用于高血压相关药物基因多态性位点检测的引物组、试剂盒和方法与流程

本发明涉及基因多态性检测
技术领域：
，具体而言，涉及一种用于高血压相关药物基因多态性位点检测的引物组、试剂盒和方法。
背景技术：
：高血压是最常见的慢性非感染性疾病，会引起心、脑、肾等脏器的并发症，是心血管疾病最重要的危险因素，受遗传和环境因素的影响。目前，治疗高血压的新药层出不穷，但在血压的控制上却得不到显著的改善，其主要原因就是药物的疗效及不良反应不稳定，个体间差异明显，而遗传因素便是影响药物反应差异的主要因素之一。研究发现，高血压的发生与多种基因表型相关，基因表型不同，降压药物的治疗效果就存在显著差异。因此为取得最佳降压疗效，医生应依据患者的基因型资料选取合适的降压药物，即根据个体遗传特征(基因型)，选择有效的治疗方案。实现“基因导向型”个体化药物治疗和“量体用药”。传统的检测方法主要为sanger测序、片段分析或是单碱基延伸技术，每个反应仅检测1个或是几个基因位点。其存在检测效率低，通量低的问题。传统的检测方法完成一次检测周期较长，需要实验人员较多；同时检测配套试剂中，需要荧光标记引物或ddntp或长片段引物，成本较高。由于药物代谢基因在基因组中存在有较多重复序列，传统的检测方法对基因难扩增、难检测。传统的检测方法实验流程长，样品孔反复开盖、加样次数多；同时同一反应内多个基因位点竞争性扩增，相关干扰大。传统检测方法得到的原始结果均无法在仪器上直观显示检测结果，需要实验员自行设置参数分析，结果判读复杂。传统的检测方法需要用到荧光标记的引物或ddntp或是长片段引物，在室温或是光照条件下暴露较长时间，或是反复冻融次数过多极易导致检测失败，失败率高。鉴于此，特提出本发明。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种用于高血压相关药物基因多态性位点检测的引物组，采用该引物组可以同时对多个高血压相关药物基因的多个snp位点的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，snp位点之间无干扰等特点。本发明的另一目的在于提供一种用于高血压相关药物基因多态性位点检测的试剂盒，采用该试剂盒可以同时对多个高血压相关药物基因的多个snp位点的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，snp位点之间无干扰等特点。本发明的另一目的在于提供一种高血压相关药物基因多态性位点检测的方法，该方法可以同时对多个高血压相关药物基因的多个snp位点的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，snp位点之间无干扰等特点。本发明是这样实现的：一方面，本发明提供了一种用于高血压相关药物基因多态性位点检测的引物组，其包括引物组合1-引物组合19中的一种或多种的组合；其中，引物组合1包括：seqidno.1-2所示的扩增引物和seqidno.40所示的检测引物；引物组合2包括：seqidno.3-4所示的扩增引物和seqidno.41所示的检测引物；引物组合3包括：seqidno.5-6所示的扩增引物和seqidno.42所示的检测引物；引物组合4包括：seqidno.7-8所示的扩增引物和seqidno.43所示的检测引物；引物组合5包括：seqidno.9-10所示的扩增引物和seqidno.44所示的检测引物；引物组合6包括：seqidno.11-12所示的扩增引物和seqidno.45所示的检测引物；引物组合7包括：seqidno.13-14所示的扩增引物和seqidno.46所示的检测引物；引物组合8包括：seqidno.15-16所示的扩增引物和seqidno.47所示的检测引物；引物组合9包括：seqidno.17-18所示的扩增引物和seqidno.48所示的检测引物；引物组合10包括：seqidno.19-20所示的扩增引物和seqidno.49所示的检测引物；引物组合11包括：seqidno.21-22所示的扩增引物和seqidno.50所示的检测引物；引物组合12包括：seqidno.23-24所示的扩增引物和seqidno.51所示的检测引物；引物组合13包括：seqidno.25-26所示的扩增引物和seqidno.52所示的检测引物；引物组合14包括：seqidno.27-28所示的扩增引物和seqidno.53所示的检测引物；引物组合15包括：seqidno.29-30所示的扩增引物和seqidno.54所示的检测引物；引物组合16包括：seqidno.31-32所示的扩增引物和seqidno.55所示的检测引物；引物组合17包括：seqidno.33-34所示的扩增引物和seqidno.56所示的检测引物；引物组合18包括：seqidno.35-36所示的扩增引物和seqidno.57所示的检测引物；引物组合19包括：seqidno.37-39所示的扩增引物和seqidno.58所示的检测引物。其中，上述的引物组合1-19所检测的基因以及相应的snp位点信息见下表1。表1注：wt代表为野生型；ata-ccc为长片段插入，具体序列为atacagtcactttttttttttttttgagacggagtctcgctctgtcgccc。采用本发明提供的引物组，结合飞行时间质谱技术可以同时对19个高血压相关药物基因例如nat2、adrb2、cyp2c9、plcd3、prkca、nat2、adrb1、cyp3a4、mmp3、yeats4、cyp2c19、ace、ace、nppa、agtr1、gnb3、yeats4、cyp3a5和ace对应的19个snp位点例如rs1041983、rs1042714、rs1057910、rs12946454、rs16960228、rs1799930、rs1801253、rs2246709、rs3025058、rs7297610、rs4244285、rs4291、rs4344、rs5065、rs5186、rs5443、rs7297610、rs776746和rs1799752的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，各snp位点检测结果之间无干扰等特点。另一方面，本发明提供了一种高血压相关药物基因多态性位点检测的试剂盒，其包括上述的引物组。采用本发明提供的试剂盒，结合飞行时间质谱技术可以同时对19个高血压相关药物基因例如nat2、adrb2、cyp2c9、plcd3、prkca、nat2、adrb1、cyp3a4、mmp3、yeats4、cyp2c19、ace、ace、nppa、agtr1、gnb3、yeats4、cyp3a5和ace对应的19个snp位点例如rs1041983、rs1042714、rs1057910、rs12946454、rs16960228、rs1799930、rs1801253、rs2246709、rs3025058、rs7297610、rs4244285、rs4291、rs4344、rs5065、rs5186、rs5443、rs7297610、rs776746和rs1799752的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，操作简单、各snp位点检测结果之间无干扰等特点。另一方面，本发明提供了一种高血压相关药物基因多态性位点检测的方法，其包括如下步骤：(1)使用权利要求1所述的引物组中的扩增引物对样品进行pcr扩增，得到第一扩增产物；(2)使用权利要求1所述的引物组中的检测引物对经碱性磷酸酶处理后的第一扩增产物进行单碱基延伸反应，得到第二扩增产物；(3)采用飞行时间质谱技术分析所述第二扩增产物的多态性。进一步地，在本发明的一些实施方案中，在步骤(1)中，进行pcr扩增的体系含有：引物组合1-引物组合19的扩增引物、mg2+、dntps和taqdna聚合酶。进一步地，在本发明的一些实施方案中，在步骤(1)中，进行pcr扩增的体系如下：试剂体积(μl)ddh2o0.810xpcrbuffer0.5mgcl20.4dntpmix0.1primermix1.0pcrenzyme0.2dna2.0total5.0进一步地，在本发明的一些实施方案中，在步骤(1)中，在步骤(1)中，进行pcr扩增的程序的退火温度为：55-57℃。进一步地，在本发明的一些实施方案中，在步骤(1)中，在步骤(1)中，进行pcr扩增的程序如下：进一步地，在本发明的一些实施方案中，在步骤(2)中，进行单碱基延伸反应的体系含有：引物组合1-引物组合19的检测引物和第一扩增产物。进一步地，在本发明的一些实施方案中，在步骤(2)中，进行单碱基延伸反应的体系如下：试剂体积(μl)ddh2o0.62iplexbuffer0.2iplexterminationmix0.2iplexprimermix0.94iplexproenzyme0.04firstamplificationproduct7.0total9.0进一步地，在本发明的一些实施方案中，在步骤(2)中，进行单碱基延伸反应的程序的退火温度为：51-53℃，退火时间为：4-6s。进一步地，在本发明的一些实施方案中，在步骤(2)中，进行单碱基延伸反应的程序如下：采用本发明提供的试剂盒，结合飞行时间质谱技术可以同时对19个高血压相关药物基因例如nat2、adrb2、cyp2c9、plcd3、prkca、nat2、adrb1、cyp3a4、mmp3、yeats4、cyp2c19、ace、ace、nppa、agtr1、gnb3、yeats4、cyp3a5和ace对应的19个snp位点例如rs1041983、rs1042714、rs1057910、rs12946454、rs16960228、rs1799930、rs1801253、rs2246709、rs3025058、rs7297610、rs4244285、rs4291、rs4344、rs5065、rs5186、rs5443、rs7297610、rs776746和rs1799752的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，操作简单、各snp位点检测结果之间无干扰等特点。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为实验例1中的对照引物1的检测结果。图2为实验例1中的对照引物2的检测结果。图3为实验例1中的引物组合19的检测结果。图4为实验例2中的对照引物3对样本的检测结果。图5为实验例2中的对照引物3对样本的检测结果。图6为实验例2中的引物组合10的野生纯合检测结果。图7为实验例2中的引物组合10的突变杂合检测结果。具体实施方式为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。实施例1本实施例提供的高血压相关药物基因多态性位点检测的试剂盒，其包括用于高血压相关药物基因多态性位点检测的引物组，该引物组包括如下引物组合1-引物组合19。其中，引物组合1包括：seqidno.1-2所示的扩增引物(rs1041983-f和rs1041983-r)和seqidno.40所示的检测引物(rs1041983-e)；引物组合2包括：seqidno.3-4所示的扩增引物(rs1042714-f和rs1042714-r)和seqidno.41所示的检测引物(rs1042714-e)；引物组合3包括：seqidno.5-6所示的扩增引物(rs1057910-f和rs1057910-r)和seqidno.42所示的检测引物(rs1057910-e)；引物组合4包括：seqidno.7-8所示的扩增引物(rs12946454-f和rs12946454-r)和seqidno.43所示的检测引物(rs12946454-e)；引物组合5包括：seqidno.9-10所示的扩增引物(rs16960228-f和rs16960228-r)和seqidno.44所示的检测引物(rs16960228-e)；引物组合6包括：seqidno.11-12所示的扩增引物(rs1799930-f和rs1799930-r)和seqidno.45所示的检测引物(rs1799930-e)；引物组合7包括：seqidno.13-14所示的扩增引物(rs1801253-f和rs1801253-r)和seqidno.46所示的检测引物(rs1801253-e)；引物组合8包括：seqidno.15-16所示的扩增引物(rs2246709-f和rs2246709-r)和seqidno.47所示的检测引物(rs2246709-e)；引物组合9包括：seqidno.17-18所示的扩增引物(rs3025058-f和rs3025058-r)和seqidno.48所示的检测引物(rs3025058-e)；引物组合10包括：seqidno.19-20所示的扩增引物(rs4149601-f和rs4149601-r)和seqidno.49所示的检测引物(rs4149601-e)；引物组合11包括：seqidno.21-22所示的扩增引物(rs4244285-f和rs4244285-r)和seqidno.50所示的检测引物(rs4244285-e)；引物组合12包括：seqidno.23-24所示的扩增引物(rs4291-f和rs4291-r)和seqidno.51所示的检测引物(rs4291-e)；引物组合13包括：seqidno.25-26所示的扩增引物(rs4344-f和rs4344-r)和seqidno.52所示的检测引物(rs4344-e)；引物组合14包括：seqidno.27-28所示的扩增引物(rs5065-f和rs5065-r)和seqidno.53所示的检测引物(rs5065-e)；引物组合15包括：seqidno.29-30所示的扩增引物(rs5186-f和rs5186-r)和seqidno.54所示的检测引物(rs5186-e)；引物组合16包括：seqidno.31-32所示的扩增引物(rs5443-f和rs5443-r)和seqidno.55所示的检测引物(rs5443-e)；引物组合17包括：seqidno.33-34所示的扩增引物(rs7297610-f和rs7297610-r)和seqidno.56所示的检测引物(rs7297610-e)；引物组合18包括：seqidno.35-36所示的扩增引物(rs776746-f和rs776746-r)和seqidno.57所示的检测引物(rs776746-e)；引物组合19包括：seqidno.37-39所示的扩增引物(rs1799752-f、rs1799752-r1和rs1799752-r2)和seqidno.58所示的检测引物(rs1799752-e)。各引物序列如下表2所示：表2各检测引物的序列如表3所示：表3当然，需要说明的是，在其他的实施例中，引物组包括引物组合1-引物组合19中的任意1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种和18种的组合。在本发明公开了上述引物组合的基础上，本领域技术人员可以根据检测目的基因的类别和数量，从引物组合1-引物组合19中进行任意组合。无论是何种的组合方式，只要其是选自引物组合1-引物组合19，即属于本发明的保护范围。本实施例的试剂盒可以同时对19个高血压相关药物基因即nat2、adrb2、cyp2c9、plcd3、prkca、nat2、adrb1、cyp3a4、mmp3、yeats4、cyp2c19、ace、ace、nppa、agtr1、gnb3、yeats4、cyp3a5和ace对应的19个snp位点即rs1041983、rs1042714、rs1057910、rs12946454、rs16960228、rs1799930、rs1801253、rs2246709、rs3025058、rs7297610、rs4244285、rs4291、rs4344、rs5065、rs5186、rs5443、rs7297610、rs776746和rs1799752的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，各snp位点检测结果之间无干扰等特点。采用该试剂盒进行检测的方法如下：(1)使用上述引物组中的扩增引物对样品进行pcr扩增，得到第一扩增产物；体系：试剂体积(μl)终浓度ddh2o0.8n/a10xpcrbuffer0.51xmgcl20.42mmdntpmix0.1500μmprimermix1.01μmpcrenzyme0.20.2u/μldna2.010-20ngtotal5.0n/a注：1.本发明中所有检测用试剂均购自agenabioscience(基纳生物技术(上海)有限公司)，下同；2.primermix为所有扩增引物以1:1的浓度比例配置成的混合物，反应时所有引物的终浓度为1μm；3.n/a表示此项无意义。程序：(2)使用上述引物组中的检测引物对经碱性磷酸酶处理后的第一扩增产物进行单碱基延伸反应，得到第二扩增产物；体系如下：注：iplexprimermix为所有检测引物的混合物，检测引物配置表(以配置100μl为例)如下：程序如下：(3)采用飞行时间质谱技术分析所述第二扩增产物的多态性。根据检测引物及其第二扩增产物的分子量大小的峰位置可确定snp位点的基因型，如下表4所示：表4注：wt代表为野生型；ata-ccc为长片段插入，具体序列为atacagtcactttttttttttttttgagacggagtctcgctctgtcgccc。实施例2采用实施例1的试剂盒和方法，对已知表1中所列snp位点基因型的20份样品(均来自临床，样品类型为全血或口腔拭子)进行检测，结果如下表5-7所示。表5表6表7实验例1针对rs1799752位点，由基因结构复杂，周边存在较多的snp位点。ncbi数据库显示，在距离rs1799752位点3个碱基范围之内存在4个snp位点，如rs1314686756，rs200461879，rs199774979和rs144611316；在5个碱基范围之内则有9个snp位点，在10个碱基范围之内存在16个snp位点，在20个检测范围之内snp位点有23个。在这些snp位点的位置极易发生检测引物错配或无法配对，导致检测失败。此外，rs1799752位点非单一碱基突变，为单碱基g插入或长片段插入突变，且存在较长片段的重复序列，同时又与rs4340，rs13447447，rs4646994位点的突变形式(包括插入序列片段)相似且位点接进，此位点突变形式如下所示：野生型:tcccatttctctagacctgctgcctatacagtcacttttatgtggtttcg；突变型1:tcccatttctctagacctgctgcctatacagtcactttttttttttttttgagacggagtctcgctctgtcgcccatacagtcacttttatgtggtttcg；突变型2:tcccatttctctagacctgctgcctgatacagtcacttttatgtggtttcg。下划线为插入突变序列。此外，基因组中存在有假基因，极容易扩增得到非目的片段，故在引物设计中一般策略为扩增尽可能长的片段，再检测，易造成单一检测位点少，通量少(如测序分析、片段分析)；若降低扩增长度，易检测失败。本发明的发明人通过科学合理的设计得到的检测rs1799752位点多态性的引物组合19，相较于其他的引物方案，引物组合19具有更好的让人惊喜的效果。引物组合19和其他对照引物的检测效果对比结果如下：(1)对照扩增引物1：f(代表上游引物，下同):ctggagaccactcccatcctttct；r(代表下游引物，下同):gatgtggccatcacattcgtcagat。使用这对扩增引物可得到野生型扩增产物191bp，突变型扩增产物为192bp或241bp。用该对照扩增引物1进行质谱分析结果如图1所示。图中最左侧红色线代表检测引物，右侧3条线代表检测产物，同时分别指代3种不同基因型，如图所示结果为基因型wt/g(即g插入杂合型)。结果存在假阳性(g碱基插入阳性)，根据ncbi数据库显示，真实情况下，g插入突变的频率不到0.1％。即表示使用此引物检测该位点不稳定，存在假阳性。(2)对照扩增引物2：f:gggagctcagagaatttcag；r:ctcccatttctctagacctg。使用这对扩增引物可得到野生型扩增产物88bp，突变型扩增产物为89bp或138bp。采用该对照扩增引物2进行质谱分析结果如图2所示。图中最左侧红色线代表检测引物，右侧3条线代表检测产物，同时分别指代3种不同基因型，如图所示结果为基因型wt/g(即g插入杂合型)。结果存在假阳性(g碱基插入阳性)，根据ncbi数据库显示，真实情况下，g插入突变的频率不到0.1％；同时显示检测用引物有剩余，野生型和突变型检测的产物峰高不均一，即表示使用此引物检测该位点不稳定，存在假阳性。(3)针对rs1799752位点，设计单一扩增片段，设计扩增长度约100bp，并可以对插入突变进行专一性扩增。插入型：f:acgttggatggagccactcccatcctttct，r:acgttggatgtgactgtatgggcgacagag。野生型：f:acgttggatggagccactcccatcctttct，r:acgttggatggcttgtaaggggagctcaga。进行检测，其扩增长度约100bp，并可以对插入突变进行专一性扩增，其质谱分析结果见图3。图中最左侧红色线代表检测引物，右侧2条颜色标记线代表检测产物，同时分别指代2种不同基因型，如图所示结果为野生型。结果显示检测结果较好，基因分型清晰，无假阳性产物生成。表示使用此引物检测该位点，可以成功分型。实验例2(1)针对rs4149601位点设计如下对照扩增引物3：f:aggaaggtaaaacctcctcc，r:ctcctaaatgagacgtctcg。使用这对扩增引物可得到扩增产物101bp。采用该对照引物对两份样本(5号和10号)进行质谱分析结果如图4(5号)和图5(10号)所示，图中最左侧红色线代表检测引物，右侧2条红色标记线代表检测产物，同时分别指代2种不同基因型，如图所示，图6结果无分型结果，图7结果无分型结果。结果显示检测用引物有剩余，无扩增结果，基因分型失败。表示使用此引物检测该位点，无法成功分型。(2)本发明提供的检测rs4149601位点多态性的引物组合：f:acgttggatgaggaaggtaaaacctcctcc，r:acgttggatgtcctaaatgagacgtctcgc。采用该引物组合进行的多次质谱分析结果见图6(野生纯合结果，5号样本)和图7(突变杂合结果，10号样本)，图中最左侧红色线代表检测引物，右侧2条颜色标记线代表检测产物，同时分别指代2种不同基因型，如图6所示结果为g纯合，图7所示结果为ga杂合。结果显示检测结果较好，基因分型清晰，无假阳性产物生成。表示使用此引物检测该位点，可以成功分型。以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。sequencelisting<110>广州金域医学检验集团股份有限公司、广州金域医学检验中心有限公司<120>用于高血压相关药物基因多态性位点检测的引物组、试剂盒和方法<160>58<170>patentinversion3.5<210>1<211>30<212>dna<213>人工序列<400>1acgttggatgcagaccacaatgttaggagg30<210>2<211>30<212>dna<213>人工序列<400>2acgttggatgccatgccagtgctgtatttg30<210>3<211>30<212>dna<213>人工序列<400>3acgttggatgatgagagacatgacgatgcc30<210>4<211>29<212>dna<213>人工序列<400>4acgttggatgagcgccttcttgctggcac29<210>5<211>30<212>dna<213>人工序列<400>5acgttggatgctacacagatgctgtggtgc30<210>6<211>30<212>dna<213>人工序列<400>6acgttggatgtgtcacaggtcactgcatgg30<210>7<211>29<212>dna<213>人工序列<400>7acgttggatgtgccttcatccaacctgcc29<210>8<211>30<212>dna<213>人工序列<400>8acgttggatgtttatctggagggcatcagg30<210>9<211>30<212>dna<213>人工序列<400>9acgttggatgtggtcactctcctctttctg30<210>10<211>30<212>dna<213>人工序列<400>10acgttggatgagatctgcagtacagctgtg30<210>11<211>30<212>dna<213>人工序列<400>11acgttggatgcctgccaaagaagaaacacc30<210>12<211>30<212>dna<213>人工序列<400>12acgttggatgacgtctgcaggtatgtattc30<210>13<211>30<212>dna<213>人工序列<400>13acgttggatgtcaaccccatcatctactgc30<210>14<211>29<212>dna<213>人工序列<400>14acgttggatgggtctccgtgggtcgcgtg29<210>15<211>30<212>dna<213>人工序列<400>15acgttggatgctgtcacaaaccctgtcatc30<210>16<211>30<212>dna<213>人工序列<400>16acgttggatgatgaagtgtccagaataggc30<210>17<211>30<212>dna<213>人工序列<400>17acgttggatgccctgtatttcaatcaggac30<210>18<211>30<212>dna<213>人工序列<400>18acgttggatggcacctggcctaaagacatt30<210>19<211>30<212>dna<213>人工序列<400>19acgttggatgaggaaggtaaaacctcctcc30<210>20<211>30<212>dna<213>人工序列<400>20acgttggatgtcctaaatgagacgtctcgc30<210>21<211>30<212>dna<213>人工序列<400>21acgttggatgcactttccataaaagcaagg30<210>22<211>30<212>dna<213>人工序列<400>22acgttggatggcaataattttcccactatc30<210>23<211>30<212>dna<213>人工序列<400>23acgttggatggcagaggaagctggagaaag30<210>24<211>30<212>dna<213>人工序列<400>24acgttggatgtcgggtgttccggcaaactg30<210>25<211>30<212>dna<213>人工序列<400>25acgttggatgcacaatgttgtgatgggtgc30<210>26<211>30<212>dna<213>人工序列<400>26acgttggatgatctatgtcgggcaagtcac30<210>27<211>30<212>dna<213>人工序列<400>27acgttggatggtcaccaagccagatatgtc30<210>28<211>30<212>dna<213>人工序列<400>28acgttggatgcctcttgcagtctgtcccta30<210>29<211>30<212>dna<213>人工序列<400>29acgttggatgccacataatgcattttctcc30<210>30<211>30<212>dna<213>人工序列<400>30acgttggatgagaacattcctctgcagcac30<210>31<211>30<212>dna<213>人工序列<400>31acgttggatgtcgtagccagcgaatagtag30<210>32<211>30<212>dna<213>人工序列<400>32acgttggatgtctcccacgagagcatcatc30<210>33<211>30<212>dna<213>人工序列<400>33acgttggatgtaaccccgttttcccaacac30<210>34<211>30<212>dna<213>人工序列<400>34acgttggatgtcaaatcactcctcctttgc30<210>35<211>30<212>dna<213>人工序列<400>35acgttggatggtaatgtggtccaaacaggg30<210>36<211>30<212>dna<213>人工序列<400>36acgttggatgacccagcttaacgaatgctc30<210>37<211>30<212>dna<213>人工序列<400>37acgttggatggagccactcccatcctttct30<210>38<211>30<212>dna<213>人工序列<400>38acgttggatggcttgtaaggggagctcaga30<210>39<211>30<212>dna<213>人工序列<400>39acgttggatgtgactgtatgggcgacagag30<210>40<211>23<212>dna<213>人工序列<400>40acaatgttaggagggtattttta23<210>41<211>15<212>dna<213>人工序列<400>41acacctcgtcccttt15<210>42<211>17<212>dna<213>人工序列<400>42accaggtccagagatac17<210>43<211>17<212>dna<213>人工序列<400>43acactcactcctgccca17<210>44<211>20<212>dna<213>人工序列<400>44cctctttctgttctccttta20<210>45<211>22<212>dna<213>人工序列<400>45gacttatttacgcttgaacctc22<210>46<211>16<212>dna<213>人工序列<400>46acgcaaggccttccag16<210>47<211>19<212>dna<213>人工序列<400>47ccactaatcaactttctgc19<210>48<211>19<212>dna<213>人工序列<400>48cggacaagacatggttttt19<210>49<211>19<212>dna<213>人工序列<400>49aagtcttaccgagtgttac19<210>50<211>23<212>dna<213>人工序列<400>50ttaagtaatttgttatgggttcc23<210>51<211>15<212>dna<213>人工序列<400>51gggcctcctctcttt15<210>52<211>21<212>dna<213>人工序列<400>52aagattattaacttcttcccc21<210>53<211>19<212>dna<213>人工序列<400>53agtgttctctttgcagtac19<210>54<211>21<212>dna<213>人工序列<400>54tcaattctgaaaagtagctaa21<210>55<211>16<212>dna<213>人工序列<400>55cgagggagaaggccac16<210>56<211>21<212>dna<213>人工序列<400>56gccagaattcatagaaggaaa21<210>57<211>18<212>dna<213>人工序列<400>57ccaaacagggaagagata18<210>58<211>24<212>dna<213>人工序列<400>58cctgctgcctatacagtcactttt24当前第1页12