本发明属于生物
技术领域：
，具体涉及一种工业化生产核桃活性肽及制备方法。
背景技术：
：核桃又名杏实。核桃富含蛋白质、脂肪、糖类、胡萝卜素、b族维生素、维生素c、维生素p以及钙、磷、铁等营养成分。其中胡萝卜素的含量在果品中仅次于芒果，人们将核桃称为抗癌之果。核桃含有丰富的脂肪油，有降低胆固醇的作用，因此，核桃对防治心血管系统疾病有良好的作用；中医中药理论认为，核桃具有生津止渴、润肺定喘的功效，常用于肺燥喘咳等患者的保健与治疗。美国研究人员的一项最新研究成果显示，胆固醇水平正常或稍高的人，可以用核桃取代其膳食中的低营养密度食品，达到降低血液胆固醇并保持心脏健康的目的。申请号cn201410386832.1公开了“一种核桃多肽饮料的制备方法”。主要包括去除核桃仁的红衣；制得核桃油和核桃粕；磨浆得到核桃蛋白原液，浆渣分离，均质处理，得到核桃蛋白液；酶解；灭酶，得到核桃多肽溶液；七、向核桃多肽溶液中加入辅料，加水定容后进行均质处理，得到核桃多肽饮料。在得到肽的过程中对酶解液未进行各种过滤等操作，会残留部分杂质以及对肽的纯度和活性以及口感产生影响。通过对核桃粉进行蛋白酶酶解，将蛋白酶解成小分子量的低聚肽，大大增加了产品的溶解性，核桃活性肽的成功制备为传统食品核桃粉农产品深加工提供了一条新型工业化道路，使核桃粉这一丰富的普通食品蛋白资源得到充分利用，大大扩大了核桃粉作为一种传统普通食品原料的应用领域，提高了大宗农产品的附加值，发挥了更大的经济价值，并提高了综合的社会效益。与原蛋白相比，小分子的核桃活性肽更加容易被消化吸收。由于其一系列良好的食品加工性能，核桃活性肽也可与其它不同来源的蛋白质混合，以提高其营养价值，也可用于生产速溶饮品、功能饮料、肉制品、乳制品、焙烤食品等多样化的食品。随着科技的发展，蛋白质工程技术的应用，采用酶解技术制取生物活性肽及其蛋白水解物的研究和产品开发已经成为热点和主流，酶解核桃蛋白质制取多肽的实验室技术文献已有部分，但是工业中生产核桃肽的制备方法还没有。技术实现要素：本发明目的在于提供一种核桃活性肽的制备方法，以解决技术问题。一种核桃活性肽的制备方法，包括以下步骤：a、将核桃预处理，进行超微粉碎，过200-600目，以100∶2～10(l∶kg)的液料比用水和核桃粉混合调浆，调节ph8-9微碱化处理，加热至60～80℃。保温搅拌30～120min；b、将反应罐中的碱性料液泵入离心机中，分离成清液和渣料，收集渣料，将渣料加水稀释，加热至60～80℃，搅拌并分离，以同样的处理方式进行3次；c、调节上清液的ph值至4-6后，机械搅拌8-12h、离心，收取沉淀，沉淀即为核桃蛋白，重复两次；d、将沉淀加水复溶，加热至75-100℃，时间15-45min，使得蛋白质变性，然后进行高压均质；e、调节上述溶液ph至5-10，加入专用酶制剂∶风味蛋白酶∶胃蛋白酶∶中性蛋白酶为5～7∶2～3∶3～5，酶解温度为40-65℃，时间为1.5-8h；f、酶解结束之后，灭酶温度90-125℃，灭酶时间为1-3h，结束后得粗酶解液；g：为将粗酶解液离心、过滤、蒸发浓缩、加入活性炭脱色，然后喷雾干燥得到核桃活性肽粉。如上述的核桃活性肽的制备方法，其特征在于，所述的步骤a中，进行超微粉碎可以提高酶解率，充分利用物质组分。如上述的核桃活性肽的制备方法，其特征在于，所述的步骤c中，采用热变性的方法，可以更加利于酶解，酶解更加充分。同时热变性之后进行高压均质，进一步提高酶解效率。如上述的核桃活性肽的制备方法，其特征在于，所述的步骤d，专用酶制剂组合包括风味蛋白酶∶胃蛋白酶∶中性蛋白酶为5～7∶2～3∶3～5。研究发现其专用酶制剂组合的酶解效率远大约单一酶的酶解效率。如上述的核桃活性肽的制备方法，其特征在于，喷雾干燥所用的为中低温喷雾干燥塔，进一步保留热敏活性物质，并且中低温喷雾干燥塔是首次在肽工艺中得到应用。一种核桃活性肽的制备方法，其特征在于，按照权利要求1所述的制备方法，所述核桃低聚肽其特征在于分子量小于1000da的组分占90％以上，游离氨基酸含量低于5％，并至少含有3％含量的四肽缬氨酸-色氨酸-异亮氨酸-丝氨酸(val-trp-ile-ser，vwis)序列肽段。除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将对本发明作进一步详细的说明。具体实施方式以下对本发明的实施例进行详细说明，但是本发明可以根据权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。1、一种核桃活性肽的制备方法，包括以下步骤：a、将核桃预处理，进行超微粉碎，过200-600目，以100∶7(l∶kg)的液料比用水和核桃粉混合调浆，调节ph9微碱化处理，加热至70℃。保温搅拌80min；b、将反应罐中的碱性料液泵入离心机中，分离成清液和渣料，收集渣料，将渣料加水稀释，加热至70℃，搅拌并分离，以同样的处理方式进行3次；c、调节上清液的ph值至5后，机械搅拌10h、离心，收取沉淀，沉淀即为核桃蛋白，重复两次；d、将沉淀加水复溶，加热至85℃，时间30min，使得蛋白质变性，然后进行高压均质；e、调节上述溶液ph至6，加入专用酶制剂∶风味蛋白酶∶胃蛋白酶∶中性蛋白酶为6.3∶2.5∶4，风味蛋白酶∶胃蛋白酶∶中性蛋白酶的添加量为每克蛋白质2000单位，酶解温度为50℃，时间为3h；f、酶解结束之后，灭酶温度90-125℃，灭酶时间为1-3h，结束后得粗酶解液；g：为将粗酶解液离心、过滤，采用孔径0.05～0.1μm的膜过滤设备进行过滤，条件为压力0.2～0.4mpa，温度30～80℃。蒸发浓缩、加入活性炭脱色，加入浓缩液总固体含量的5％活性炭质量进行脱色，然后喷雾干燥得到核桃活性肽粉。2、核桃活性肽的理化组成和分子量分布分析核桃活性肽的成分分析结果见表1，从中可以看出本发明制备的核桃活性肽总蛋白质含量高达98.2％，具有很高的产品质量。表1：核桃活性肽的基础理化成分分析含量％总蛋白质(干基)98.2±0.35脂肪0.08±0.01灰分4.25±0.15将核桃活性肽样品于gel-hplc中进样以后，得到其凝胶色谱图，用液相数据处理软件将核桃活性肽的凝胶色谱数据代入校正曲线方程中进行计算，得到样品的肽的相对分子质量及其分布范围。分子量1000da以下组分中的二肽、三肽的在人体内的吸收利用率极高，具有比游离氨基酸更高的营养价值和生理功能。本发明用峰面积归一化法计算了核桃活性肽的相对分子质量分布范围，如表2所示。由分子量分布结果可以看出，分子量小于1000da的组分总共占91.49％，如果按氨基酸的平均分子量137da来计算，分子量1000da以下的组分则多是八肽以下的低聚肽，也包括部分游离氨基酸。其中分子量在140da-500da的占60.94％，占据了1000da以下的绝大部分，这部分主要是二肽、三肽和四肽。表2：核桃活性肽分子量分布结果3、核桃活性肽中结构鉴定与标志性肽段定量根据国内外最新营养研究表明，蛋白质摄入后，并不完全水解成氨基酸，而是大部分以肽的形式被机体消化吸收。肽类物质除具有易消化、易吸收的营养功能外，更重要的生物学意义主要体现在其具有氨基酸不可比拟的生理活性功能。核桃活性肽作为一种混合性肽，含有许多具有各种生理功能的肽段。同时，其相对分子质量小于1000的组分占到90％以上，说明本产品基本上是由短肽组成。特殊的蛋白原料来源和独特的生产工艺，使本产品含有一定量的特征成分肽。我们对核桃活性肽中的肽段进行分离及结构鉴定。通过采用高效液相色谱分离与质谱分析，对本产品中的肽段进行分离及结构鉴定，共鉴定出40个肽段的一级结构。我们已研究出定量测定核桃活性肽中四肽缬氨酸-色氨酸-异亮氨酸-丝氨酸(val-trp-ile-ser，vwis)的高效液相色谱分析法。将核桃活性肽样品经前处理后，以反相c18填料为固定相，依据样品组分分子极性大小的差别进行分离，在紫外吸收波长220nm条件下检测，采用外标法进行定量，并对色谱图及其数据进行处理，计算得到vwis的含量。鉴于不同批次的核桃活性肽样品中均含有3％以上的vwis，故将vwis作为核桃活性肽中的特征性成分。对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。当前第1页12