本发明涉及应用生物技术原理人工培育真菌的技术领域，具体涉及蛹虫草的培育，更具体地涉及一种蛹虫草液体菌种的培育方法和应用及其使用的培养基。
背景技术：
蛹虫草（cordycepsmilitaris）隶属于真菌界（fungi）、子囊菌门（ascomycota）、子囊菌纲（ascomycetes）、粪壳菌亚纲（sordariomycetidae）、肉座菌目（hypocreales）、麦角菌科（clavicipitaceae）、虫草属（cordyceps）。蛹虫草是非常著名的药食两用的子囊真菌，也是获得虫草素的主要来源，具有很高的开发利用价值。近年来，随着野生冬虫夏草资源的日渐枯竭，其价格不断攀升，从而促使人们寻找野生冬虫夏草的替代品。由于蛹虫草具有与冬虫夏草相近的药用与食用价值，加之蛹虫草更加容易驯化，因此受到人们越来越多的关注。
但是，由于传统工艺中液体配方的营养不全面，导致蛹虫草发菌慢，菌丝较易老化，长势弱，菌丝体色泽较暗，子实体产量低。因此，我们对液体菌种的培养液配方、液体菌种的培育方法进行了改良。
技术实现要素：
本发明提供了一种蛹虫草液体菌种的培育方法，该方法包括：
将蛹虫草的纯菌种接种到液体培养基中，摇床培养得到液体菌种；
所述液体培养基按照重量份数计，包括：马铃薯9-10份，鲜蚕蛹9-10份的浸出液，葡萄糖0.8-1份，蛋白胨0.8-1份，酵母浸粉0.8-1份，磷酸二氢钾0.09-0.1份，硫酸镁0.04-0.05份，脱脂蚕蛹粉0.09-0.1份，氢氧化钠0.0005-0.0006份，水45-60份，维生素b10.01-0.02份；
所述水的重量份数包含蚕蛹浸出液中的水。
本发明通过液体菌种的特定配方并结合摇床培养，可良好保持菌种的遗传特性，减少菌种在菌丝分解断裂中出现的退化，保持菌种活力和发菌速度，促进后续菌丝体的转色，增加子实体产量。解决了蛹虫草菌种退化、发菌弱、后期转色慢、子实体产量少等问题。
进一步，所述液体培养基按照重量份数计，包括：马铃薯9.5份，鲜蚕蛹9.5份的浸出液，葡萄糖0.95份，蛋白胨0.95份，酵母浸粉0.95份，磷酸二氢钾0.095份，硫酸镁0.048份，脱脂蚕蛹粉0.095份，氢氧化钠0.00057份，水47份，维生素b10.014份；所述水的重量份数包含蚕蛹浸出液中的水。
进一步，所述摇床培养的条件为：以200-250r/min摇床培养5-6天，培养温度为20-22℃。
进一步，所述蚕蛹浸出液为将鲜蚕蛹煮制25-35min后得到的蚕蛹过滤液。
进一步，所述马铃薯的蛋白质含量不低于3%，淀粉含量不低于13%，优选13%-15%。
进一步，所述蛋白胨的总氮含量不低于13.5%，氨基酸含量不低于3%。
进一步，所述脱脂蚕蛹粉的蛋白质含量为60%-80%，脂肪含量为5%-8%。
本发明蛹虫草液体菌种的培育方法可广泛用于蛹虫草的培育中，从而提高蛹虫草子实体的生产效率和产量。
本发明还提供一种培育蛹虫草的方法，包括：将上述蛹虫草液体菌种的培育方法制备的液体菌种转接至子实体培养基，继续进行培养。
进一步，将蚕蛹浸出液使用过的蚕蛹放入子实体培养基中。
本发明提供一种培育蛹虫草液体菌种的培养液，按照重量份数计，包括：马铃薯9-10份，鲜蚕蛹9-10份的浸出液，葡萄糖0.8-1份，蛋白胨0.8-1份，酵母浸粉0.8-1份，磷酸二氢钾0.09-0.1份，硫酸镁0.04-0.05份，脱脂蚕蛹粉0.09-0.1份，氢氧化钠0.0005-0.0006份，水45-60份，维生素b10.01-0.02份；所述水的重量份数包含蚕蛹浸出液中的水。
本发明上述的培养液可用于蛹虫草液体菌种的培育，使获得的菌种不易退化，保持菌种活力和发菌速度，促进后续菌丝体的转色，增加子实体产量。
具体实施方式
在蛹虫草的液体菌种培育方法中，按照不同的配方进行培养制作得到的菌种的退化程度和抵抗力不同。其将固体试管种转接到液体摇床培养液中，通过有一段时间的培养得到摇床液体菌种，再将液体菌种再转接到子实体培养基中，继续培养一段时间见光，进行子实体培养即可得到污染率低、高产的虫草子实体。通过不同的培养液培养的蛹虫草菌种的生长特性和子实体产量有很大差别，通过本发明培养液配方制作的液体菌种使得菌种菌丝体多，菌种特性稳定，能够高效的繁殖和生长。
本发明的实施例提供了一种采用特定配方的培养液进行蛹虫草液体菌种培育的方法，包括配制液体培养基，然后在无菌环境下将固体试管菌种转接到液体菌种中，再将液体菌种放置摇床上以250r/min摇制5-6天，避光培养温度为20-22℃，再将摇制好的液体菌种转接到子实体培养基上。
以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但这些内容不应理解为对本发明的限制。其中未具体载明的操作方法依照本领域的常规操作进行，使用的试剂、原料和菌种等均市售获得。其中培养基的组分如无特别说明，则购自北京奥博星。
实施例
首先配制液体培养基，具体包括：称取马铃薯200g，煮30min后滤掉残渣，得到马铃薯浸出液。将活蚕蛹200g放入锅中加入1200ml左右水进行煮制，大约30分钟后过滤得到蚕蛹浸出液。控制马铃薯浸出液和蚕蛹浸出液的液体总量为1000ml并混合到一起，然后分别加入葡萄糖20g、蛋白胨20g、酵母浸20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、脱脂蚕蛹粉2g、氢氧化钠0.012g、b10.3g，溶解搅拌均匀分装在500l三角瓶中，每瓶大约装取营养液200l，封口时在瓶口位置放一块2cm*2cm的无菌棉，以便为后期液体菌种增加氧气。
将装有液体的三角瓶放置于灭菌锅中，0.12-0.18mpa下进行蒸汽灭菌，温度为118-121℃灭菌30分钟，待压力降到常压时打开锅取出灭菌好的三角瓶营养液，然后取出放凉备用。
将灭菌好的三角瓶放入超净工作台中，在紫外线灯下灭菌30-40min，然后在超净工作台中将固体试管种转接到灭好的三角瓶中，再将三角瓶放到灭菌好的暗培室中，在摇床上以250r/min摇制6天，避光培养温度为21℃，即可得到摇制好的液体菌种。
将液体菌种接到子实体培养基中，进行发菌转色及子实体培养，40-55天得到子实体。
在本实施例中，液体培养基中添加了蚕蛹粉和蚕蛹浸出液可使菌种的遗传性得以良好的保持，减少菌种在菌丝分解断裂中出现的退化，使菌种保持最原始的状态。蚕蛹浸出液中使用过的蚕蛹可以放入子实体培养基中，再接种液体菌种进行子实体培养，这样可避免浪费。选择色泽、品相比较单纯的小麦或大米的子实体好，产量也相对高。
各培养基的原料经过严格的筛选，如蚕蛹粉、蛋白胨、活体蚕蛹和马铃薯都要求质量过关，为正规的生产厂家。其中，马铃薯的采购相对要严格一些：要求无腐烂、无霉变、无发芽、无损伤、无绿变、完整无损伤的新鲜马铃薯，其蛋白质含量为5%，淀粉含量为25%。蚕蛹选取当季活体蚕蛹：新鲜、大小均匀、无伤、无异味，使用前已进行清洗消毒。蛋白胨的总氮含量为18.5%，氨基酸含量为4.5%。脱脂蚕蛹粉的蛋白质含量为75%，脂肪含量为7%。
对比例
按照实施例的步骤培育蛹虫草，所不同的是采用以下组成的液体培养基：20%马铃薯，2%葡萄糖，0.2%蛋白胨，0.09%磷酸二氢钾，0.04%硫酸镁，余量为水，其中马铃薯的处理与实施例相同。并且，将对比例的菌种摇床培养8天，以使其更充分发菌。
比较实施例与对比例的发菌和采收情况，结果如下：实施例摇床培养6天，对比例摇床培养8天，但实施例的菌球仍明显比对比例的菌球更浓密、更均匀。比较转色时间，实施例接种的后期需要4天转色，而对比例接种的后期需要6天转色。最后比较采收的产量，实施例的平均产量为300g/盒，对比例的平均产量为270g/盒。
以上所述仅为本发明的优选实施方案，并不用于限制本发明，对于本领域的科技人员，本发明可以有更多的改变和变化，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换、改进均包含在本发明之内。