本发明涉及含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈类化合物及其制备方法和应用，具体为4-氯-5-(对甲基苯基)-1-(5-(取代苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)-1h-咪唑-2-甲腈类化合物及其制备方法和应用。
背景技术：
：：咪唑结构类化合物具有广泛的生物活性，如在医药领域具有抗肿瘤(journalofmedicinalchemistry.,2002,45(8):1697-1711)、抗炎(wo03030902.2003-04-17)、抗菌(bioorganic&medicinalchemistryletters.,1999,30(32):1023-1028)、抗癌(europeanjournalofmedicinalchemistry.,2010,45(7):2949-2956)、抗抑郁(iranianjournalofpharmaceuticalresearch.,2008,7(1):29-33)等活性；在农药领域常用作杀菌剂(europeanjournaloforganicchemistry.,2017,(3):695-703)、杀虫剂(pesticidebiochemistry&physiology.,1974,4(3):299-312)、除草剂(pesticidescience.,2015,50(4):297-311)等。此外1,3,4-噁二唑结构类化合物在农药和医药领域也具有广泛的应用，如杀菌(journalofagricultural&foodchemistry.,2002,50(13):3757-3760)、杀虫(wo9505368.1995-02-23)、除草(有机化学,2010,30(1):92-97)、抗肿瘤(europeanjournalofmedicinalchemistry.,2012,48(26):192-199)、抗真菌(bioorganic&medicinalchemistry.,2008,16(7):3632-3640)、抗炎(arzneimittelforschung.,2002,57(2):101-107)、抗疟疾(cheminform.,1999,30(43):572-576)及抗高血压(europeanjournalofmedicinalchemistry,2004,35(43):535-545)等活性。鉴于咪唑、1,3,4-噁二唑类化合物均具有良好的生物活性，利用活性亚结构拼接方法设计合成兼具两者结构的新型含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈化合物，有望具有较好的生物活性。本发明设计并合成的系列4-氯-5-(对甲基苯基)-1-(5-(取代苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)-1h-咪唑-2-甲腈类化合物，其结构以及生物活性研究均未见有文献报道。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈类化合物及其制备方法和应用，具体为4-氯-5-(对甲基苯基)-1-(5-(取代苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)-1h-咪唑-2-甲腈类化合物及其制备方法和应用。所述的一种含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈类化合物，其特征在于其结构如式（i）所示：，式（i）中，苯环上的h被取代基r单取代、多取代或不被取代，n为苯环上取代基r的个数，n为0~5的整数，n=0时，表示苯环上的h不被取代，即表示苯环上没有取代基，n=1时，表示苯环上的h被取代基r单取代，n=2~5时，表示苯环上的h被取代基rn多取代，不同取代位置上的取代基r相同或不同，所述取代基r为c1~c8的烷基或卤代烷基、c1~c3的烷氧基、卤素、硝基或氰基。所述的一种含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈类化合物，其特征在于所述的取代基r的个数为1~2个，即优选n=1~2所述的一种含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈类化合物，其特征在于r为c1~c5的烷基或取代烷基、甲氧基、f、cl、br、i、硝基或氰基，优选为甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、正戊基、甲氧基、f、cl、br、硝基或氰基；最优选为间甲基、对甲基、邻甲氧基、对甲氧基、2,4-二甲基、邻三氟甲基、对三氟甲基、4-ch2br、邻氟、间氟、对氟、邻氯、对氯、邻溴、对溴、邻碘、对碘、对氰基、2,3-二氯、2,6-二氯、2,3,5,6-四氟或2,3,4,5-四氟。所述的含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈类化合物的制备方法，其特征在于由如式（ⅱ）所示的4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1-碳酰肼与如式（ⅲ）所示的取代苯甲酸在三氯氧磷中于回流状态下进行环合反应，反应结束后，反应液经分离纯化制得如式（i）所示的含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈类化合物；，式（ⅲ）中的r与式（i）中的r相同，苯环上的h被取代基r单取代、多取代或不被取代，n为苯环上取代基r的个数，n为0~5的整数，n=0时，表示苯环上的h不被取代，n=1时，表示苯环上的h被取代基r单取代，n=2~5时，表示苯环上的h被取代基rn多取代，不同取代位置上的取代基r相同或不同，所述取代基r为c1~c8的烷基或卤代烷基、c1~c3的烷氧基、卤素、硝基或氰基。所述的含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈类化合物的制备方法，其特征在于式（ⅱ）所示的4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1-碳酰肼、式（iii）所示的取代苯甲酸及三氯氧磷的投料物质的量之比为1:1.0～1.3:10.0～300.0；优选为1:1.0~1.2:100.0～200.0。所述的含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈类化合物的制备方法，其特征在于采用tlc法监测反应完成情况，反应时间为3~12小时，具体反应时间与反应物有关。所述的含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈类化合物的制备方法，其特征在于反应液分离纯化方法为：反应结束后，反应液浓缩除去三氯氧磷，加入冰水搅拌析出固体，过滤、水洗、重结晶得到如式（i）所示的含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈类化合物。所述的含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈类化合物的制备方法，其特征在于重结晶用的溶剂为乙醇、乙酸乙酯、正己烷、石油醚中的一种或多种混合液。所述的含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈类化合物作为抗癌药物的应用。本发明在实施例中采用四氮唑快速比色法(mtt法)对制备得到的化合物进行了人肝癌细胞huh7(humanhepatomacellline)、人肺癌细胞a549(humanlungcancercellline)、人结肠癌细胞hct116(humancoloncancercellline)的抗癌活性测定。生测结果表明，化合物（i）对所有供试靶标均表现出一定的抑制活性；大部分化合物对人结肠癌细胞株hct116和对人肝癌细胞株huh7的抑制活性要比对人肺癌细胞株a549的抑制活性要好。通过采用上述技术，与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：本发明提供了一类新型的含咪唑和1,3,4-噁二唑结构的甲腈类化合物，该类化合物制备方法简单，后处理方便，得到的化合物均表现出较好的抗癌活性，如化合物ib，ih，ik，ir，is及it对人结肠癌细胞株hct116的抑制活性相对较好，其ic50分别为10.41±1.1、20.60±0.8、8.03±0.5、20.61±0.9、11.28±0.8、17.00±2.2μm。化合物id，ih，ik，ip对人肺癌细胞株a549的抑制活性相对较好，其ic50值分别为16.42±0.6、21.05±4.1、35.52±1.2、23.25±6.3μm。化合物is和iw的ic50值分别为10.06±0.8和17.14±1.7μm，对人肝癌细胞株huh7的抑制活性较好。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围并不限于此。实施例1化合物ia(r=h)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入15mlpocl3中，再加入苯甲酸（2.2mmol）回流反应，最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌3.5h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用乙醇重结晶得0.527g黄色固体化合物ia，收率73.2%。m.p.:104～106℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:8.14(d,j=7.0hz,2h),7.70(d,j=8.0hz,2h),7.62～7.50(m,4h),7.29(s,1h),2.40(s,3h);hrms(esi),m/zcalcdforc19h13cln5o[m+h]+362.0809;found,362.0805.实施例2化合物ib(r=间甲基)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入10mlpocl3中，再加入间甲基苯甲酸2.4mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌4.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用正己烷重结晶得0.481g黄色固体化合物ib，收率64.3%。m.p.:120～124℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:8.02(s,1h),7.99(d,j=7.5hz,1h),7.72(d,j=8.0hz,2h),7.44～7.40(m,2h),7.32(d,j=8.0hz,2h),2.46(s,3h),2.43(s,3h);hrms(esi),m/zcalcdforc20h15cln5o[m+h]+376.0965;found,376.0959.实施例3化合物ic(r=对甲基)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入13mlpocl3中，再加入对甲基苯甲酸2.3mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌3.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用乙酸乙酯和石油醚重结晶得0.480g黄色固体化合物ic，收率63.9%。m.p.:103～105℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:8.05(d,j=8.5hz,2h),7.70(d,j=8.0hz,2h),7.35(d,j=8.0hz,2h),7.30(d,j=8.0hz,2h),2.46(s,3h),2.41(s,3h);hrms(esi),m/zcalcdforc20h15cln5o[m+h]+376.0965;found,376.0957.实施例4化合物id(r=邻甲氧基)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入16mlpocl3中，再加入邻甲氧基苯甲酸2.1mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌4.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用正己烷重结晶得0.457g黄色固体化合物id，收率58.4%。m.p.:115～119℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:8.10(d,j=8.0hz,1h),7.69(d,j=8.0hz,2h),7.58(d,j=8.0hz,1h),7.49(td,j=7.5,1.5hz,1h),7.41(t,j=7.5hz,1h),7.28(d,j=8.5hz,2h),3.89(s,3h),2.41(s,3h);hrms(esi),m/zcalcdforc20h15cln5o2[m+h]+392.0914;found,392.0932.实施例5化合物ie(r=对甲氧基)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入15mlpocl3中，再加入对甲氧基苯甲酸2.3mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌3.5h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用乙醇重结晶纯化得0.464g黄色固体化合物ie，收率59.2%。m.p.:102～104℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:8.09(d,j=8.5hz,2h),7.72(d,j=8.0hz,2h),7.30(d,j=8.0hz,2h),7.02(d,j=8.0hz,2h),3.89(s,3h),2.41(s,3h);hrms(esi),m/zcalcdforc20h15cln5o2[m+h]+392.0914;found,392.0925.实施例6化合物if(r=2,4-二甲基)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入13mlpocl3中，再加入2,4-二甲基苯甲酸2.2mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌5.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用正己烷纯化得0.546g黄色固体化合物if，收率70.2%。m.p.:122～124℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:7.71～7.69.(m,2h),7.55(s,1h),7.20(d,j=8.0hz,2h),7.16(d,j=8.5hz,2h),2.37(s,6h),2.23(s,3h);hrms(esi),m/zcalcdforc21h17cln5o[m+h]+390.1122;found,390.1128.实施例7化合物ig(r=邻三氟甲基)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入15mlpocl3中，再加入邻三氟甲基苯甲酸2.4mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌3.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用乙酸乙酯和石油醚重结晶得0.615g黄色固体化合物ig,收率71.6%。m.p.:127～131℃;1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ:7.99～7.91(m,2h),7.86～7.81(m,2h),7.73(d,j=8.0hz,2h),7.30(d,j=8.0hz,2h),2.35(s,3h);hrms(esi),m/zcalcdforc20h12clf3n5o[m+h]+430.0682;found,430.0687.实施例8化合物ih(r=对三氟甲基)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入10mlpocl3中，再加入对三氟甲基苯甲酸2.3mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌4.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用乙醇重结晶得0.638g黄色固体化合物ih，收率74.2%。m.p.:123～126℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:8.31(d,j=8.0hz,2h),7.83(d,j=8.0hz,2h),7.70(d,j=8.0hz,2h),7.31(d,j=8.0hz,2h),2.43(s,3h);hrms(esi),m/zcalcdforc20h12clf3n5o[m+h]+430.0682;found,430.0678.实施例9化合物ii(r=4-ch2br)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入20mlpocl3中，再加入4-(溴甲基)苯甲酸2.2mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌3.5h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用石油醚重结晶得0.566g黄色固体化合物ii，收率62.4%。m.p.:114～118℃;1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ:7.91(d,j=8.0hz,2h),7.75(d,j=8.0hz,2h),7.43(d,j=8.0hz,2h),7.35(d,j=8.0hz,2h),4.57(s,2h),2.37(s,3h);hrms(esi),m/zcalcdforc20h14brcln5o[m+h]+454.0070;found,454.0079.实施例10化合物ij(r=邻氟)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入10mlpocl3中，再加入邻氟苯甲酸2.0mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌5.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用石油醚重结晶得0.529g黄色固体化合物ij，收率69.7%。m.p.:129～132℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:8.22～8.18(m,1h),7.93(d,j=8.0hz,2h),7.61～7.58(m,1h),7.37～7.33(m,2h),7.32～7.25(m,2h),2.42(s,3h);hrms(esi),m/zcalcdforc19h12clfn5o[m+h]+380.0714;found,380.0735.实施例11化合物ik(r=间氟)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入15mlpocl3中，再加入间氟苯甲酸2.1mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌3.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用乙酸乙酯和石油醚重结晶得0.545g黄色固体化合物ik，收率71.8%。m.p.:111～114℃;1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ:7.95(s,1h),7.90～7.83(m,1h),7.74(d,j=8.0hz,2h),7.72～7.61(m,1h),7.59～7.52(m,1h),7.34(d,j=8.0hz,2h),2.36(s,3h).hrms(esi),m/zcalcdforc19h12clfn5o[m+h]+380.0714;found,380.0743.实施例12化合物il(r=对氟)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入10mlpocl3中，再加入对氟苯甲酸2.0mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌5.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用乙醇重结晶得0.541g黄色固体化合物il，收率71.3%。m.p.:128～130℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:8.06(d,j=8.0hz,2h),7.74(d,j=8.5hz,2h),7.69(d,j=8.5hz,2h),7.29(d,j=8.5hz,2h),2.43(s,3h).hrms(esi),m/zcalcdforc19h12clfn5o[m+h]+380.0714;found,380.0736.实施例13化合物im(r=邻氯)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入14mlpocl3中，再加入邻氯苯甲酸2.5mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌3.5h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用正己烷重结晶得0.544g黄色固体化合物im，收率68.8%。m.p.:117～120℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:8.04(d,j=7.0hz,1h),7.68(d,j=8.0hz,2h),7.58(d,j=8.0hz,1h),7.50(td,j=7.5,1.5hz,1h),7.42(t,j=7.5hz,1h),7.24(d,j=8.5hz,2h),2.41(s,3h).hrms(esi),m/zcalcdforc19h12cl2n5o[m+h]+396.0419;found,396.0425.实施例14化合物in(r=对氯)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入16mlpocl3中，再加入对氯苯甲酸2.3mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌4.3h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用石油醚重结晶得0.537g黄色固体化合物in，收率67.9%。m.p.:125～128℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:8.03(d,j=8.0hz,2h),7.69(d,j=8.5hz,2h),7.67(d,j=8.5hz,2h),7.28(d,j=8.5hz,2h),2.39(s,3h).hrms(esi),m/zcalcdforc19h12cl2n5o[m+h]+396.0419;found,396.0422.实施例15化合物io(r=邻溴)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入16mlpocl3中，再加入邻溴苯甲酸2.5mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌4.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用乙酸乙酯和石油醚重结晶得0.593g黄色固体化合物io，收率67.4%。m.p.:106～109℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:8.01(dd,j=6.0,1.5hz,1h),7.80(dd,j=7.0,1.0hz,1h),7.71(d,j=7.5hz,2h),7.49(td,j=6.5,1.0hz,1h),7.43(td,j=6.0,2.0hz,1h),7.30(d,j=8.0hz,2h),2.41(s,3h).hrms(esi),m/zcalcdforc19h12brcln5o[m+h]+439.9914;found,439.9931.实施例16化合物ip(r=对溴)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入11mlpocl3中，再加入对溴苯甲酸2.2mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌5.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用石油醚重结晶得0.587g黄色固体化合物ip，收率66.8%。m.p.:108～111℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:8.01(d,j=8.0hz,2h),7.68(d,j=8.5hz,2h),7.66(d,j=8.5hz,2h),7.26(d,j=8.5hz,2h),2.39(s,3h).hrms(esi),m/zcalcdforc19h12brcln5o[m+h]+439.9914;found,439.9923.实施例17化合物iq(r=邻碘)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入12mlpocl3中，再加入邻碘苯甲酸2.3mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌5.2h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用乙醇重结晶得0.631g黄色固体化合物iq，收率64.7%。m.p.:106～108℃;1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ:8.17(d,j=8.0hz,1h),8.05(d,j=8.0hz,1h),7.74(d,j=8.0hz,2h),7.67～7.65(m,1h),7.40(td,j=6.0,2.0hz,1h),7.30(d,j=8.0hz,2h),2.35(s,3h).hrms(esi),m/zcalcdforc19h12clin5o[m+h]+487.9775;found,487.9779.实施例18化合物ir(r=对碘)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入10mlpocl3中，再加入对碘苯甲酸2.0mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌4.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用乙酸乙酯、乙醇和石油醚重结晶得0.657g黄色固体化合物ir，收率67.4%。m.p.:130～133℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:8.17(d,j=8.0hz,2h),7.73(d,j=8.5hz,2h),7.66(d,j=8.5hz,2h),7.31(d,j=8.5hz,2h),2.40(s,3h).hrms(esi),m/zcalcdforc19h12clin5o[m+h]+487.9775;found,487.9783.实施例19化合物is(r=对氰基)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入15mlpocl3中，再加入对氰基苯甲酸2.4mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌6.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用正己烷重结晶得0.527g黄色固体化合物is，收率68.2%。m.p.:136～139℃;1hnmr(500mhz,cdcl3)δ:8.09(d,j=8.0hz,2h),7.70(d,j=8.5hz,2h),7.68(d,j=8.5hz,2h),7.31(d,j=8.5hz,2h),2.41(s,3h).hrms(esi),m/zcalcdforc20h12cln6o[m+h]+387.0761;found,387.0759.实施例20化合物it(r=2,3-二氯)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入16mlpocl3中，再加入2,3-二氯苯甲酸2.2mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌4.6h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用正己烷和石油醚重结晶得0.598g黄色固体化合物it，收率69.6%。m.p.:102～105℃;1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ:7.85(d,j=6.0hz,1h),7.80～7.79(m,2.0hz,1h),7.74(d,j=8.0hz,2h),7.51～7.44(m,1h),7.31(d,j=8.0hz,2h),2.35(s,3h).hrms(esi),m/zcalcdforc19h11cl3n5o[m+h]+430.0029;found,430.0023.实施例21化合物iu(r=2,6-二氯)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入10mlpocl3中，再加入2,6-二氯苯甲酸2.4mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌5.5h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用乙醇和石油醚重结晶得0.562g黄色固体化合物iu，收率65.4%。m.p.:109～112℃;1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ:7.86(d,j=6.0hz,1h),7.81～7.77(m,2.0hz,1h),7.74(d,j=8.0hz,2h),7.51～7.43(m,1h),7.33(d,j=8.0hz,2h),2.35(s,3h).hrms(esi),m/zcalcdforc19h11cl3n5o[m+h]+430.0029;found,430.0033.实施例22化合物iv(r=2,3,5,6-f4)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入12mlpocl3中，再加入2,3,5,6-四氟苯甲酸2.1mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌5.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用乙酸乙酯和乙醇重结晶得0.605g黄色固体化合物iv，收率69.7%。m.p.:144～148℃;1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ:7.94(s,1h),7.74(d,j=8.0hz,2h),7.32(d,j=8.0hz,2h),2.36(s,3h).hrms(esi),m/zcalcdforc19h9clf4n5o[m+h]+434.0432;found,434.0437.实施例23化合物iw(r=2,3,4,5-f4)的合成将0.287g(2.0mmol)4-氯-2-氰基-5-(对甲基苯基)-1h-咪唑-1碳酰肼加入15mlpocl3中，再加入2,3,4,5-四氟苯甲酸2.4mmol，回流反应。最后真空旋蒸除去部分pocl3，往反应瓶中加入20ml冰水，室温搅拌3.0h，有固体物质析出，过滤，水洗数次，用乙酸乙酯和石油醚重结晶得0.612g黄色固体化合物iw，收率70.5%。m.p.:126～129℃;1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ:7.96～7.90(m,1h),7.75(d,j=8.0hz,2h),7.33(d,j=8.5hz,2h),2.37(s,3h).hrms(esi),m/zcalcdforc19h9clf4n5o[m+h]+434.0432;found,434.0441.实施例24抗癌活性测试供试靶标：人肝癌细胞huh7(humanhepatomacellline)、人肺癌细胞a549(humanlungcancercellline)、人结肠癌细胞hct116(humancoloncancercellline)，将细胞接种于96孔板中，5000个细胞每孔，huh7和a549用dmem培养基（gibco,usa），hct116用1640培养基（gibco,usa），培养基体积为100μl。培养24小时待细胞贴壁生长后，除去培养基，备用。采用四氮唑快速比色法(mtt法)对合成的化合物进行了人肝癌细胞huh7、人肺癌细胞a549、人结肠癌细胞hct116的抗癌活性测定。用培养基配制的不同浓度的药物后，置于含5%co2的细胞培养箱中培养48小时或96小时。到测定时间后，加入2.5mg/mlmtt后，培养4小时，弃掉上清液体，每孔加入100μl的dmso溶液，充分混匀15秒后用多功能酶标仪测定570nm处的吸光度（od值）。阳性对照为加mtt组，阴性对照为不加mtt组，给药组为加药并且加mtt组。每个孔设置两个复孔。吸光度为三个样品的平均值。细胞增殖抑制率=(od阳性-od药物)/(od阳性-od阴性)*100%。最后以细胞增殖抑制率对药物浓度作图求得半数抑制细胞浓度ic50值，测试结果见表1。表1目标化合物对不同细胞系的细胞毒性(ic50/μm)table4.1cytotoxicity(ic50/μm)oftargetcompoundsondifferentcelllines注a：喜树碱，作为阳性对照组。从表1生测结果表明，本发明的化合物（i）对所有供试靶标均表现出一定的抑制活性；大部分化合物对人结肠癌细胞株hct116和对人肝癌细胞株huh7的抑制活性要比对人肺癌细胞株a549的抑制活性要好，化合物ib，ih，ik，ir，is及it对人结肠癌细胞株hct116的抑制活性相对较好，其ic50分别为10.41±1.1、20.60±0.8、8.03±0.5、20.61±0.9、11.28±0.8、17.00±2.2μm。化合物id，ih，ik，ip对人肺癌细胞株a549的抑制活性相对较好，其ic50值分别为16.42±0.6、21.05±4.1、35.52±1.2、23.25±6.3μm。化合物is和iw的ic50值分别为10.06±0.8和17.14±1.7μm，对人肝癌细胞株huh7的抑制活性较好。当前第1页12当前第1页12