本发明提供了一种制备低分子量香菇多糖的方法，属于生物技术领域范畴。
背景技术：
香菇又名花菇、香蕈、香信、香菌、冬菇、香菰，为侧耳科植物香蕈的子实体。香菇是世界第二大食用菌，也是我国特产之一，在民间素有“山珍”之称。它是一种生长在木材上的真菌，人工种植的香菇也越来越多，其味道鲜美，香气沁人，营养丰富。中国历代医学家对香菇均有著名论述。现代医学和营养学不断深入研究，香菇的药用价值也不断被发掘，在开发具有抗肿瘤、抗病毒药品及相关保健食品方面具有广阔的应用前景。
香菇多糖是香菇中的一种有效活性成分，是一种以β-d(1→3)葡聚糖残基为主链，侧链为(1→6)葡聚糖残基的葡聚糖，是一种宿主免疫增强剂，能增强细胞免疫能力，具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能以及刺激干扰素形成等作用。
香菇多糖在医药、食品等行业都有着很广泛的应用，随着人们对天然产物的追求越来越高，香菇多糖的的市场需求量也在日益增大。香菇多糖特定的结构与免疫活性密切相关。据有关研究资料证明，增加香菇多糖溶解度有利于提高其生理活性，低分子量香菇多糖的溶解度高，其活性超过高分子量香菇多糖。因此，研究探索一种制备低分子量的香菇多糖制备工艺有着很强的现实意义。
本发明是根据香菇多糖的特殊理化性质，先对香菇进行预处理，选择了稀碱提取的方法，再结合浓缩萃取、醇沉、过滤干燥的方法，制备出低分子量香菇多糖。本发明提供的工艺新颖，操作简便，具有很好的实用性，且本发明制备出的香菇多糖分子量低，水溶性好，活性明显增高。
在现有的专利与文献中，未见相关低分子量香菇多糖制备方法的报道。
技术实现要素：
本发明目的在于提供了一种全新的制备低分子量香菇多糖的方法。
本发明的优势在于按照本发明提供的工艺，制备出的香菇多糖分子量低，水溶性好，生物活性高。
根据本发明的比较优选的实施方案，制备低分子量香菇多糖的方法包括如下步骤：
一种制备低分子量香菇多糖的方法，由以下步骤组成：
(1)取新鲜香菇，用清水洗净，干燥，粉碎，过300目筛，得香菇粉；
(2)将得到的香菇粉加入其质量6～18倍的碱溶液，在70～90℃条件下提取2～6h，重复2～3次，过滤，合并滤液得粗品提取液；
(3)将粗品提取液浓缩至一定体积，加入2倍质量的有机溶剂进行萃取，分层，取上清液，得香菇多糖提取液；
(4)将香菇多糖提取液中加入一定量浓度为95％的乙醇，醇沉，静置24～48h；
(5)将醇沉液过滤，得湿香菇多糖，干燥即得低分子量香菇多糖。
本发明步骤(2)中，所述的“碱溶液”可以为naoh，na2co3，nahco3水溶液的一种，质量百分比为0.1％～0.5％，优选0.3％的naoh水溶液。碱溶液浓度过高，香菇多糖成分极易被破坏；碱溶液浓度过低，香菇多糖成分提取不出来。
本发明步骤(3)中，所述的“浓缩液的体积”为原料质量的1～2倍，减少水的含量，有利于步骤(4)中进行醇沉，减少溶剂的浪费。
本发明步骤(4)中，所述的“一定量浓度为95％的乙醇”的质量为香菇多糖提取液的8～10倍，优选10倍。95％乙醇相对无水乙醇成本低，利用香菇多糖在一定乙醇浓度下沉淀析出的原理，浓度过低不易析出。
本发明步骤(5)中，所述的“干燥方法”为冷冻干燥或减压干燥，此干燥方式不易破坏活性成分，得到的低分子量香菇多糖的分子量在10000～50000。
本发明的有益效果：本发明提供的工艺新颖，操作简便，具有很好的实用性，且本发明制备出的香菇多糖分子量低，水溶性好，比一般的活性强。
具体实施方式
以下实施内容是为了对权利要求的技术特征给予说明，以便于提供对本发明的透彻理解。但是，本领域的技术人员会理解，即使没有这些特定细节也可以实施本发明。
实施例一：一种制备低分子量香菇多糖的方法，经过以下步骤制得：
(1)取新鲜香菇500g，用清水洗净，干燥，粉碎，过300目筛，得香菇粉492g；
(2)将得到的香菇粉400g，加入2400ml的0.3％的naoh水溶液，在80℃条件下提取6h，重复2次，过滤，合并滤液得粗品提取液；
(3)将粗品提取液浓缩至400ml，加入800ml乙酸乙酯-正丁醇进行萃取，分层，取上清液，得香菇多糖提取液350ml；
(4)将香菇多糖提取液中加入3500ml浓度为95％的乙醇，醇沉，静置48h；
(5)将醇沉液过滤，得湿香菇多糖，冷冻干燥即得低分子量香菇多糖。经检测，该香菇多糖分子量为12000。
实施例二：一种制备低分子量香菇多糖的方法，经过以下步骤制得：
(1)取新鲜香菇210g，用清水洗净，干燥，粉碎，过300目筛，得香菇粉200g；
(2)将得到的香菇粉200g，加入3600ml的0.4％的na2co3水溶液，在70℃条件下提取4h，重复2次，过滤，合并滤液得粗品提取液；
(3)将粗品提取液浓缩至300ml，加入600ml乙酸乙酯-正丁醇进行萃取，分层，取上清液，得香菇多糖提取液200ml；
(4)将香菇多糖提取液中加入1600ml浓度为95％的乙醇，醇沉，静置48h；
(5)将醇沉液过滤，得湿香菇多糖，减压干燥即得低分子量香菇多糖。经检测，该香菇多糖分子量为35000。
实施例三：一种制备低分子量香菇多糖的方法，经过以下步骤制得：
(1)原取新鲜香菇315g，用清水洗净，干燥，粉碎，过300目筛，得香菇粉300g；
(2)将得到的香菇粉300g，加入3000ml的0.3％的naoh水溶液，在80℃条件下提取4h，重复2.5次，过滤，合并滤液得粗品提取液；
(3)将粗品提取液浓缩至600ml，加入1200ml乙酸乙酯-正丁醇进行萃取，分层，取上清液，得香菇多糖提取液600ml；
(4)将香菇多糖提取液中加入5400ml浓度为92％的乙醇，醇沉，静置36h；
(5)将醇沉液过滤，得湿香菇多糖，冷冻干燥即得低分子量香菇多糖。经检测，该香菇多糖分子量为48000。
实施例四：一种制备低分子量香菇多糖的方法，经过以下步骤制得：
(1)取新鲜香菇425g，用清水洗净，干燥，粉碎，过300目筛，得香菇粉400g；
(2)将得到的香菇粉400g，加入2400ml的0.3％的na2co3水溶液，在80℃条件下提取6h，重复2次，过滤，合并滤液得粗品提取液；
(3)将粗品提取液浓缩至400ml，加入800ml乙酸乙酯-正丁醇进行萃取，分层，取上清液，得香菇多糖提取液350ml；
(4)将香菇多糖提取液中加入3500ml浓度为95％的乙醇，醇沉，静置48h；
(5)将醇沉液过滤，得湿香菇多糖，冷冻干燥即得低分子量香菇多糖。经检测，该香菇多糖分子量为26000。
实施例五：一种制备低分子量香菇多糖的方法，经过以下步骤制得：
(1)取新鲜香菇332g，用清水洗净，干燥，粉碎，过300目筛，得香菇粉300g；
(2)将得到的香菇粉300g，加入3600ml的0.4％的na2co3水溶液，在70℃条件下提取3h，重复2次，过滤，合并滤液得粗品提取液；
(3)将粗品提取液浓缩至300ml，加入600ml乙酸乙酯-正丁醇进行萃取，分层，取上清液，得香菇多糖提取液200ml；
(4)将香菇多糖提取液中加入1600ml浓度为95％的乙醇，醇沉，静置48h；
(5)将醇沉液过滤，得湿香菇多糖，减压干燥即得低分子量香菇多糖。经检测，该香菇多糖分子量为38000。
实施例六：一种制备低分子量香菇多糖的方法，经过以下步骤制得：
(1)取新鲜香菇542g，用清水洗净，干燥，粉碎，过300目筛，得香菇粉500g；
(2)将得到的香菇粉500g，加入3000ml的0.3％的naoh水溶液，在70℃条件下提取4h，重复2次，过滤，合并滤液得粗品提取液；
(3)将粗品提取液浓缩至600ml，加入1200ml乙酸乙酯-正丁醇进行萃取，分层，取上清液，得香菇多糖提取液600ml；
(4)将香菇多糖提取液中加入5400ml浓度为92％的乙醇，醇沉，静置36h；
(5)将醇沉液过滤，得湿香菇多糖，冷冻干燥即得低分子量香菇多糖。经检测，该香菇多糖分子量为28000。
实施例七：一种制备低分子量香菇多糖的方法，经过以下步骤制得：
(1)取新鲜香菇280g，用清水洗净，干燥，粉碎，过300目筛，得香菇粉200g；
(2)将得到的香菇粉200g，加入3600ml的0.4％的nahco3水溶液，在70℃条件下提取5h，重复2次，过滤，合并滤液得粗品提取液；
(3)将粗品提取液浓缩至300ml，加入600ml乙酸乙酯-正丁醇进行萃取，分层，取上清液，得香菇多糖提取液200ml；
(4)将香菇多糖提取液中加入1600ml浓度为95％的乙醇，醇沉，静置48h；
(5)将醇沉液过滤，得湿香菇多糖，减压干燥即得低分子量香菇多糖。经检测，该香菇多糖分子量为42000。
由上述实施例可以看出，实施例3的一种制备低分子量香菇多糖的方法提取效果最佳，产品得率最高。熟练的技术人员可以针对每个特定应用，以变通的方式实现所描述的功能，但是，这种实现决策不应解释为背离本公开的保护范围。