr引物的退火温度差异较大、pcr扩增目的基因片段长度的差异造成延伸时间的不同^[10,11,12]，不能在同一个循环参数条件下进行pcr同步扩增、同步测序，无法实现高通量化，实验费时费力^[13]。(5)鉴定存在1个或多个碱基缺失的等位基因，有的还需采用分子克隆的方法进行鉴定，不能满足简便快速的需求。

随着kir分子的生物学功能、kir基因与疾病关联以及移植排斥等研究的深入开展，kir的应用研究领域日益广泛，建立高效低耗、适合于高通量化的功能性kir基因同步测序分型的方法并实现商品化和产业化是当前急待解决的问题。

技术实现要素：

本发明旨在解决上述问题，而首次提供一种涵盖14个功能性杀伤细胞免疫球蛋白样受体(kirs)基因同步测序分型的方法，可广泛应用于群体遗传学、骨髓移植组织配型、疾病关联等研究领域，并且为kir基因测序分型试剂的商品化奠定基础，改变当前国际上无kir基因测序分型试剂应市的现状。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一、根据各kir基因的基因组全长序列的结构、编码区单核苷酸多态性分布特点以及外显子两翼的内含子的长度，制定了科学的pcr扩增策略，每个功能性kir基因的全部编码区序列分别采用3～5对具有相近退火温度的kir基因特异性pcr引物，进行pcr同步扩增。针对纯化后的pcr扩增产物所含的每一外显子，分别进行正向、反向双向测序，如图1所示。

2dl1基因的编码区序列，采用5对2dl1基因特异性pcr引物进行扩增；其中第一对pcr引物扩增2dl1基因的第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列；第二对pcr引物扩增2dl1的第4外显子及其两侧翼的部分序列；第三对pcr引物扩增2dl1的第5外显子及其两侧翼的部分序列；第四对pcr引物扩增2dl1的第6外显子及其两侧翼的部分序列；第五对pcr引物扩增2dl1的第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’utr区的序列；

2dl2、2dl3、2ds1、2ds2、2ds3、2ds4及2ds5基因的编码区序列，均采用4对kir基因特异性pcr引物进行扩增；第一对pcr特异性引物扩增第1外显子、第1内含子和第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列；第二对pcr特异性引物扩增第4外显子、第4内含子、第5外显子，以及部分第2/3内含子(因第3外显子为假外显子，第2外显子与第4外显子之间的序列统称为第2/3内含子)和部分的第5内含子；第三对pcr特异性引物扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列；第四对pcr特异性引物扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’utr区的序列；

2dl4、2dl5基因的编码区序列，均采用4对kir基因特异性pcr引物进行扩增；第一对pcr特异性引物扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列；第二对pcr特异性引物扩增第3外显子、第3/4内含子(因第4外显子缺失，第3外显子与第5外显子之间的序列统称为第3/4内含子)、第5外显子，以及部分第2内含子和部分第5内含子的序列；第三对pcr特异性引物扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列；第四对pcr特异性引物扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’utr区的序列；

3dl1、3dl2及3ds1基因的编码区序列，均采用4对kir基因特异性pcr引物进行扩增；第一对pcr特异性引物扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列；第二对pcr特异性引物扩增第3外显子、第3内含子、第4外显子、第4内含子、第5外显子，以及部分第2内含子和部分第5内含子的序列；第三对pcr特异性引物扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列；第四对pcr特异性引物扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’utr区的序列；

3dl3基因的编码区序列，因缺失了第6外显子、该外显子无需扩增，仅用3对3dl3基因特异性pcr引物进行扩增；第一对pcr特异性引物扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列；第二对pcr特异性引物扩增第3外显子、第3内含子、第4外显子、第4内含子、第5外显子，以及部分第2内含子和部分第5内含子的序列；第三对pcr特异性引物扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’utr区的序列。

二、14个功能性kir基因的特异性pcr扩增引物共计56对(112条)。除了kir3dl3因缺失第6外显子仅用3对pcr引物、kir2dl1采用5对pcr引物外，其余的每个功能性kir基因均采用4对kir基因特异性pcr引物。每条pcr引物的序列、在kir基因组全长序列中的位置，以及扩增目的片段的长度等特征，如表1所述。

表114个功能性kir基因的特异性pcr扩增引物

(1)扩增kir2dl1基因全部编码区的第一对pcr引物包括上游引物2dl1_pcr_ex12_f(序列：5’-gttcgggaggttggatctc-3’，基因组全长序列中的位置：nt-268～nt-250)和下游引物2dl1_pcr_ex12_r(序列：5’-cacactgcagcccctaccg-3’，nt1332～nt1350)，特异性扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列，目的扩增片段长度为1618bp。第二对pcr引物包括上游引物2dl1_pcr_ex4_f(序列：5’-tgattctcctgagtctccagagg-3’，nt2501～nt2523)和下游引物2dl1_pcr_ex4_r(序列：5’-tggaaggagaagaggcagtttcc-3’，nt5288～nt5310)，特异性扩增第4外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为2810bp。第三对pcr引物包括2dl1_pcr_ex5_f(序列：5’-ctggcagggacctacagatgc-3’，nt3692～nt3712)和下游引物2dl1_pcr_ex5_r(序列：5’-ggacagccatgggctttcctc-3’，nt5608～nt5628)，特异性扩增第5外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为1937bp。第四对pcr引物包括上游引物2dl1_pcr_ex6_f(序列：5’-tcctgattgtgagttcttggcat-3’，nt8082～nt8104)和下游引物2dl1_pcr_ex6_r(序列：5’-tgagtcagtsagtcgaartgtgc-3’，nt9279～nt9301)，特异性扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为1220bp。第五对pcr引物包括上游引物2dl1_pcr_ex789_f(序列：5’-cctcagcacgttctatggttact-3’，nt12880～nt12902)和下游引物2dl1_pcr_ex789_r(序列：5’-tgtgattgcagcctcaagtagac-3’，nt14249～nt14271),特异性扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’-非翻译区的序列，目的扩增片段长度为1392bp。

(2)扩增kir2dl2基因全部编码区的第一对pcr引物包括上游引物2dl2_pcr_ex12_f(序列：5’-agaggttggatctgagacgtc-3’,nt-263～nt-243)和下游引物2dl2_pcr_ex12_r(序列：5’-ggaccgatggagaagttggct-3’,nt3590～nt3610)，特异性扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列，目的扩增片段长度为3873bp。第二对pcr引物包括上游引物2dl2_pcr_ex45_f(序列：5’-gaggctactagagacagagggac-3’,nt3207～nt3229)和下游引物2dl2_pcr_ex45_r(序列：5’-cccaagcttcgtcttctctct-3’,nt5617～nt5637)，特异性扩增第4外显子、第4内含子、第5外显子，以及部分第2/3内含子和部分第5内含子的序列，目的扩增片段长度为2431bp。第三对pcr引物包括上游引物2dl2_pcr_ex6_f(序列：5’-catgccaacatcatgctgtc-3’,nt8530～nt8549)和下游引物2dl2_pcr_ex6_r(序列：5’-tccctgtcctagcctccatac-3’,nt9879～nt9899)，特异性扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为1370bp。第四对pcr引物包括上游引物2dl2_pcr_ex789_f(序列：5’-gaagttccacttgccaaggaatg-3’,nt9210～nt9232)和下游引物2dl2_pcr_ex789_r(序列：5’-cagctgctggtacatgggagc-3’，nt14071～nt14091),特异性扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’-非翻译区的序列，目的扩增片段长度为4882bp。

(3)扩增kir2dl3基因全部编码区的第一对pcr引物包括上游引物2dl3_pcr_ex12_f(序列：5’-ggcygmctgtctgcacaga-3’,nt-26～nt-8)和下游引物2dl3_pcr_ex12_r(序列：5’-ggtttcctgttgctgctgtag-3’,nt2560～nt2580)，特异性扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列，目的扩增片段长度为2606bp。第二对pcr引物包括上游引物2dl3_pcr_ex45_f(序列：5’-agagaagagggagggagacagat-3’,nt3231～nt3253)和下游引物2dl3_pcr_ex45_r(序列：5’-gccatcctgtgccctgatc-3’,nt5651～nt5669)，特异性扩增第4外显子、第4内含子、第5外显子，以及部分第2/3内含子和部分第5内含子的序列，目的扩增片段长度为2439bp。第三对pcr引物包括上游引物2dl3_pcr_ex6_f(序列：5’-cccacctcaggctctcaaagg-3’,nt7497～nt7517)和下游引物2dl3_pcr_ex6_r(序列：5’-ggcgtacaatgtcagagctgc-3’,nt8908～nt8928)，特异性扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为1432bp。第四对pcr引物包括上游引物2dl3_pcr_ex789_f(序列：5’-actgagaaagcaggagaaagctg-3’,nt12934～nt12956)和下游引物2dl3_pcr_ex789_r(序列：5’-ccttcagattccagctgctgg-3’,nt14063～nt14083),特异性扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’-非翻译区的序列，目的扩增片段长度为1150bp。

(4)扩增kir2dl4基因全部编码区的第一对pcr引物包括上游引物2dl4_pcr_ex12_f(序列：5’-gtggtcaatgtgtcaactgcacg-3’,nt-99～nt-77)和下游引物2dl4_pcr_ex12_r(序列：5’-cacaggctccaaggattacaatg-3’,nt1639～nt1661)，特异性扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列，目的扩增片段长度为1760bp。第二对pcr引物包括上游引物2dl4_pcr_ex35_f(序列：5’-ctttcttccccatggctgagttg-3’,nt571～nt593)和下游引物2dl4_pcr_ex35_r(序列：5’-cttgggcaacaagagtgaaacgc-3’,nt3848～nt3870)，特异性扩增第3外显子、第3/4内含子、第5外显子，以及部分第2内含子和部分第5内含子的序列，目的扩增片段长度为3300bp。第三对pcr引物包括上游引物2dl4_pcr_ex6_f(序列：5’-aacctctacctccaggattcaag-3’,nt3904-nt3926)和下游引物2dl4_pcr_ex6_r(序列：5’-gtaagtggaagtgtcatgtgcac-3’,nt5738～nt5760)，特异性扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为1857bp。第四对pcr引物包括上游引物2dl4_pcr_ex789_f(序列：5’-ccaagaaatgagagacaatccac-3’,nt9442～nt9464)和下游引物2dl4_pcr_ex789_r(序列：5’-aggcaccagatttgtggtgtg-3’,nt10540～nt10560),特异性扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’-非翻译区的序列，目的扩增片段长度为1119bp。

(5)扩增kir2dl5基因全部编码区的第一对pcr引物包括上游引物2dl5_pcr_ex12_f(序列：5’-tcatagtgaaggacgygaggtgc-3’,nt-230～nt-208)和下游引物2dl5_pcr_ex12_r(序列：5’-agccaatgtgtgaaccacaatac-3’,nt1238～nt1260)，特异性扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列，目的扩增片段长度为1490bp。第二对pcr引物包括上游引物2dl5_pcr_ex35_f(序列：5’-caggacaagcccttgctgtct-3’,nt1571～nt1591)和下游引物2dl5_pcr_ex35_r(序列：5’-gacagaaacaagcagtgggtcac-3’,nt2993～nt3015)，特异性扩增第3外显子、第3/4内含子、第5外显子，以及部分第2内含子和部分第5内含子的序列，目的扩增片段长度为1445bp。第三对pcr引物包括上游引物2dl5_pcr_ex6_f(序列：5’-catttcctcacctctctcctgtcct-3’,nt5158～nt5182)和下游引物2dl5_pcr_ex6_r(序列：5’-aagagcagaggccaaatgcatcg-3’,nt6351～nt6373)，特异性扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为1216bp。第四对pcr引物包括上游引物2dl5_pcr_ex789_f(序列：5’-cagatgttgtatgtgcttagctg-3’,nt7907～nt7929)和下游引物2dl5_pcr_ex789_r(序列：5’-ggttttgagacagggctgttgtc-3’,nt8937～nt8959),特异性扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’-非翻译区的序列，目的扩增片段长度为1053bp。

(6)扩增kir2ds1基因全部编码区的第一对pcr引物包括上游引物2ds1_pcr_ex12_f(序列：5’-catagtgaaggacgctaggtgta-3’,nt-229～nt-207)和下游引物2ds1_pcr_ex12_r(序列：5’-gagccctctgacctgtgaccg-3’,nt2035～nt2055)，特异性扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列，目的扩增片段长度为2284bp。第二对pcr引物包括上游引物2ds1_pcr_ex45_f(序列：5’-gttcctcttccacccccacac-3’,nt3175～nt3195)和下游引物2ds1_pcr_ex45_r(序列：5’-gagggtttggaggtgccctgtcg-3’,nt5747～nt5769)，特异性扩增第4外显子、第4内含子、第5外显子，以及部分第2/3内含子和部分第5内含子的序列，目的扩增片段长度为2595bp。第三对pcr引物包括上游引物2ds1_pcr_ex6_f(序列：5’-tcctgattgtgagttcttggcat-3’,nt8078～nt8100)和下游引物2ds1_pcr_ex6_r(序列：5’-gtctcctagattccagttacgcc-3’,nt10742～nt10764)，特异性扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为2687bp。第四对pcr引物包括上游引物2ds1_pcr_ex789_f(序列：5’-cgtggaaaaggcaattcccga-3’,nt10765～nt10785)和下游引物2ds1_pcr_ex789_r(序列：5’-ggaggtggaacagcacgtgtc-3’,nt14330～nt14350),特异性扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’-非翻译区的序列，目的扩增片段长度为3586bp。

(7)扩增kir2ds2基因全部编码区的第一对pcr引物包括上游引物2ds2_pcr_ex12_f(序列：5’-tgagaggttggatctgagacgtc-3’,nt-265～nt-243)和下游引物2ds2_pcr_ex12_r(序列：5’-acatccaggctcttatcagcctt-3’,nt2956～nt2978)，特异性扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列，目的扩增片段长度为3243bp。第二对pcr引物包括上游引物2ds2_pcr_ex45_f(序列：5’-gcttccatgcttctgataattttg-3’,nt2420～nt2443)和下游引物2ds2_pcr_ex45_r(序列：5’-ctctgggtctctcctgaccgt-3’,nt5639～nt5659)，特异性扩增第4外显子、第4内含子、第5外显子，以及部分第2/3内含子和部分第5内含子的序列，目的扩增片段长度为3240bp。第三对pcr引物包括上游引物2ds2_pcr_ex6_f(序列：5’-cattctgctccgttgttctatgtc-3’,nt8282～nt8305)和下游引物2ds2_pcr_ex6_r(序列：5’-gccagggttgcttcatgacctat-3’,nt9024～nt9046)，特异性扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为765bp。第四对pcr引物包括上游引物2ds2_pcr_ex789_f(序列：5’-gataggccatggggaggtaaatt-3’,nt11463～nt11485)和下游引物2ds2_pcr_ex789_r(序列：5’-gggcagacatgtttatttgaaggc-3’,nt14250～nt14273),特异性扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’-非翻译区的序列，目的扩增片段长度为2811bp。

(8)扩增kir2ds3基因全部编码区的第一对pcr引物包括上游引物2ds3_pcr_ex12_f(序列：5’-tgtaaactgcatgggcaggga-3’,nt-90～nt-70)和下游引物2ds3_pcr_ex12_r(序列：5’-ctctgacctgtgaccatgatcag-3’,nt2368～nt2390)，特异性扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列，目的扩增片段长度为2480bp。第二对pcr引物包括上游引物2ds3_pcr_ex45_f(序列：5’-ctgagcccagcggcaaggc-3’,nt3586～nt3604)和下游引物2ds3_pcr_ex45_r(序列：5’-atccctccctcacaccgagga-3’,nt6039～nt6059)，特异性扩增第4外显子、第4内含子、第5外显子，以及部分第2/3内含子和部分第5内含子的序列，目的扩增片段长度为2474bp。第三对pcr引物包括上游引物2ds3_pcr_ex6_f(序列：5’-taccagggttctcctttctctag-3’,nt7491～nt7513)和下游引物2ds3_pcr_ex6_r(序列：5’-aggaaggggaccaggagcg-3’,nt9878～nt9896)，特异性扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为2406bp。第四对pcr引物包括上游引物2ds3_pcr_ex789_f(序列：5’-tgatgttgaaggaagaggctctt-3’,nt10853～nt10875)和下游引物2ds3_pcr_ex789_r(序列：5’-gatagtctgaggggaggtggaact-3’,nt14688～nt14711),特异性扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’-非翻译区的序列，目的扩增片段长度为3859bp。

(9)扩增kir2ds4基因全部编码区的第一对pcr引物包括上游引物2ds4_pcr_ex12_f(序列：5’-accatgtcgctcatggtcatcat-3’,nt-3～nt20)和下游引物2ds4_pcr_ex12_r(序列：5’-ttgtcctgaccaccttggggt-3’,nt3070～nt3090)，特异性扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列，目的扩增片段长度为3093bp。第二对pcr引物包括上游引物2ds4_pcr_ex45_f(序列：5’-tcagttcatacctcctgccaagg-3’,nt4419～nt4441)和下游引物2ds4_pcr_ex45_r(序列：5’-cgtggtcaggagttccagagc-3’,nt7611～nt7631)，特异性扩增第4外显子、第4内含子、第5外显子，以及部分第2/3内含子和部分第5内含子的序列，目的扩增片段长度为3213bp。第三对pcr引物包括上游引物2ds4_pcr_ex6_f(序列：5’-ctggactcccagggcccaatg-3’,nt10004～nt10024)和下游引物2ds4_pcr_ex6_r(序列：5’-aaggtttccacctccccaggg-3’,nt10212～nt10232)，特异性扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为229bp。第四对pcr引物包括上游引物2ds4_pcr_ex789_f(序列：5’-gaaagcccgctgaatcctc-3’,nt12884～nt12902)和下游引物2ds4_pcr_ex789_r(序列：5’-gcagaaggctgaaagatagtctg-3’,nt15726～nt15748),特异性扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’-非翻译区的序列，目的扩增片段长度为2865bp。

(10)扩增kir2ds5基因全部编码区的第一对pcr引物包括上游引物2ds5_pcr_ex12_f(序列：5’-tgagaacaatttccaggaagccg-3’,nt-199～nt-177)和下游引物2ds5_pcr_ex12_r(序列：5’-cctttcctgtggacacttgtc-3’,nt2870～nt2890)，特异性扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列，目的扩增片段长度为3089bp。第二对pcr引物包括上游引物2ds5_pcr_ex45_f(序列：5’-tcctgccaaggattccaattcga-3’,nt3609～nt3631)和下游引物2ds5_pcr_ex45_r(序列：5’-tctgtccatgcttctctccatcc-3’,nt6181～nt6203)，特异性扩增第4外显子、第4内含子、第5外显子，以及部分第2/3内含子和部分第5内含子的序列，目的扩增片段长度为2595bp。第三对pcr引物包括上游引物2ds5_pcr_ex6_f(序列：5’-cttgaagtctcaagacagtgggt-3’,nt9083～nt9105)和下游引物2ds5_pcr_ex6_r(序列：5’-atgcacttcatactttgagctag-3’,nt9923～nt9945)，特异性扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为863bp。第四对pcr引物包括上游引物2ds5_pcr_ex789_f(序列：5’-tgatgtkgaaggaagaggctctg-3’,nt11029～nt11051)和下游引物2ds5_pcr_ex789_r(序列：5’-aggggaggtggaactgcatgaga-3’,nt14857～nt14879),特异性扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’-非翻译区的序列，目的扩增片段长度为3851bp。

(11)扩增kir3dl1基因全部编码区的第一对pcr引物包括上游引物3dl1_pcr_ex12_f(序列：5’-cgaggtgtcaattctagtgagag-3’,nt-215～nt-193)和下游引物3dl1_pcr_ex12_r(序列：5’-taccacaaacatggcagcg-3’,nt2689～nt2707)，特异性扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列，目的扩增片段长度为2922bp。第二对pcr引物包括上游引物3dl1_pcr_ex345_f(序列：5’-cacccaggtgtggtaggagcc-3’,nt1700～nt1720)和下游引物3dl1_pcr_ex345_r(序列：5’-ctctgtgtgggtgagaggccatg-3’,nt5684～nt5706)，特异性扩增第3外显子、第3内含子、第4外显子、第4内含子、第5外显子，以及部分第2内含子和部分第5内含子的序列，目的扩增片段长度为4007bp。第三对pcr引物包括上游引物3dl1_pcr_ex6_f(序列：5’-gcctgtaataccactactcgggt-3’,nt8050～nt8072)和下游引物3dl1_pcr_ex6_r(序列：5’-ctaaaacacctcgccctcatc-3’,nt8921～nt8941)，特异性扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为892bp。第四对pcr引物包括上游引物3dl1_pcr_ex789_f(序列：5’-gctataactgagaaagcaggagg-3’,nt12700～nt12722)和下游引物3dl1_pcr_ex789_r(序列：5’-ctggaaaatagtccgaagaaagg-3’,nt14173～nt14195),特异性扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’-非翻译区的序列，目的扩增片段长度为1496bp。

(12)扩增kir3dl2基因全部编码区的第一对pcr引物包括上游引物3dl2_pcr_ex12_f(序列：5’-tgcaaggtggcaattgtagtcac-3’,nt-217～nt-195)和下游引物3dl2_pcr_ex12_r(序列：5’-cgacgatagtgacactgaagagc-3’,nt1588～nt1610)，特异性扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列，目的扩增片段长度为1827bp。第二对pcr引物包括上游引物3dl2_pcr_ex345_f(序列：5’-cctcctctctaaggcagtgcctc-3’,nt1488～nt1510)和下游引物3dl2_pcr_ex345_r(序列：5’-cgggttttcctcacctgtgacag-3’,nt5429～nt5451)，特异性扩增第3外显子、第3内含子、第4外显子、第4内含子、第5外显子，以及部分第2内含子和部分第5内含子的序列，目的扩增片段长度为3964bp。第三对pcr引物包括上游引物3dl2_pcr_ex6_f(序列：5’-gacagggcacctccaaaccctct-3’,nt5584～nt5606)和下游引物3dl2_pcr_ex6_r(序列：5’-attttagcccagtgacatgcacg-3’,nt9282～nt9304)，特异性扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为3721bp。第四对pcr引物包括上游引物3dl2_pcr_ex789_f(序列：5’-gcaggagaaagctgggtctcc-3’,nt15186～nt15206)和下游引物3dl2_pcr_ex789_r(序列：5’-ctggttttgagacagggctgttg-3’,nt16262～nt16284),特异性扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’-非翻译区的序列，目的扩增片段长度为1099bp。

(13)扩增kir3dl3基因全部编码区的第一对pcr引物包括上游引物3dl3_pcr_ex12_f(序列：5’-acaacatcctgtgtgctgctgaa-3’,nt-63～nt-41)和下游引物3dl3_pcr_ex12_r(序列：5’-gtcaaccccctgtgtcgcctg-3’,nt815～nt835)，特异性扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列，目的扩增片段长度为898bp。第二对pcr引物包括上游引物3dl3_pcr_ex345_f(序列：5’-ggaaccacagtcatgaccctgac-3’,nt1156～nt1178)和下游引物3dl3_pcr_ex345_r(序列：5’-aaagggtgtaggcgttgctgg-3’,nt5608～nt5630)，特异性扩增第3外显子、第3内含子、第4外显子、第4内含子、第5外显子，以及部分第2内含子和部分第5内含子的序列，目的扩增片段长度为4475bp。第三对pcr引物包括上游引物3dl3_pcr_ex789_f(序列：5’-tgagccagtccctcaaggctc-3’,nt9865～nt9885)和下游引物3dl3_pcr_ex789_r(序列：5’-gttttactgctgacagaaggctg-3’,nt12007～nt12029),特异性扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’-非翻译区的序列，目的扩增片段长度为2165bp。

(14)扩增kir3ds1基因全部编码区的第一对pcr引物包括上游引物3ds1_pcr_ex12_f(序列：5’-cgaggtgtcaattctagtgagag-3’,nt-215～nt-193)和下游引物3ds1_pcr_ex12_r(序列：5’-cctgtgaccatgatcaccat-3’,nt2080～nt2099)，特异性扩增第1外显子、第1内含子、第2外显子，以及部分5’-启动子区和部分第2内含子的序列，目的扩增片段长度为2314bp。第二对pcr引物包括上游引物3ds1_pcr_ex345_f(序列：5’-cagctgacacttgttgtagggag-3’,nt1634～nt1656)和下游引物3ds1_pcr_ex345_r(序列：5’-agtggcatgatctcggctcag-3’,nt6472～nt6492)，特异性扩增第3外显子、第3内含子、第4外显子、第4内含子、第5外显子，以及部分第2内含子和部分第5内含子的序列，目的扩增片段长度为4859bp。第三对pcr引物包括上游引物3ds1_pcr_ex6_f(序列：5’-tgatccgcccacctccgct-3’,nt7633～nt7651)和下游引物3ds1_pcr_ex6_r(序列：5’-gctgggaggtttgagccaacg-3’,nt9048～nt9068)，特异性扩增第6外显子及其两侧翼的部分序列，目的扩增片段长度为1436bp。第四对pcr引物包括上游引物3ds1_pcr_ex789_f(序列：5’-gctataactgagaaagcaggagg-3’,nt13101～nt13123)和下游引物3ds1_pcr_ex789_r(序列：5’-gaaggctgaaagctagtctgagg-3’,nt14562～nt14584),特异性扩增第7外显子、第7内含子、第8外显子、第8内含子、第9外显子，以及部分第6内含子和部分3’-非翻译区的序列，目的扩增片段长度为1484bp。

三、所述pcr扩增反应的体系组成均为：

四、所述pcr扩增反应均可在同一循环参数条件下进行同步扩增，其循环参数为：

五、所述pcr扩增产物的纯化反应体系组成均为：

六、所述pcr扩增产物的纯化反应体系均可在同一循环参数条件下进行纯化，其循环参数为：

37℃45min，

85℃15min，

4℃infinite。

七、纯化后的kir基因pcr特异性扩增产物所涵盖的外显子，分别通过十六条(kir2dl1～5、2ds1～5和kir3dl3)或十八条(kir3dl1～2和kir3ds1)特异性正向和反向测序引物对纯化后的pcr扩增产物进行双向测序反应。14个功能性kir基因特异性正向和反向测序引物共计230条，如表2所示：

表214个功能性kir基因特异性正向和反向测序引物

(1)kir2dl1第一外显子正向测序引物2dl1_sbt_ex1_f(序列:5’-cgtgttccgctcttgagcg-3’，nt-177～nt-159)，第一外显子反向测序引物2dl1_sbt_ex1_r(序列:5’-tcactccctccctctattg-3’，nt50～nt68)；

kir2dl1第二外显子正向测序引物2dl1_sbt_ex2_f(序列:5’-ttcttgggtgcaggtaggc-3’，nt855～nt873)，第二外显子反向测序引物2dl1_sbt_ex2_r(序列:5’-accctggtccccacagaac-3’，nt1210～nt1228)；

kir2dl1第四外显子正向测序引物2dl1_sbt_ex4_f(序列:5’-aaggggaagcctgactcaa-3’，nt3400～nt3418)，第四外显子反向测序引物2dl1_sbt_ex4_r(序列:5’-ccaattcctggatcattcac-3’，nt3827～nt3846)；

kir2dl1第五外显子正向测序引物2dl1_sbt_ex5_f(序列：5’-gttctcagctcaggtgaag-3’，nt5240～nt5258)，第五外显子反向测序引物2dl1_sbt_ex5_r(序列：5’-aaacaagcagtgggtcacttgac-3’，nt5574～nt5596)；

kir2dl1第六外显子正向测序引物2dl1_sbt_ex6_f(序列：5’-tttccactgagtggaggac-3’，nt8698～nt8716)，第六外显子反向测序引物2dl1_sbt_ex6_r(序列：5’-tggagttcggagatggtgg-3’，nt8920～nt8938)；

kir2dl1第七外显子正向测序引物2dl1_sbt_ex7_f(序列：5’-atgtggttacctgtcaatc-3’，nt12979～nt12997)，第七外显子反向测序引物2dl1_sbt_ex7_r(序列：5’-tcctgcttccccacatggc-3’，nt13207～nt13225)；

kir2dl1第八外显子正向测序引物2dl1_sbt_ex8_f(序列：5’-ctcagccacctatggtctc-3’，nt13533～nt13551)，第八外显子反向测序引物2dl1_sbt_ex8_r(序列：5’-tctctgtgtgaaaacgcag-3’，nt13835～nt13853)；

kir2dl1第九外显子正向测序引物2dl1_sbt_ex9_f(序列：5’-acagaacagcgaatagcga-3’，nt13667～nt13685)，第九外显子反向测序引物2dl1_sbt_ex9_r(序列：5’-taagatgcagactcatgcc-3’，nt14060～nt14078)。

(2)kir2dl2第一外显子正向测序引物2dl2_sbt_ex1_f(序列：5’-agaggttggatctgagacgtc-3’，nt-263～nt-243)，第一外显子反向测序引物2dl2_sbt_ex1_r(序列：5’-tctccaactctgggccccg-3’，nt81～nt99)；

kir2dl2第二外显子正向测序引物2dl2_sbt_ex2_f(序列：5’-ttcttgggtgcaggtaggc-3’，nt799～nt817)，第二外显子反向测序引物2dl2_sbt_ex2_r(序列：5’-cccagtctaaccctggtcc-3’，nt1163～nt1181)；

kir2dl2第四外显子正向测序引物2dl2_sbt_ex4_f(序列：5’-aaggggaagcctcactcat-3’，nt3332～nt3350)，第四外显子反向测序引物2dl2_sbt_ex4_r(序列：5’-ggcccctgtgtctgtcctc-3’，nt3900～nt3918)；

kir2dl2第五外显子正向测序引物2dl2_sbt_ex5_f(序列：5’-gctgtgacaaggaagatcc-3’，nt5179～nt5197)，第五外显子反向测序引物2dl2_sbt_ex5_r(序列：5’-aagctcctcagctaaggct-3’，nt5564～nt5582)；

kir2dl2第六外显子正向测序引物2dl2_sbt_ex6_f(序列：5’-atcccaggactcccagggc-3’，nt8669～nt8687)，第六外显子反向测序引物2dl2_sbt_ex6_r(序列：5’-ggcgtacaatgtcagagctgc-3’，nt8928～nt8948)；

kir2dl2第七外显子正向测序引物2dl2_sbt_ex7_f(序列：5’-atctgggtgcttgtcctaa-3’，nt12990～nt13008)，第七外显子反向测序引物2dl2_sbt_ex7_r(序列：5’-cctctgcttcgtgagacttac-3’，nt13213～nt13233)；

kir2dl2第八外显子正向测序引物2dl2_sbt_ex8_f(序列：5’-cccagaagtgccctccgag-3’，nt13628～nt13646)，第八外显子反向测序引物2dl2_sbt_ex8_r(序列：5’-tctctgtgtgaaaacgcag-3’，nt13876～nt13894)；

kir2dl2第九外显子正向测序引物2dl2_sbt_ex9_f(序列：5’-acagaacagcgaatagcga-3’，nt13708～nt13726)，第九外显子反向测序引物2dl2_sbt_ex9_r(序列：5’-ggctgttgtctccctagaagacg-3’，nt14026～nt14048)。

(3)kir2dl3第一外显子正向测序引物2dl3_sbt_ex1_f(序列：5’-cygmctgtctgcacaga-3’，nt-24～nt-8)，第一外显子反向测序引物2dl3_sbt_ex1_r(序列：5’-tctccaactctgggccccg-3’，nt81～nt99)；

kir2dl3第二外显子正向测序引物2dl3_sbt_ex2_f(序列：5’-ttcttgggtgcaggtaggc-3’，nt799～nt817)，第二外显子反向测序引物2dl3_sbt_ex2_r(序列：5’-accctggtccccacagaac-3’，nt1154～nt1172)；

kir2dl3第四外显子正向测序引物2dl3_sbt_ex4_f(序列：5’-cagcaaggggaagcctca-3’，nt3329～nt3346)，第四外显子反向测序引物2dl3_sbt_ex4_r(序列：5’-ggcccctgtgtctgtcctc-3’，nt3901～nt3919)；

kir2dl3第五外显子正向测序引物2dl3_sbt_ex5_f(序列：5’-gagcattaggtcatagagc-3’，nt5131～nt5149)，第五外显子反向测序引物2dl3_sbt_ex5_r(序列：5’-ctctctgcatctgtccatgcttc-3’，nt5602～nt5624)；

kir2dl3第六外显子正向测序引物2dl3_sbt_ex6_f(序列：5’-tactcaggagtttgaggcc-3’，nt8310～nt8328)，第六外显子反向测序引物2dl3_sbt_ex6_r(序列：5’-ggcgtacaatgtcagagctgc-3’，nt8908～nt8928)；

kir2dl3第七外显子正向测序引物2dl3_sbt_ex7_f(序列：5’-tctgggtgcttgtcctaaagg-3’，nt12969～nt12989)，第七外显子反向测序引物2dl3_sbt_ex7_r(序列：5’-caggcaatggtctgtgagc-3’，nt13361～nt13379)；

kir2dl3第八外显子正向测序引物2dl3_sbt_ex8_f(序列：5’-cttcatcgctggtgctg-3’，nt13166～nt13182)，第八外显子反向测序引物2dl3_sbt_ex8_r(序列：5’-gctgagtgagggagggtgc-3’，nt13772～nt13790)；

kir2dl3第九外显子正向测序引物2dl3_sbt_ex9_f(序列：5’-cccagcctcgtggctag-3’，nt13724～nt13740)，第九外显子反向测序引物2dl3_sbt_ex9_r(序列：5’-ggcaggagacaactttggatcw-3’，nt13957～nt13978)。

(4)kir2dl4第一外显子正向测序引物2dl4_sbt_ex1_f(序列：5’-gtggtcaatgtgtcaactgcacg-3’，nt-99～nt-77)，第一外显子反向测序引物2dl4_sbt_ex1_r(序列：5’-cctgagccactgggcgcca-3’，nt166～nt184)；

kir2dl4第二外显子正向测序引物2dl4_sbt_ex2_f(序列：5’-gagccatgttctgaagcaagt-3’，nt111～nt131)，第二外显子反向测序引物2dl4_sbt_ex2_r(序列：5’-caccctctgtgctgcctcc-3’，nt345～nt363)；

kir2dl4第三外显子正向测序引物2dl4_sbt_ex3_f(序列：5’-tactcctctctgaggcggc-3’，nt1140～nt1158)，第三外显子反向测序引物2dl4_sbt_ex3_r(序列：5’-ccagaagctctgggactca-3’，nt1502～nt1520)；

kir2dl4第五外显子正向测序引物2dl4_sbt_ex5_f(序列：5’-gggaggggagctgtgacaa-3’，nt2275～nt2293)，第五外显子反向测序引物2dl4_sbt_ex5_r(序列：5’-gcttctctccatcatcagc-3’，nt2691～nt2709)；

kir2dl4第六外显子正向测序引物2dl4_sbt_ex6_f(序列：5’-caggcatcctcattgccac-3’，nt5179～nt5197)，第六外显子反向测序引物2dl4_sbt_ex6_r(序列：5’-tggcaggtgctgagccaac-3’，nt5341～nt5359)；

kir2dl4第七外显子正向测序引物2dl4_sbt_ex7_f(序列：5’-tcgccagacacctgcatgc-3’，nt9519～nt9537)，第七外显子反向测序引物2dl4_sbt_ex7_r(序列：5’-tttggagcaccagc-3’，nt9600～nt9613)；

kir2dl4第八外显子正向测序引物2dl4_sbt_ex8_f(序列：5’-gaggacccagaagtgccct-3’，nt10030～nt10048)，第八外显子反向测序引物2dl4_sbt_ex8_r(序列：5’-ctggagagagggaaatcct-3’，nt10215～nt10233)；

kir2dl4第九外显子正向测序引物2dl4_sbt_ex9_f(序列：5’-ccagcctcatggatacagtct-3’，nt10150～nt10170)，第九外显子反向测序引物2dl4_sbt_ex9_r(序列：5’-ggaagagtgatgctctaagatgg-3’，nt10516～nt10538)。

(5)kir2dl5第一外显子正向测序引物2dl5_sbt_ex1_f(序列：5’-ccaaataacatcctgtgcgct-3’，nt-67～nt-47)，第一外显子反向测序引物2dl5_sbt_ex1_r(序列：5’-agatctccatccccgcact-3’，nt64～nt82)；

kir2dl5第二外显子正向测序引物2dl5_sbt_ex2_f(序列：5’-cagcaagggcctggctacc-3’，nt668～nt686)，第二外显子反向测序引物2dl5_sbt_ex2_r(序列：5’-gaaaatcccccaccgggct-3’，nt872～nt890)；

kir2dl5第三外显子正向测序引物2dl5_sbt_ex3_f(序列：5’-acaagcccttgctgtctgcct-3’，nt1575～nt1595)，第三外显子反向测序引物2dl5_sbt_ex3_r(序列：5’-cagatgctctgggattcag-3’，nt1891～nt1909)；

kir2dl5第五外显子正向测序引物2dl5_sbt_ex5_f(序列：5’-caggtgtgaggggagctgt-3’，nt2665～nt2683)，第五外显子反向测序引物2dl5_sbt_ex5_r(序列：5’-cgggtctgaccactcatagggt-3’，nt2970～nt2991)；

kir2dl5第六外显子正向测序引物2dl5_sbt_ex6_f(序列：5’-tcacctctctcctgtcctgtgt-3’，nt5165～nt5186)，第六外显子反向测序引物2dl5_sbt_ex6_r(序列：5’-tgagccaatgcttgaatccaaga-3’，nt5295～nt5317)；

kir2dl5第七外显子正向测序引物2dl5_sbt_ex7_f(序列：5’-atccataaagaggaactgctata-3’，nt7951～nt7973)，第七外显子反向测序引物2dl5_sbt_ex7_r(序列：5’-ccttggtccagggaccatc-3’，nt8201～nt8219)；

kir2dl5第八外显子正向测序引物2dl5_sbt_ex8_f(序列：5’-cacctacggcctcccgctg-3’，nt8480～nt8498)，第八外显子反向测序引物2dl5_sbt_ex8_r(序列：5’-gagggtgctcacattcttcaa-3’，nt8680～nt8700)；

kir2dl5第九外显子正向测序引物2dl5_sbt_ex9_f(序列：5’-tgccggggacagaacagtg-3’，nt8600～nt8618)，第九外显子反向测序引物2dl5_sbt_ex9_r(序列：5’-ctcaaggcctgactgtggtgctt-3’，nt8899～nt8921)。

(6)kir2ds1第一外显子正向测序引物2ds1_sbt_ex1_f(序列：5’-ctcccatgatgtggtcaac-3’，nt-109～nt-91)，第一外显子反向测序引物2ds1_sbt_ex1_r(序列：5’-tctccaaccccacactccc-3’，nt61～nt79)；

kir2ds1第二外显子正向测序引物2ds1_sbt_ex2_f(序列：5’-ttcttgggtgcaggtaggc-3’，nt855～nt873)，第二外显子反向测序引物2ds1_sbt_ex2_r(序列：5’-ctgccaagggaatgaaagg-3’，nt1185～nt1203)；

kir2ds1第四外显子正向测序引物2ds1_sbt_ex4_f(序列：5’-ggtgccatggatgggatga-3’，nt3423～nt3441)，第四外显子反向测序引物2ds1_sbt_ex4_r(序列：5’-caagtcctggatcattcac-3’，nt3827～nt3845)；

kir2ds1第五外显子正向测序引物2ds1_sbt_ex5_f(序列：5’-agagcaggggagtgagttc-3’，nt5221～nt5239)，第五外显子反向测序引物2ds1_sbt_ex5_r(序列：5’-ggctctaggatcataggac-3’，nt5628～nt5646)；

kir2ds1第六外显子正向测序引物2ds1_sbt_ex6_f(序列：5’-tcctcaaagatttccactgagtg-3’，nt8684～nt8706)，第六外显子反向测序引物2ds1_sbt_ex6_r(序列：5’-gtgagatgctgagtcaacgc-3’，nt8871～nt8890)；

kir2ds1第七外显子正向测序引物2ds1_sbt_ex7_f(序列：5’-gtggttacctgccaatcaag-3’，nt12981～nt13000)，第七外显子反向测序引物2ds1_sbt_ex7_r(序列：5’-tgaggaacacacatccgcgt-3’，nt13236～nt13255)；

kir2ds1第八外显子正向测序引物2ds1_sbt_ex8_f(序列：5’-atggcctccccctgtttgt-3’，nt13547～nt13565)，第八外显子反向测序引物2ds1_sbt_ex8_r(序列：5’-gggaataagactagccacg-3’，nt13713～nt13731)；

kir2ds1第九外显子正向测序引物2ds1_sbt_ex9_f(序列：5’-ctcctcggcccagcctcgt-3’，nt13697～nt13715)，第九外显子反向测序引物2ds1_sbt_ex9_r(序列：5’-tcccctcaaggcctgactg-3’，nt13971～nt13989)。

(7)kir2ds2第一外显子正向测序引物2ds2_sbt_ex1_f(序列：5’-ataacatcctgtgcgctgc-3’，nt-63～nt-45)，第一外显子反向测序引物2ds2_sbt_ex1_r(序列：5’-ccaactctgggccccgatc-3’，nt78～nt96)；

kir2ds2第二外显子正向测序引物2ds2_sbt_ex2_f(序列：5’-aagggagtcctggtttgcc-3’，nt772～nt790)，第二外显子反向测序引物2ds2_sbt_ex2_r(序列：5’-gtcagaaatgtgggccgag-3’，nt981～nt999)；

kir2ds2第四外显子正向测序引物2ds2_sbt_ex4_f(序列：5’-caccttctaaactcacaacc-3’，nt3268～nt3287)，第四外显子反向测序引物2ds2_sbt_ex4_r(序列：5’-cactctgcagcccaatgac-3’，nt3624～nt3642)；

kir2ds2第五外显子正向测序引物2ds2_sbt_ex5_f(序列：5’-agagcaggggagtgagttc-3’，nt5030～nt5048)，第五外显子反向测序引物2ds2_sbt_ex5_r(序列：5’-gaagctcctcagctaaggc-3’，nt5453～nt5471)；

kir2ds2第六外显子正向测序引物2ds2_sbt_ex6_f(序列：5’-ccagggcccaatattagat-3’，nt8465～nt8483)，第六外显子反向测序引物2ds2_sbt_ex6_r(序列：5’-tgagtcaacgcctgaatcc-3’，nt8686～nt8704)；

kir2ds2第七外显子正向测序引物2ds2_sbt_ex7_f(序列：5’-gccaatcaagaaatgcgag-3’，nt12815～nt12833)，第七外显子反向测序引物2ds2_sbt_ex7_r(序列：5’-gtcctgcctctgtggctcc-3’，nt13108～nt13126)；

kir2ds2第八外显子正向测序引物2ds2_sbt_ex8_f(序列：5’-atgaggacccagaagtgcc-3’，nt13407～nt13425)，第八外显子反向测序引物2ds2_sbt_ex8_r(序列：5’-cctcctgatggtcttgttc-3’，nt13621～nt13639)；

kir2ds2第九外显子正向测序引物2ds2_sbt_ex9_f(序列：5’-aggtaggtgctcctcggcc-3’，nt13512～nt13530)，第九外显子反向测序引物2ds2_sbt_ex9_r(序列：5’-agaagatcccctcaaggcc-3’，nt13801～nt13819)。

(8)kir2ds3第一外显子正向测序引物2ds3_sbt_ex1_f(序列：5’-cagggagccaaataacatc-3’，nt-75～nt-57)，第一外显子反向测序引物2ds3_sbt_ex1_r(序列：5’-cgctccctccctctattcc-3’，nt49～nt67)；

kir2ds3第二外显子正向测序引物2ds3_sbt_ex2_f(序列：5’-gccgagagccctgttcttg-3’，nt1182～nt1200)，第二外显子反向测序引物2ds3_sbt_ex2_r(序列：5’-acaggacttccctcccgtt-3’，nt1432～nt1450)；

kir2ds3第四外显子正向测序引物2ds3_sbt_ex4_f(序列：5’-agagagacaccttctaaat-3’，nt3780～nt3798)，第四外显子反向测序引物2ds3_sbt_ex4_r(序列：5’-atcattcactctgtgtccg-3’，nt4152～nt4170)；

kir2ds3第五外显子正向测序引物2ds3_sbt_ex5_f(序列：5’-aggaagatcctccataagg-3’，nt5596～nt5614)，第五外显子反向测序引物2ds3_sbt_ex5_r(序列：5’-ggctctaggatcataggac-3’，nt5957～nt5975)；

kir2ds3第六外显子正向测序引物2ds3_sbt_ex6_f(序列：5’-tcccagggcccaatattag-3’，nt8968～nt8986)，第六外显子反向测序引物2ds3_sbt_ex6_r(序列：5’-cactgagccctgtgttggg-3’，nt9291～nt9309)；

kir2ds3第七外显子正向测序引物2ds3_sbt_ex7_f(序列：5’-gtgcttgtcctaaagagacgt-3’，nt13284～nt13304)，第七外显子反向测序引物2ds3_sbt_ex7_r(序列：5’-tgagtggctgcaggggacg-3’，nt13709～nt13727)；

kir2ds3第八外显子正向测序引物2ds3_sbt_ex8_f(序列：5’-gacctcaggcacctatggc-3’，nt13862～nt13880)，第八外显子反向测序引物2ds3_sbt_ex8_r(序列：5’-gctgagtgagggagggtgc-3’，nt14082～nt14100)；

kir2ds3第九外显子正向测序引物2ds3_sbt_ex9_f(序列：5’-cggcccagcctcgtggcta-3’，nt14031～nt14049)，第九外显子反向测序引物2ds3_sbt_ex9_r(序列：5’-tgtcttgggcctctgagaagggg-3’，nt14196～nt14218)。

(9)kir2ds4第一外显子正向测序引物2ds4_sbt_ex1_f(序列：5’-accatgtcgctcatggtc-3’，nt-3～nt15)，第一外显子反向测序引物2ds4_sbt_ex1_r(序列：5’-ggctcatcactccatctct-3’，nt148～nt166)；

kir2ds4第二外显子正向测序引物2ds4_sbt_ex2_f(序列：5’-gaaggggctggctatcaag-3’，nt2218～nt2236)，第二外显子反向测序引物2ds4_sbt_ex2_r(序列：5’-gacttccctcccgtttcag-3’，nt2404～nt2422)；

kir2ds4第四外显子正向测序引物2ds4_sbt_ex4_f(序列：5’-agagagacaccttctaaac-3’，nt4774～nt4792)，第四外显子反向测序引物2ds4_sbt_ex4_r(序列：5’-cacctgggtctccaagtcc-3’，nt5168～nt5186)；

kir2ds4第五外显子正向测序引物2ds4_sbt_ex5_f(序列：5’-agttctcaggtcaggtgtg-3’，nt6589～nt6607)，第五外显子反向测序引物2ds4_sbt_ex5_r(序列：5’-ggaagctcctcagctaagg-3’，nt7001～nt7019)；

kir2ds4第六外显子正向测序引物2ds4_sbt_ex6_f(序列：5’-ctggactcccagggcccaatg-3’，nt10004～nt10024)，第六外显子反向测序引物2ds4_sbt_ex6_r(序列：5’-ttccacctccccagggttc-3’，nt10209～nt10227)；

kir2ds4第七外显子正向测序引物2ds4_sbt_ex7_f(序列：5’-cgccatttgggtgcttgtc-3’，nt14317～nt14335)，第七外显子反向测序引物2ds4_sbt_ex7_r(序列：5’-ggtgaggaacacacatccg-3’，nt14611～nt14629)；

kir2ds4第八外显子正向测序引物2ds4_sbt_ex8_f(序列：5’-agtctgctgttggcaactg-3’，nt14883～nt14901)，第八外显子反向测序引物2ds4_sbt_ex8_r(序列：5’-cctcctgatggtcttgttc-3’，nt15169～nt15187)；

kir2ds4第九外显子正向测序引物2ds4_sbt_ex9_f(序列：5’-ctcggcccagcctcgtggc-3’，nt15072～nt15090)，第九外显子反向测序引物2ds4_sbt_ex9_r(序列：5’-caactttggatctgggctc-3’，nt15304～nt15322)。

(10)kir2ds5第一外显子正向测序引物2ds5_sbt_ex1_f(序列：5’-ggcgccaaataacatcctg-3’，nt-72～nt-54)，第一外显子反向测序引物2ds5_sbt_ex1_r(序列：5’-gcccagatctccatccccg-3’，nt68～nt86)；

kir2ds5第二外显子正向测序引物2ds5_sbt_ex2_f(序列：5’-ggcactgagkgtgagtttc-3’，nt1383～nt1401)，第二外显子反向测序引物2ds5_sbt_ex2_r(序列：5’-tgacaggacttccctcccg-3’，nt1606～nt1624)；

kir2ds5第四外显子正向测序引物2ds5_sbt_ex4_f(序列：5’-gacaccttctaaattcacaaac-3’，nt3958～nt3979)，第四外显子反向测序引物2ds5_sbt_ex4_r(序列：5’-ctctgcatcccaatgacaatg-3’，nt4315～nt4335)；

kir2ds5第五外显子正向测序引物2ds5_sbt_ex5_f(序列：5’-cctccctgaggaaaatgcc-3’，nt5786～nt5804)，第五外显子反向测序引物2ds5_sbt_ex5_r(序列：5’-tcataggacatgggacagc-3’，nt6129～nt6147)；

kir2ds5第六外显子正向测序引物2ds5_sbt_ex6_f(序列：5’-cagggcccaatattagataac-3’，nt9147～nt9167)，第六外显子反向测序引物2ds5_sbt_ex6_r(序列：5’-ggagtatctggagttcggaga-3’，nt9426～nt9446)；

kir2ds5第七外显子正向测序引物2ds5_sbt_ex7_f(序列：5’-ctgtcaatcaagaaatgcgag-3’，nt13495～nt13515)，第七外显子反向测序引物2ds5_sbt_ex7_r(序列：5’-ggaacacacacccgcgtgc-3’，nt13740～nt13758)；

kir2ds5第八外显子正向测序引物2ds5_sbt_ex8_f(序列：5’-agatagaatgtctgagtctgc-3’，nt14003～nt14023)，第八外显子反向测序引物2ds5_sbt_ex8_r(序列：5’-acacagtgatccaattatgcg-3’，nt14329～nt14349)；

kir2ds5第九外显子正向测序引物2ds5_sbt_ex9_f(序列：5’-ggtaggtgctcctcggccc-3’，nt14195～nt14213)，第九外显子反向测序引物2ds5_sbt_ex9_r(序列：5’-atgggagctggcaacccgg-3’，nt14528～nt14546)。

(11)kir3dl1第一外显子正向测序引物3dl1_sbt_ex1_f(序列：5’-cagggcgccaaataacatc-3’，nt-74～nt-56)，第一外显子反向测序引物3dl1_sbt_ex1_r(序列：5’-cagatctccatccccgcac-3’，nt65～nt83)；

kir3dl1第二外显子正向测序引物3dl1_sbt_ex2_f(序列：5’-agggcctggctgccaagac-3’，nt940～nt958)，第二外显子反向测序引物3dl1_sbt_ex2_r(序列：5’-aatgtgggccgagcatccg-3’，nt1182～nt1200)；

kir3dl1第三外显子正向测序引物3dl1_sbt_ex3_f(序列：5’-ggggagaatcttctgggcact-3’，nt1736～nt1756)，第三外显子反向测序引物3dl1_sbt_ex3_r(序列：5’-tgatgggaccctgacggac-3’，nt2167～nt2185)；

kir3dl1第四外显子正向测序引物3dl1_sbt_ex4_f(序列：5’-tggaggcacctgcaccagg-3’，nt3052～nt3070)，第四外显子反向测序引物3dl1_sbt_ex4_r(序列：5’-tggtacagacctcaccaag-3’，nt3633～nt3651)；

kir3dl1第五外显子正向测序引物3dl1_sbt_ex5_f(序列：5’-caggtatgaggggagctatg-3’，nt5001～nt5020)，第五外显子反向测序引物3dl1_sbt_ex5_r(序列：5’-cctgtctgccatcctgcgc-3’，nt5490～nt5508)；

kir3dl1第六外显子正向测序引物3dl1_sbt_ex6_f(序列：5’-aagcaccctcatttcctcac-3’，nt8485～nt8504)，第六外显子反向测序引物3dl1_sbt_ex6_r(序列：5’-caacacttgcatccaaggc-3’，nt8631～nt8649)；

kir3dl1第七外显子正向测序引物3dl1_sbt_ex7_f(序列：5’-cccgccatctgggtgcttg-3’，nt12734～nt12752)，第七外显子反向测序引物3dl1_sbt_ex7_r(序列：5’-tcctgcttccccacatggc-3’，nt13001～nt13019)；

kir3dl1第八外显子正向测序引物3dl1_sbt_ex8_f(序列：5’-ccagaagtgccctccgagc-3’，nt13382～nt13400)，第八外显子反向测序引物3dl1_sbt_ex8_r(序列：5’-tgtttgggaataacactagcc-3’，nt13507～nt13527)；

kir3dl1第九外显子正向测序引物3dl1_sbt_ex9_f(序列：5’-cgtggctagtgttattccc-3’，nt13504～nt13522)，第九外显子反向测序引物3dl1_sbt_ex9_r(序列：5’-atgggagctggcaactcgg-3’，nt13833～nt13851)。

(12)kir3dl2第一外显子正向测序引物3dl2_sbt_ex1_f(序列：5’-gccaaataacatcctgtgcgc-3’，nt-68～nt-48)，第一外显子反向测序引物3dl2_sbt_ex1_r(序列：5’-taggccgagatctccatcc-3’，nt71～nt89)；

kir3dl2第二外显子正向测序引物3dl2_sbt_ex2_f(序列：5’-gaggctaagtttaccttcagc-3’，nt624～nt644)，第二外显子反向测序引物3dl2_sbt_ex2_r(序列：5’-gacttccctcctgtttcag-3’，nt834～nt852)；

kir3dl2第三外显子正向测序引物3dl2_sbt_ex3_f(序列：5’-ggcccagcactgtggtgcc-3’，nt1553～nt1571)，第三外显子反向测序引物3dl2_sbt_ex3_r(序列：5’-gcccatttcccctgtattc-3’，nt1930～nt1948)；

kir3dl2第四外显子正向测序引物3dl2_sbt_ex4_f(序列：5’-gagagatgccttctaaact-3’，nt3235～nt3253)，第四外显子反向测序引物3dl2_sbt_ex4_r(序列：5’-tctccataagaatcccacgct-3’，nt3663～nt3683)；

kir3dl2第五外显子正向测序引物3dl2_sbt_ex5_f(序列：5’-cctccctgaggaaactgcc-3’，nt5111～nt5129)，第五外显子反向测序引物3dl2_sbt_ex5_r(序列：5’-gaaagagccgaagcatctg-3’，nt5361～nt5379)；

kir3dl2第六外显子正向测序引物3dl2_sbt_ex6_f(序列：5’-caacctcaaagatttccattg-3’，nt8530～nt8550)，第六外显子反向测序引物3dl2_sbt_ex6_r(序列：5’-caacacttgcatccaaggc-3’，nt8707～nt8725)；

kir3dl2第七外显子正向测序引物3dl2_sbt_ex7_f(序列：5’-gagatgttccatgtggttacc-3’，nt15231～nt15251)，第七外显子反向测序引物3dl2_sbt_ex7_r(序列：5’-ggaacacacacccgcgtgc-3’，nt15494～nt15512)；

kir3dl2第八外显子正向测序引物3dl2_sbt_ex8_f(序列：5’-tctgagtctggatgttggc-3’，nt15764～nt15782)，第八外显子反向测序引物3dl2_sbt_ex8_r(序列：5’-gggtcttgttcatcagagtcc-3’，nt16046～nt16066)；

kir3dl2第九外显子正向测序引物3dl2_sbt_ex9_f(序列：5’-cctcggcccagcctcacgg-3’，nt15957～nt15975)，第九外显子反向测序引物3dl2_sbt_ex9_r(序列：5’-gactgtggtgctcgtgggc-3’，nt16216～nt16234)。

(13)kir3dl3第一外显子正向测序引物3dl3_sbt_ex1_f(序列：5’-acaacatcctgtgtgctgctgaa-3’，nt-63～nt-41)，第一外显子反向测序引物3dl3_sbt_ex1_r(序列：5’-tccctccctcgattccctt-3’，nt46～nt64)；

kir3dl3第二外显子正向测序引物3dl3_sbt_ex2_f(序列：5’-gatgtacagatggatcatc-3’，nt672～nt690)，第二外显子反向测序引物3dl3_sbt_ex2_r(序列：5’-gtcaaccccctgtgtcgcctg-3’，nt815～nt835)；

kir3dl3第三外显子正向测序引物3dl3_sbt_ex3_f(序列：5’-gctccacatcctcctctct-3’，nt1474～nt1492)，第三外显子反向测序引物3dl3_sbt_ex3_r(序列：5’-atccccctttaccccaaat-3’，nt1905～nt1923)；

kir3dl3第四外显子正向测序引物3dl3_sbt_ex4_f(序列：5’-gggaagcctcacttatttcag-3’，nt2996～nt3016)，第四外显子反向测序引物3dl3_sbt_ex4_r(序列：5’-acctggggcttccagtcct-3’，nt3431～nt3449)；

kir3dl3第五外显子正向测序引物3dl3_sbt_ex5_f(序列：5’-gagagctgtgacaasgaag-3’，nt4900～nt4918)，第五外显子反向测序引物3dl3_sbt_ex5_r(序列：5’-gcaggaagctcctcagcta-3’，nt5294～nt5312)；

kir3dl3第七外显子正向测序引物3dl3_sbt_ex7_f(序列：5’-gtgagacaattcatataga-3’，nt10650～nt10668)，第七外显子反向测序引物3dl3_sbt_ex7_r(序列：5’-tgcttccccacatggccct-3’，nt10852～nt10870)；

kir3dl3第八外显子正向测序引物3dl3_sbt_ex8_f(序列：5’-gacctcaggcacctatggc-3’，nt11178～nt11196)，第八外显子反向测序引物3dl3_sbt_ex8_r(序列：5’-gagtgagggagggtgctca-3’，nt11395～nt11413)；

kir3dl3第九外显子正向测序引物3dl3_sbt_ex9_f(序列：5’-crtggctagtcttattccc-3’，nt11358～nt11376)，第九外显子反向测序引物3dl3_sbt_ex9_r(序列：5’-ccctagaagatcccatcaa-3’，nt11627～nt11645)。

(14)kir3ds1第一外显子正向测序引物3ds1_sbt_ex1_f(序列：5’-aagccatgctccgctcttg-3’，nt-181～nt-163)，第一外显子反向测序引物3ds1_sbt_ex1_r(序列：5’-cagatctccatccccgcac-3’，nt65～nt83)；

kir3ds1第二外显子正向测序引物3ds1_sbt_ex2_f(序列：5’-agtgggggcagcagggtg-3’，nt968～nt985)，第二外显子反向测序引物3ds1_sbt_ex2_r(序列：5’-aatgtgggccgagcatccg-3’，nt1182～nt1200)；

kir3ds1第三外显子正向测序引物3ds1_sbt_ex3_f(序列：5’-ggggagaatcttctgggcact-3’，nt1735～nt1755)，第三外显子反向测序引物3ds1_sbt_ex3_r(序列：5’-tgatgggaccctgacggac-3’，nt2166～nt2184)；

kir3ds1第四外显子正向测序引物3ds1_sbt_ex4_f(序列：5’-ggagagagacagacacggg-3’，nt3485～nt3503)，第四外显子反向测序引物3ds1_sbt_ex4_r(序列：5’-tggtacagacctcaccaag-3’，nt4007～nt4025)；

kir3ds1第五外显子正向测序引物3ds1_sbt_ex5_f(序列：5’-caggtgtgaggggagctgt-3’，nt5403～nt5421)，第五外显子反向测序引物3ds1_sbt_ex5_r(序列：5’-cctgtctgccatcctgcgc-3’，nt5892～nt5910)；

kir3ds1第六外显子正向测序引物3ds1_sbt_ex6_f(序列：5’-tcaagacagtgggcatcgcac-3’，nt8763～nt8783)，第六外显子反向测序引物3ds1_sbt_ex6_r(序列：5’-gggaggtttgagccaacgctt-3’，nt9045～nt9065)；

kir3ds1第七外显子正向测序引物3ds1_sbt_ex7_f(序列：5’-cgctgtatgtggttacctgtg-3’，nt13165～nt13185)，第七外显子反向测序引物3ds1_sbt_ex7_r(序列：5’-ggtgaggaacacacacccg-3’，nt13432～nt13450)；

kir3ds1第八外显子正向测序引物3ds1_sbt_ex8_f(序列：5’-ccagaagtgccctccgagc-3’，nt13784～nt13802)，第八外显子反向测序引物3ds1_sbt_ex8_r(序列：5’-gctgagtgagggagggtgc-3’，nt13944～nt13962)；

kir3ds1第九外显子正向测序引物3ds1_sbt_ex9_f(序列：5’-cgtggctagtgttattccc-3’，nt13904～nt13922)，第九外显子反向测序引物3ds1_sbt_ex9_r(序列：5’-ggcctctgagaagggcgag-3’，nt14055～nt14073)。

八、所述测序反应休系组成均为：

九、所述测序反应的循环参数均为：

本发明基于各kir基因的基因组全长序列的结构特点、snps多态性分布以及外显子两翼内含子的长度，制定了科学、高效的kir基因pcr扩增策略。通过设计kir基因特异性pcr引物和测序引物、探索最佳的pcr扩增和测序反应条件，研究和建立kir基因家族中全部的14个功能性kir基因同步测序分型技术，适合于kir高分辨水平基因分型、群体遗传学、骨髓移植组织配型、疾病关联研究等领域。

本发明的贡献在于，首次建立了适合于高通量化、高分辨水平的14个功能性kir基因同步测序分型的方法。根据kir基因的结构特点，制定了科学的pcr扩增策略，设计了具有相近退火温度的kir基因特异性pcr引物，可以在同一pcr扩增条件下进行同步扩增，并且所需时间短，省时省力；由于pcr引物的特异性强，解决了因kir序列高度同源出现的非特异性扩增问题。扩增产物经电泳可直接鉴定kir基因的有无，无需采用商品化kir-ssp试剂盒进行检测。该方法可对每个功能性kir基因的全部外显子进行测序分型，解决了以往研究者报道的kir测序分型方法中的不足，并且所获得的序列中无背景信号和杂峰，易于识别和结果判读，为下一步的商品化、产业化奠定了良好的基础。

表314个功能性kir基因编码区结构及外显子长度

del：缺失外显子；pseudoexon：假外显子。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。

图1为14个功能性kir基因同步测序分型技术策略图；

设计采用3～5对kir基因特异性pcr引物(除了kir3dl3因缺失第6外显子仅用3对pcr引物、kir2dl1采用5对pcr引物外，其余的每个功能性kir基因均采用4对pcr引物)，对每个功能性kir基因的全部编码区进行特异性pcr扩增。纯化后的pcr扩增产物，分别通过十六条(kir2dl1～5、2ds1～5和kir3dl3)或十八条(kir3dl1～2和kir3ds1)特异性正向和反向测序引物对每一外显子序列进行双向测序反应。

图2为实施例1的kiraa1基因组合型样本的pcr扩增产物琼脂糖凝胶电泳效果图。m：dl2000marker；a1：amplicon1，扩增第1外显子至第2外显子目的基因片段；a2：amplicon2，扩增3dl1～3、3ds1、2dl4～5的第3外显子至第5外显子目的基因片段以及kir2dl1～3和kir2ds1～5的第4外显子至5外显子目的基因片段。特别地，kir2dl1采用两对pcr引物分别扩增第4外显子(amplicon2-1)和第5外显子(amplicon2-2)；a3：amplicon3，扩增第6外显子目的基因片段；a4：amplicon4，扩增第7外显子至第9外显子目的基因片段；

图3-1至图3-7分别依次对应是实施例1的kiraa1基因组合型样本的kir2dl1、2dl3、2dl4、2ds4、3dl1、3dl2、3dl3全编码区测序序列导入assign3.5或4.7分析软件效果图，该样本kir基因型为kir2dl1*00302-2dl3*00101-2dl4*00102,011-2ds4*00101,010-3dl1*00501,01502-3dl2*00201,010-3dl3*00901,010；

图4是实施例2的kirab6基因组合型样本的pcr扩增产物琼脂糖凝胶电泳效果图。m：dl2000marker；a1：amplicon1，扩增第1外显子至第2外显子目的基因片段；a2：amplicon2，扩增3dl1～3、3ds1、2dl4～5的第3外显子至第5外显子目的基因片段以及kir2dl1～3和kir2ds1～5的第4外显子至5外显子目的基因片段。特别地，kir2dl1采用两对pcr引物分别扩增第4外显子(amplicon2-1)和第5外显子(amplicon2-2)；a3：amplicon3，扩增第6外显子目的基因片段；a4：amplicon4，扩增第7外显子至第9外显子目的基因片段；

图5-1至图5-14是实施例2的kirab6样本的14个功能性kir基因全编码区测序序列导入assign3.5或4.7分析软件效果图，该样本kir基因型为“kir2dl1*00302,00401-2dl2*00301-2dl3*00101-2dl4*00102,00501-2dl5a*00101,b*010-2ds1*00201-2ds2*00101-2ds3*00101-2ds4*00101-2ds5*00201-3dl1*01502-3dl2*00201,00701-3dl3*01002-3ds1*01301”。图中示kir2ds4*001纯合子样本测序分型结果：2ds4*001等位基因的第5外显子无22bp缺失，序列导入后可见第5外显子正向测序在编码区nt454及下游位置无碱基错位(图5-9a)，反向测序在nt475及上游位置亦无碱基错位(图5-9b)。

本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。

具体实施方式

实施例1

本实施例随机选择一例经商品化kir-ssp试剂盒检测为kiraa1基因组合型(kir2dl1-2dl3-2dl4-2ds4-3dl1-3dl2-3dl3)的样本，采用本发明对该样本进行14个功能性kir基因同步测序分型，以验证本发明的实施效果。

首先分别采用kir基因特异性pcr扩增引物对每个功能性kir基因的全部编码区进行pcr扩增。扩增反应于abi9700pcr仪进行，扩增反应体系组成均为：

所述pcr扩增反应均可在同一循环参数条件下进行同步扩增，其循环参数为：

取2μlpcr产物，经核酸染料染色，于2％琼脂糖凝胶中电泳，对照takaradl2000dna分子标记，在凝胶成像系统中观察特异性pcr扩增产物条带，pcr扩增产物条带清晰、特异，可明确地判读该样本的基因组合为“kir2dl1-2dl3-2dl4-2ds4-3dl1-3dl2-3dl3”，其电泳效果见图2。

电泳结果显示kir2dl1、2dl3、2dl4、2ds4、3dl1、3dl2和3dl3等7个功能性kir基因的各泳道均出现特异性条带，其余的kir2dl2、2dl5、2ds1、2ds2、2ds3、2ds5、3ds1等7个功能性kir基因的各泳道均无任何条带，符合kiraa1基因组合型。

电泳检出了特异性pcr扩增条带的上述7个kir基因，进一步将pcr扩增产物进行纯化反应，其纯化反应体系组成均为：

所述pcr扩增产物的纯化反应均可在同一循环参数条件下进行纯化，其循环参数为：

37℃45min，

85℃15min，

4℃infinite。

纯化反应结束后，用3倍体积的无菌去离子水稀释pcr产物，并混合均匀。

pcr产物经电泳检出特异性扩增条带的各kir基因，分别通过十六条(kir2dl1、2dl3、2dl4、2ds4和kir3dl3)或十八条(kir3dl1～2)特异性正向和反向测序引物，对纯化和稀释后的扩增产物进行双向测序反应，每个测序反应体系如下：

测序反应的循环参数均为：

测序反应结束后，测序产物采用乙醇/naoac/edta沉淀法进行纯化，最后加入15μl超纯甲酰胺溶液(hi-diformamide)，在pcr扩增仪上95℃变性2.5min。纯化后的测序产物于abi3730基因测序仪毛细管电泳检测并收集电泳后的序列数据信息。将该样本测得的所有序列导入assign3.5或4.7(conexiogenomics，westernaustralia)分析软件(图3)中，可清晰地判定该受检者kir基因型为“kir2dl1*00302-kir2dl3*00101-kir2dl4*00102,011-kir2ds4*00101,010-kir3dl1*00501,01502-kir3dl2*00201,010-kir3dl3*00901,010”。

图3-4中示kir2ds4*00101，010杂合子样本测序分型结果：因2ds4*010等位基因第5外显子存在22bp缺失，而2ds4*00101则无22bp缺失，结果第5外显子正向测序在编码区nt454及下游位置出现碱基错位(图3-4a)，反向测序在nt475及上游位置出现碱基错位(图3-4b)。

实施例2

本实施例给出了随机选择一例经商品化kir-ssp试剂盒检测为kiraa6基因组合型(即携带全部的14个功能性kir基因)的样本，采用本发明对该样本进行14个功能性kir基因同步测序分型，以验证本发明的实施效果。

首先分别采用kir基因特异性pcr扩增引物对每个功能性kir基因的全部编码区进行pcr扩增。扩增反应于abi9700pcr仪进行，扩增反应体系组成均为：

所述pcr扩增反应均可在同一循环参数条件下进行同步扩增，其循环参数为：

取2μlpcr产物，经核酸染料染色，于2％琼脂糖凝胶中电泳，对照takaradl2000dna分子标记，在凝胶成像系统中观察特异性pcr扩增产物条带，pcr扩增产物条带清晰、特异，可明确地判读该样本的基因组合为“kir2dl1–2dl2-2dl3-2dl4-2dl5-2ds1-2ds2-2ds3-2ds4-2ds5-3dl1-3dl2-3dl3-3ds1”，其电泳效果见图4。

电泳结果显示kir2dl1、kir2dl2、2dl3、2dl4、2dl5、2ds1、2ds2、2ds3、2ds4、kir2ds5、3dl1、3dl2、3dl3和3ds1等14个功能性kir基因的各泳道均检出特异性条带，符合kirab6基因组合型。

电泳检出的全部14个功能性kir基因，进一步将pcr扩增产物进行纯化反应，其纯化反应体系组成均为：

所述pcr扩增产物的纯化反应均可在同一循环参数条件下进行纯化，其循环参数为：

37℃45min，

85℃15min，

4℃infinite。

纯化反应结束后，用3倍体积的无菌去离子水稀释pcr产物，并混合均匀。

pcr产物经电泳检出特异性扩增条带的各kir基因，分别通过十六条(kir2dl1～5、2ds1～5和kir3dl3)或十八条(kir3dl1～2和kir3ds1)特异性正向和反向测序引物，对纯化和稀释后的扩增产物进行双向测序反应，每个测序反应体系如下：

测序反应的循环参数均为：

测序反应结束后，测序产物采用乙醇/naoac/edta沉淀法进行纯化，最后加入15μl超纯甲酰胺溶液(hi-diformamide)，在pcr扩增仪上95℃变性2.5min。经纯化后的测序产物于abi3730基因测序仪毛细管电泳检测并收集电泳后的序列数据信息。

该样本测得的所有序列导入assign4.7sbt(conexiogenomics，westernaustralia)软件(图5-1～5-14)中，可清晰地判定该受检者的kir基因型为“kir2dl1*00302,00401-kir2dl2*00301-kir2dl3*00101-kir2dl4*00102,00501-kir2dl5a*00101,b*010-kir2ds1*00201-kir2ds2*00101-kir2ds3*00101-kir2ds4*00101-kir2ds5*00201-kir3dl1*01502-kir3dl2*00201,00701-kir3dl3*01002-kir3ds1*01301”。

图5-9中示kir2ds4*00101纯合子样本测序分型结果：2ds4*00101等位基因的第5外显子无22bp缺失，序列导入后可见第5外显子正向测序在编码区nt454及下游位置无碱基错位(图5-9a)，反向测序在nt475及上游位置亦无碱基错位(图5-9b)。

实施例3

本实施例给出采用本发明对306例南方汉族健康无关个体进行14个功能性kir基因同步测序分型的群体遗传学调查的实例。

针对每例样本，分别采用kir基因特异性pcr扩增引物对每个功能性kir基因的全部编码区进行pcr扩增。扩增反应于abi9700pcr仪进行，扩增反应体系组成均为：

所述pcr扩增反应均可在同一循环参数条件下进行同步扩增，其循环参数为：

取2μlpcr产物，经核酸染料染色，于2％琼脂糖凝胶中电泳，对照takaradl2000dna分子标记，在凝胶成像系统中观察特异性pcr扩增产物条带，pcr扩增产物条带清晰、特异，可明确地判读每一样本kir基因的有无。

琼脂糖凝胶电泳检出特异性条带的每个kir基因，进一步将pcr扩增产物进行纯化反应，其纯化反应体系组成均为：

所述pcr扩增产物的纯化反应均可在同一循环参数条件下进行纯化，其循环参数为：

37℃45min，

85℃15min，

4℃infinite。

纯化反应结束后，用3倍体积的无菌去离子水稀释pcr产物，并混合均匀。

pcr产物经电泳检出特异性扩增条带的各kir基因，分别通过十六条(kir2dl1～5、2ds1～5和kir3dl3)或十八条(kir3dl1～2和kir3ds1)特异性正向和反向测序引物，对纯化和稀释后的扩增产物进行双向测序反应，每个测序反应体系如下：

测序反应的循环参数均为：

测序反应结束后，测序产物采用乙醇/naoac/edta沉淀法进行纯化，最后加入15μl超纯甲酰胺溶液(hi-diformamide)，在pcr扩增仪上95℃变性2.5min。经纯化后的测序产物于abi3730基因测序仪毛细管电泳检测并收集电泳后的序列数据信息。

将各样本测得的所有序列导入assign3.5或者4.7(conexiogenomics，westernaustralia)分析软件中，可清晰地判定全部14个功能性kir基因中检出的等位基因(见表6)，统计获得了各等位基因的检出频率(见表7)。

以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。

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<213>人工序列

<400>1

gttcgggaggttggatctc19

<210>2

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>2

cacactgcagcccctaccg19

<210>3

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>3

tgattctcctgagtctccagagg23

<210>4

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>4

tggaaggagaagaggcagtttcc23

<210>5

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>5

ctggcagggacctacagatgc21

<210>6

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>6

ggacagccatgggctttcctc21

<210>7

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>7

tcctgattgtgagttcttggcat23

<210>8

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>8

tgagtcagtsagtcgaartgtgc23

<210>9

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>9

cctcagcacgttctatggttact23

<210>10

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>10

tgtgattgcagcctcaagtagac23

<210>11

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>11

agaggttggatctgagacgtc21

<210>12

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>12

ggaccgatggagaagttggct21

<210>13

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>13

gaggctactagagacagagggac23

<210>14

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>14

cccaagcttcgtcttctctct21

<210>15

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>15

catgccaacatcatgctgtc20

<210>16

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>16

tccctgtcctagcctccatac21

<210>17

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>17

gaagttccacttgccaaggaatg23

<210>18

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>18

cagctgctggtacatgggagc21

<210>19

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>19

ggcygmctgtctgcacaga19

<210>20

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>20

ggtttcctgttgctgctgtag21

<210>21

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>21

agagaagagggagggagacagat23

<210>22

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>22

gccatcctgtgccctgatc19

<210>23

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>23

cccacctcaggctctcaaagg21

<210>24

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>24

ggcgtacaatgtcagagctgc21

<210>25

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>25

actgagaaagcaggagaaagctg23

<210>26

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>26

ccttcagattccagctgctgg21

<210>27

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>27

gtggtcaatgtgtcaactgcacg23

<210>28

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>28

cacaggctccaaggattacaatg23

<210>29

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>29

ctttcttccccatggctgagttg23

<210>30

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>30

cttgggcaacaagagtgaaacgc23

<210>31

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>31

aacctctacctccaggattcaag23

<210>32

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>32

gtaagtggaagtgtcatgtgcac23

<210>33

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>33

ccaagaaatgagagacaatccac23

<210>34

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>34

aggcaccagatttgtggtgtg21

<210>35

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>35

tcatagtgaaggacgygaggtgc23

<210>36

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>36

agccaatgtgtgaaccacaatac23

<210>37

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>37

caggacaagcccttgctgtct21

<210>38

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>38

gacagaaacaagcagtgggtcac23

<210>39

<211>25

<212>dna

<213>人工序列

<400>39

catttcctcacctctctcctgtcct25

<210>40

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>40

aagagcagaggccaaatgcatcg23

<210>41

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>41

cagatgttgtatgtgcttagctg23

<210>42

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>42

ggttttgagacagggctgttgtc23

<210>43

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>43

catagtgaaggacgctaggtgta23

<210>44

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>44

gagccctctgacctgtgaccg21

<210>45

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>45

gttcctcttccacccccacac21

<210>46

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>46

gagggtttggaggtgccctgtcg23

<210>47

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>47

tcctgattgtgagttcttggcat23

<210>48

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>48

gtctcctagattccagttacgcc23

<210>49

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>49

cgtggaaaaggcaattcccga21

<210>50

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>50

ggaggtggaacagcacgtgtc21

<210>51

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>51

tgagaggttggatctgagacgtc23

<210>52

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>52

acatccaggctcttatcagcctt23

<210>53

<211>24

<212>dna

<213>人工序列

<400>53

gcttccatgcttctgataattttg24

<210>54

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>54

ctctgggtctctcctgaccgt21

<210>55

<211>24

<212>dna

<213>人工序列

<400>55

cattctgctccgttgttctatgtc24

<210>56

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>56

gccagggttgcttcatgacctat23

<210>57

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>57

gataggccatggggaggtaaatt23

<210>58

<211>24

<212>dna

<213>人工序列

<400>58

gggcagacatgtttatttgaaggc24

<210>59

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>59

tgtaaactgcatgggcaggga21

<210>60

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>60

ctctgacctgtgaccatgatcag23

<210>61

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>61

ctgagcccagcggcaaggc19

<210>62

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>62

atccctccctcacaccgagga21

<210>63

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>63

taccagggttctcctttctctag23

<210>64

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>64

aggaaggggaccaggagcg19

<210>65

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>65

tgatgttgaaggaagaggctctt23

<210>66

<211>24

<212>dna

<213>人工序列

<400>66

gatagtctgaggggaggtggaact24

<210>67

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>67

accatgtcgctcatggtcatcat23

<210>68

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>68

ttgtcctgaccaccttggggt21

<210>69

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>69

tcagttcatacctcctgccaagg23

<210>70

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>70

cgtggtcaggagttccagagc21

<210>71

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>71

ctggactcccagggcccaatg21

<210>72

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>72

aaggtttccacctccccaggg21

<210>73

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>73

gaaagcccgctgaatcctc19

<210>74

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>74

gcagaaggctgaaagatagtctg23

<210>75

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>75

tgagaacaatttccaggaagccg23

<210>76

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>76

cctttcctgtggacacttgtc21

<210>77

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>77

tcctgccaaggattccaattcga23

<210>78

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>78

tctgtccatgcttctctccatcc23

<210>79

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>79

cttgaagtctcaagacagtgggt23

<210>80

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>80

atgcacttcatactttgagctag23

<210>81

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>81

tgatgtkgaaggaagaggctctg23

<210>82

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>82

aggggaggtggaactgcatgaga23

<210>83

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>83

cgaggtgtcaattctagtgagag23

<210>84

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>84

taccacaaacatggcagcg19

<210>85

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>85

cacccaggtgtggtaggagcc21

<210>86

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>86

ctctgtgtgggtgagaggccatg23

<210>87

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>87

gcctgtaataccactactcgggt23

<210>88

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>88

ctaaaacacctcgccctcatc21

<210>89

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>89

gctataactgagaaagcaggagg23

<210>90

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>90

ctggaaaatagtccgaagaaagg23

<210>91

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>91

tgcaaggtggcaattgtagtcac23

<210>92

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>92

cgacgatagtgacactgaagagc23

<210>93

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>93

cctcctctctaaggcagtgcctc23

<210>94

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>94

cgggttttcctcacctgtgacag23

<210>95

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>95

gacagggcacctccaaaccctct23

<210>96

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>96

attttagcccagtgacatgcacg23

<210>97

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>97

gcaggagaaagctgggtctcc21

<210>98

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>98

ctggttttgagacagggctgttg23

<210>99

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>99

acaacatcctgtgtgctgctgaa23

<210>100

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>100

gtcaaccccctgtgtcgcctg21

<210>101

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>101

ggaaccacagtcatgaccctgac23

<210>102

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>102

aaagggtgtaggcgttgctgg21

<210>103

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>103

tgagccagtccctcaaggctc21

<210>104

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>104

gttttactgctgacagaaggctg23

<210>105

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>105

cgaggtgtcaattctagtgagag23

<210>106

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>106

cctgtgaccatgatcaccat20

<210>107

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>107

cagctgacacttgttgtagggag23

<210>108

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>108

agtggcatgatctcggctcag21

<210>109

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>109

tgatccgcccacctccgct19

<210>110

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>110

gctgggaggtttgagccaacg21

<210>111

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>111

gctataactgagaaagcaggagg23

<210>112

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>112

gaaggctgaaagctagtctgagg23

<210>113

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>113

cgtgttccgctcttgagcg19

<210>114

<211>18

<212>dna

<213>人工序列

<400>114

cactccctccctctattg18

<210>115

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>115

ttcttgggtgcaggtaggc19

<210>116

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>116

accctggtccccacagaac19

<210>117

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>117

aaggggaagcctgactcaa19

<210>118

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>118

ccaattcctggatcattcac20

<210>119

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>119

gttctcagctcaggtgaag19

<210>120

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>120

aaacaagcagtgggtcacttgac23

<210>121

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>121

tttccactgagtggaggac19

<210>122

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>122

tggagttcggagatggtgg19

<210>123

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>123

atgtggttacctgtcaatc19

<210>124

<211>18

<212>dna

<213>人工序列

<400>124

cctgcttccccacatggc18

<210>125

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>125

ctcagccacctatggtctc19

<210>126

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>126

tctctgtgtgaaaacgcag19

<210>127

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>127

acagaacagcgaatagcga19

<210>128

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>128

taagatgcagactcatgcc19

<210>129

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>129

agaggttggatctgagacgtc21

<210>130

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>130

tctccaactctgggccccg19

<210>131

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>131

ttcttgggtgcaggtaggc19

<210>132

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>132

cccagtctaaccctggtcc19

<210>133

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>133

aaggggaagcctcactcat19

<210>134

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>134

ggcccctgtgtctgtcctc19

<210>135

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>135

gctgtgacaaggaagatcc19

<210>136

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>136

aagctcctcagctaaggct19

<210>137

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>137

atcccaggactcccagggc19

<210>138

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>138

ggcgtacaatgtcagagctgc21

<210>139

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>139

atctgggtgcttgtcctaa19

<210>140

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>140

cctctgcttcgtgagacttac21

<210>141

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>141

cccagaagtgccctccgag19

<210>142

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>142

tctctgtgtgaaaacgcag19

<210>143

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>143

acagaacagcgaatagcga19

<210>144

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>144

ggctgttgtctccctagaagacg23

<210>145

<211>17

<212>dna

<213>人工序列

<400>145

cygmctgtctgcacaga17

<210>146

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>146

tctccaactctgggccccg19

<210>147

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>147

ttcttgggtgcaggtaggc19

<210>148

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>148

accctggtccccacagaac19

<210>149

<211>18

<212>dna

<213>人工序列

<400>149

cagcaaggggaagcctca18

<210>150

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>150

ggcccctgtgtctgtcctc19

<210>151

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>151

gagcattaggtcatagagc19

<210>152

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>152

ctctctgcatctgtccatgcttc23

<210>153

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>153

tactcaggagtttgaggcc19

<210>154

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>154

ggcgtacaatgtcagagctgc21

<210>155

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>155

tctgggtgcttgtcctaaagg21

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<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>156

caggcaatggtctgtgagc19

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<211>17

<212>dna

<213>人工序列

<400>157

cttcatcgctggtgctg17

<210>158

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>158

gctgagtgagggagggtgc19

<210>159

<211>17

<212>dna

<213>人工序列

<400>159

cccagcctcgtggctag17

<210>160

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>160

ggcaggagacaactttggatcw22

<210>161

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>161

gtggtcaatgtgtcaactgcacg23

<210>162

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>162

cctgagccactgggcgcca19

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<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>163

gagccatgttctgaagcaagt21

<210>164

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>164

caccctctgtgctgcctcc19

<210>165

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>165

tactcctctctgaggcggc19

<210>166

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>166

ccagaagctctgggactca19

<210>167

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>167

gggaggggagctgtgacaa19

<210>168

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>168

gcttctctccatcatcagc19

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<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>169

caggcatcctcattgccac19

<210>170

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>170

tggcaggtgctgagccaac19

<210>171

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>171

tcgccagacacctgcatgc19

<210>172

<211>14

<212>dna

<213>人工序列

<400>172

tttggagcaccagc14

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<211>19

<212>dna

<213>人工序列

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gaggacccagaagtgccct19

<210>174

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>174

ctggagagagggaaatcct19

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<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>175

ccagcctcatggatacagtct21

<210>176

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>176

ggaagagtgatgctctaagatgg23

<210>177

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>177

ccaaataacatcctgtgcgct21

<210>178

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>178

agatctccatccccgcact19

<210>179

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

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cagcaagggcctggctacc19

<210>180

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>180

gaaaatcccccaccgggct19

<210>181

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>181

acaagcccttgctgtctgcct21

<210>182

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>182

cagatgctctgggattcag19

<210>183

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>183

caggtgtgaggggagctgt19

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<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>184

cgggtctgaccactcatagggt22

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<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>185

tcacctctctcctgtcctgtgt22

<210>186

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>186

tgagccaatgcttgaatccaaga23

<210>187

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>187

atccataaagaggaactgctata23

<210>188

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>188

ccttggtccagggaccatc19

<210>189

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>189

cacctacggcctcccgctg19

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<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>190

gagggtgctcacattcttcaa21

<210>191

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>191

tgccggggacagaacagtg19

<210>192

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>192

ctcaaggcctgactgtggtgctt23

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<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>193

ctcccatgatgtggtcaac19

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<211>18

<212>dna

<213>人工序列

<400>194

ctccaaccccacactccc18

<210>195

<211>18

<212>dna

<213>人工序列

<400>195

tcttgggtgcaggtaggc18

<210>196

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>196

ctgccaagggaatgaaagg19

<210>197

<211>18

<212>dna

<213>人工序列

<400>197

gtgccatggatgggatga18

<210>198

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>198

caagtcctggatcattcac19

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<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>199

agagcaggggagtgagttc19

<210>200

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>200

ggctctaggatcataggac19

<210>201

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>201

tcctcaaagatttccactgagtg23

<210>202

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>202

gtgagatgctgagtcaacgc20

<210>203

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>203

gtggttacctgccaatcaag20

<210>204

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>204

tgaggaacacacatccgcgt20

<210>205

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>205

atggcctccccctgtttgt19

<210>206

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>206

gggaataagactagccacg19

<210>207

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>207

ctcctcggcccagcctcgt19

<210>208

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>208

tcccctcaaggcctgactg19

<210>209

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>209

ataacatcctgtgcgctgc19

<210>210

<211>18

<212>dna

<213>人工序列

<400>210

caactctgggccccgatc18

<210>211

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>211

aagggagtcctggtttgcc19

<210>212

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>212

gtcagaaatgtgggccgag19

<210>213

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>213

accttctaaactcacaacc19

<210>214

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>214

cactctgcagcccaatgac19

<210>215

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>215

agagcaggggagtgagttc19

<210>216

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>216

gaagctcctcagctaaggc19

<210>217

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>217

ccagggcccaatattagat19

<210>218

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>218

tgagtcaacgcctgaatcc19

<210>219

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>219

gccaatcaagaaatgcgag19

<210>220

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>220

gtcctgcctctgtggctcc19

<210>221

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>221

atgaggacccagaagtgcc19

<210>222

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>222

cctcctgatggtcttgttc19

<210>223

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>223

aggtaggtgctcctcggcc19

<210>224

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>224

agaagatcccctcaaggcc19

<210>225

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>225

cagggagccaaataacatc19

<210>226

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>226

cgctccctccctctattcc19

<210>227

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>227

gccgagagccctgttcttg19

<210>228

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>228

acaggacttccctcccgtt19

<210>229

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>229

agagagacaccttctaaat19

<210>230

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>230

atcattcactctgtgtccg19

<210>231

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>231

aggaagatcctccataagg19

<210>232

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>232

ggctctaggatcataggac19

<210>233

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>233

tcccagggcccaatattag19

<210>234

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>234

cactgagccctgtgttggg19

<210>235

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>235

gtgcttgtcctaaagagacgt21

<210>236

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>236

tgagtggctgcaggggacg19

<210>237

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>237

gacctcaggcacctatggc19

<210>238

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>238

gctgagtgagggagggtgc19

<210>239

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>239

cggcccagcctcgtggcta19

<210>240

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>240

tgtcttgggcctctgagaagggg23

<210>241

<211>18

<212>dna

<213>人工序列

<400>241

accatgtcgctcatggtc18

<210>242

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>242

ggctcatcactccatctct19

<210>243

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>243

gaaggggctggctatcaag19

<210>244

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>244

gacttccctcccgtttcag19

<210>245

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>245

agagagacaccttctaaac19

<210>246

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>246

cacctgggtctccaagtcc19

<210>247

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>247

agttctcaggtcaggtgtg19

<210>248

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>248

ggaagctcctcagctaagg19

<210>249

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>249

ctggactcccagggcccaatg21

<210>250

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>250

ttccacctccccagggttc19

<210>251

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>251

cgccatttgggtgcttgtc19

<210>252

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>252

ggtgaggaacacacatccg19

<210>253

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>253

agtctgctgttggcaactg19

<210>254

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>254

cctcctgatggtcttgttc19

<210>255

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>255

ctcggcccagcctcgtggc19

<210>256

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>256

caactttggatctgggctc19

<210>257

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>257

ggcgccaaataacatcctg19

<210>258

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>258

gcccagatctccatccccg19

<210>259

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>259

ggcactgagkgtgagtttc19

<210>260

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>260

tgacaggacttccctcccg19

<210>261

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>261

gacaccttctaaattcacaaac22

<210>262

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>262

ctctgcatcccaatgacaatg21

<210>263

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>263

cctccctgaggaaaatgcc19

<210>264

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>264

tcataggacatgggacagc19

<210>265

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>265

cagggcccaatattagataac21

<210>266

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>266

ggagtatctggagttcggaga21

<210>267

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>267

ctgtcaatcaagaaatgcgag21

<210>268

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>268

ggaacacacacccgcgtgc19

<210>269

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>269

agatagaatgtctgagtctgc21

<210>270

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>270

acacagtgatccaattatgcg21

<210>271

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>271

ggtaggtgctcctcggccc19

<210>272

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>272

atgggagctggcaacccgg19

<210>273

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>273

cagggcgccaaataacatc19

<210>274

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>274

cagatctccatccccgcac19

<210>275

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>275

agggcctggctgccaagac19

<210>276

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>276

aatgtgggccgagcatccg19

<210>277

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>277

ggggagaatcttctgggcact21

<210>278

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>278

tgatgggaccctgacggac19

<210>279

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>279

tggaggcacctgcaccagg19

<210>280

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>280

tggtacagacctcaccaag19

<210>281

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>281

caggtatgaggggagctatg20

<210>282

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>282

cctgtctgccatcctgcgc19

<210>283

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>283

aagcaccctcatttcctcac20

<210>284

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>284

caacacttgcatccaaggc19

<210>285

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>285

cccgccatctgggtgcttg19

<210>286

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>286

tcctgcttccccacatggc19

<210>287

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>287

ccagaagtgccctccgagc19

<210>288

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>288

tgtttgggaataacactagcc21

<210>289

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>289

cgtggctagtgttattccc19

<210>290

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>290

atgggagctggcaactcgg19

<210>291

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>291

gccaaataacatcctgtgcgc21

<210>292

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>292

taggccgagatctccatcc19

<210>293

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>293

gaggctaagtttaccttcagc21

<210>294

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>294

gacttccctcctgtttcag19

<210>295

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>295

ggcccagcactgtggtgcc19

<210>296

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>296

gcccatttcccctgtattc19

<210>297

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>297

gagagatgccttctaaact19

<210>298

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>298

tctccataagaatcccacgct21

<210>299

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>299

cctccctgaggaaactgcc19

<210>300

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>300

gaaagagccgaagcatctg19

<210>301

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>301

caacctcaaagatttccattg21

<210>302

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>302

caacacttgcatccaaggc19

<210>303

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>303

gagatgttccatgtggttacc21

<210>304

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>304

ggaacacacacccgcgtgc19

<210>305

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>305

tctgagtctggatgttggc19

<210>306

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>306

gggtcttgttcatcagagtcc21

<210>307

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>307

cctcggcccagcctcacgg19

<210>308

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>308

gactgtggtgctcgtgggc19

<210>309

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>309

acaacatcctgtgtgctgctgaa23

<210>310

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>310

tccctccctcgattccctt19

<210>311

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>311

gatgtacagatggatcatc19

<210>312

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>312

gtcaaccccctgtgtcgcctg21

<210>313

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>313

gctccacatcctcctctct19

<210>314

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>314

atccccctttaccccaaat19

<210>315

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>315

gggaagcctcacttatttcag21

<210>316

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>316

acctggggcttccagtcct19

<210>317

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>317

gagagctgtgacaasgaag19

<210>318

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>318

gcaggaagctcctcagcta19

<210>319

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>319

gtgagacaattcatataga19

<210>320

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>320

tgcttccccacatggccct19

<210>321

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>321

gacctcaggcacctatggc19

<210>322

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>322

gagtgagggagggtgctca19

<210>323

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>323

crtggctagtcttattccc19

<210>324

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>324

ccctagaagatcccatcaa19

<210>325

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>325

aagccatgctccgctcttg19

<210>326

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>326

cagatctccatccccgcac19

<210>327

<211>18

<212>dna

<213>人工序列

<400>327

agtgggggcagcagggtg18

<210>328

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>328

aatgtgggccgagcatccg19

<210>329

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>329

ggggagaatcttctgggcact21

<210>330

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>330

tgatgggaccctgacggac19

<210>331

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>331

ggagagagacagacacggg19

<210>332

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>332

tggtacagacctcaccaag19

<210>333

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>333

caggtgtgaggggagctgt19

<210>334

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>334

cctgtctgccatcctgcgc19

<210>335

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>335

tcaagacagtgggcatcgcac21

<210>336

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>336

gggaggtttgagccaacgctt21

<210>337

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>337

cgctgtatgtggttacctgtg21

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<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>338

ggtgaggaacacacacccg19

<210>339

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>339

ccagaagtgccctccgagc19

<210>340

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>340

gctgagtgagggagggtgc19

<210>341

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>341

cgtggctagtgttattccc19

<210>342

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>342

ggcctctgagaagggcgag19