本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种三氟乙酰三肽-2的合成方法。
背景技术：
三氟乙酰三肽-2是一种三个氨基酸组成的活性多肽，其序列为n-(2,2,2-三氟乙酰基)-val-tyr-val-oh，此多肽可以通过抑制mmp-1刺激ecm的生成，用于抗皱和抗衰老。因此，多用于化妆品内作为基质护素。
目前，有关三氟乙酰三肽-2合成的缺点主要在三氟乙酰化时多采用三氟乙酸乙酯或三氟乙酰氯做酰化试剂，材料成本高，效率低，合成工艺复杂。三氟乙酰三肽-2作为化妆品原料，降低生产成本，提高生产效率，简化合成工艺的研究具有重要意义。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题在于克服现有三氟乙酰三肽-2合成成本高、效率低、工艺复杂的缺点，提供一种成本低、效率高、合成工艺简单的三氟乙酰三肽-2固相合成方法。
解决上述技术问题所采用的技术方案由下述步骤组成：
(1)合成nh2-val-tyr(tbu)-val-wangresin
②合成fmoc-val-wangresin
将wangresin用n,n-二甲基甲酰胺溶胀后，加入二氯甲烷、fmoc-val-oh、4-二甲氨基吡啶、n,n-二异丙基碳二亚胺，在氮气保护下，常温搅拌反应3～5小时，依次用异丙醇和n,n-二甲基甲酰胺洗涤，得到fmoc-val-wangresin。
②合成fmoc-tyr(tbu)-val-wangresin
将fmoc-val-wangresin用哌啶与n,n-二甲基甲酰胺体积比为1:4的混合液脱除fmoc-一次，用异丙醇和n,n-二甲基甲酰胺分别洗涤，再加入n,n-二甲基甲酰胺、fmoc-tyr(tbu)-oh、1-羟基苯并三唑、n,n-二异丙基碳二亚胺，在氮气保护下，常温搅拌反应1～3小时，依次用异丙醇和n,n-二甲基甲酰胺洗涤，得到fmoc-tyr(tbu)-val-wangresin。
③合成fmoc-val-tyr(tbu)-val-wangresin
按照步骤②的方法向fmoc-tyr(tbu)-val-wangresin上连接fmoc-val-oh得到fmoc-val-tyr(tbu)-val-wangresin。
④合成nh2-val-tyr(tbu)-val-wangresin
将fmoc-val-tyr(tbu)-val-wangresin用哌啶与n,n-二甲基甲酰胺体积比为1:4的混合液脱fmoc-一次，依次用异丙醇和n,n-二甲基甲酰胺洗涤，得到nh2-val-tyr(tbu)-val-wangresin。
(2)合成n-(2,2,2-三氟乙酰基)-val-tyr(tbu)-val-wangresin
将6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、1-羟基苯并三唑用n,n-二甲基甲酰胺溶解后，加入三氟乙酸，常温搅拌反应15～30分钟，再加入n,n′-二异丙基乙胺，继续搅拌20～40分钟，所得反应液加入nh2-val-tyr(tbu)-val-wangresin中，在氮气保护下，常温搅拌反应1～3小时，依次用异丙醇、n,n-二甲基甲酰胺、无水甲醇洗涤，干燥得n-(2,2,2-三氟乙酰基)-val-tyr(tbu)-val-wangresin。
(3)合成n-(2,2,2-三氟乙酰基)-val-tyr-val-oh
将步骤(2)得到的n-(2,2,2-三氟乙酰基)-val-tyr(tbu)-val-wangresin中加入切割液，常温搅拌1～3小时，分离纯化，得到三氟乙酰三肽-2。
上述切割液的质量百分比组成为：三氟乙酸83％、苯酚5％、苯甲硫醚4％、水3％、三异丙基硅烷5％。
上述步骤(1)的①中，优选wangresin与fmoc-val-oh、4-二甲氨基吡啶、n,n-二异丙基碳二亚胺的摩尔比为1:8～12:1～1.3:4～6。
上述步骤(1)的②中，优选fmoc-tyr(tbu)-oh、1-羟基苯并三唑、n,n-二异丙基碳二亚胺的加入量与步骤①中wangresin用量的摩尔比2:2.5～3:2.5～3:1。
上述步骤(1)的③中，优选fmoc-val-oh、1-羟基苯并三唑、n,n-二异丙基碳二亚胺的加入量与步骤①中wangresin用量的摩尔比2:2.5～3:2.5～3:1。
上述步骤(2)中，优选6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、1-羟基苯并三唑、三氟乙酸的加入量与步骤①中wangresin用量的摩尔比为3～7:3～7:2～6:1。
本发明先采用固相法合成nh2-val-tyr(tbu)-val-wangresin，再用三氟乙酸作为原料进行三氟乙酰化，制得三氟乙酰三肽-2产品。本发明克服了常规三氟乙酰化反应中采用三氟乙酸乙酯或三氟乙酰氯存在的成本高、效率低、合成工艺复杂的缺点，同时采用先行活化三氟乙酸再中和酸性的工艺，克服了三氟乙酸对nh2-val-tyr(tbu)-val-wangresin树脂肽的影响，具有合成成本低、效率高、工艺简单的优点，是一种相对理想的三氟乙酰三肽-2合成方法。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步详细说明，但本发明的保护范围不仅限于这些实施例。
实施例1
(1)合成nh2-val-tyr(tbu)-val-wangresin
①合成fmoc-val-wangresin
将20.0gwangresin(取代度0.5mmol/g)加入合成器中，加入200mln,n-二甲基甲酰胺浸泡4小时，使其充分溶胀，抽滤除去n,n-二甲基甲酰胺，向合成器中加入200ml二氯甲烷、33.94gfmoc-val-oh、1.22g4-二甲氨基吡啶、7.79mln,n-二异丙基碳二亚胺，wangresin与fmoc-val-oh、4-二甲氨基吡啶、n,n-二异丙基碳二亚胺的摩尔比为1:10:1:5，在氮气保护下，常温搅拌反应4小时，抽滤，用异丙醇和n,n-二甲基甲酰胺各洗涤2次，每次180ml，得到fmoc-val-wangresin。
②合成fmoc-tyr(tbu)-val-wangresin
将步骤①得到的fmoc-val-wangresin加入合成器中，并加入200ml哌啶与n,n-二甲基甲酰胺体积比为1:4的混合液，在氮气保护下常温搅拌反应40分钟，抽滤，用异丙醇和n,n-二甲基甲酰胺各洗涤2次，每次200ml，将洗涤后的树脂加入合成器中，加入200mln,n-二甲基甲酰胺，并加入9.19gfmoc-tyr(tbu)-oh、4.05g1-羟基苯并三唑、4.67mln,n-二异丙基碳二亚胺，fmoc-tyr(tbu)-oh、1-羟基苯并三唑、n,n-二异丙基碳二亚胺与wangresin的摩尔比2:3:3:1，在氮气保护下常温搅拌反应2小时，抽滤，用异丙醇和n,n-二甲基甲酰胺各洗涤2次，每次200ml，得到fmoc-tyr(tbu)-val-wangresin。
③合成fmoc-val-tyr(tbu)-val-wangresin
将步骤②得到的fmoc-tyr(tbu)-val-wangresin加入合成器中，并加入200ml哌啶与n,n-二甲基甲酰胺体积比为1:4的混合液，在氮气保护下常温搅拌反应40分钟，抽滤，用异丙醇和n,n-二甲基甲酰胺各洗涤2次，每次200ml，将洗涤后的树脂加入合成器中，加入200mln,n-二甲基甲酰胺，并加入6.87gfmoc-val-oh、4.05g1-羟基苯并三唑、4.67mln,n-二异丙基碳二亚胺，fmoc-val-oh、1-羟基苯并三唑、n,n-二异丙基碳二亚胺与wangresin的摩尔比2:3:3:1，在氮气保护下常温搅拌反应2小时，抽滤，用异丙醇和n,n-二甲基甲酰胺各洗涤2次，每次200ml，得到fmoc-val-tyr(tbu)-val-wangresin。
④合成nh2-val-tyr(tbu)-val-wangresin
将步骤③得到的fmoc-val-tyr(tbu)-val-wangresin加入合成器中，并加入200ml哌啶与n,n-二甲基甲酰胺体积比为1:4的混合液，在氮气保护下常温搅拌反应40分钟，抽滤，用异丙醇和n,n-二甲基甲酰胺各洗涤2次，每次200ml，得到nh2-val-tyr(tbu)-val-wangresin。
(2)合成n-(2,2,2-三氟乙酰基)-val-tyr(tbu)-val-wangresin
将28.96g6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、9.46g1-羟基苯并三唑溶解于200mln,n-二甲基甲酰胺中，加入4.5ml三氟乙酸，常温搅拌反应20分钟，再滴加17.5mln,n′-二异丙基乙胺，继续搅拌30分钟，得到反应液；将步骤④得到的nh2-val-tyr(tbu)-val-wangresin加入反应液中，6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、1-羟基苯并三唑、三氟乙酸与wangresin的摩尔比为7:7:6:1，在氮气保护下常温搅拌反应2小时，抽滤，用异丙醇和n,n-二甲基甲酰胺各洗涤2次、用甲醇洗涤3次，每次200ml，抽滤，40℃干燥，得到27.5gn-(2,2,2-三氟乙酰基)-val-tyr(tbu)-val-wangresin。
(3)合成n-(2,2,2-三氟乙酰基)-val-tyr-val-oh
将步骤(2)得到的n-(2,2,2-三氟乙酰基)-val-tyr(tbu)-val-wangresin加入到300ml切割液(切割液的质量百分比组成为：三氟乙酸83％、苯酚5％、苯甲硫醚4％、水3％、三异丙基硅烷5％)中，常温搅拌反应2小时，抽滤得棕黄色液体，减压浓缩至黄色油状物，浓缩液倾倒到冷冻的500ml甲基叔丁基醚中，搅拌均匀，4℃静置有白色沉淀，过滤，用甲基叔丁基醚洗涤2次，室温真空干燥，得到5.0g三氟乙酰三肽-2粗品；将三氟乙酰三肽-2粗品经反相色谱纯化(反相聚合物柱：mcigel反相色谱填料，柱子规格5cm×45cm，流速30ml/min，波长215nm，流动相a：体积浓度为0.1％的三氟乙酸水溶液，流动相b：体积浓度为0.1％的三氟乙酸甲醇溶液，洗脱梯度：b18％～26％50min)、冷冻干燥，得到三氟乙酰三肽-2冻干粉4.2g，收率86.31％，纯度>95％。
实施例2
本实施例的步骤(1)的②和③中，1-羟基苯并三唑、n,n-二异丙基碳二亚胺与wangresin的摩尔比2.5:2.5:1，该步骤的其它步骤与实施例1相同。本实施的步骤(2)中，6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、1-羟基苯并三唑、三氟乙酸与wangresin的摩尔比为3:3:2:1，该步骤的其他步骤与实施例1相同。本实施的步骤(3)与实施例1相同，得3.6g三氟乙酰三肽-2冻干粉，收率74.00％。
实施例3
本实施的步骤(2)中，6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、1-羟基苯并三唑、三氟乙酸与wangresin的摩尔比为5:5:4:1，该步骤的其他步骤与实施例1相同。本实施的步骤(1)和(3)与实施例1相同，得到4.1g三氟乙酰三肽-2冻干粉，收率84.25％。