原肌球蛋白相关激酶(TRK)抑制剂的药物制剂的制作方法

本申请是申请日为2015年12月17日、申请号为201580076248.9(国际申请号为pct/us2015/066396)、名称为“原肌球蛋白相关激酶(trk)抑制剂的药物制剂”的发明专利申请的分案申请。本发明涉及一种原肌球蛋白相关激酶抑制剂(tropomyosin-relatedkinaseinhibitor)(“trk抑制剂”)，即3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的药物制剂，以及3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式，即3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物。所述一水合物形式具有促进将3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制成药物制剂的期望性质。所述trk抑制剂微晶溶液药物制剂包含呈一水合物形式的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺，其显示出相比无水物形式而言改善的特性。本发明还涉及trk抑制剂3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的延长释放药物制剂，其包含负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球。本发明还涉及使用这些药物制剂治疗疾病包括炎性疾病、自身免疫性疾病、骨代谢缺陷和癌症，以及治疗骨关节炎(oa)、疼痛、术后疼痛和与oa有关的疼痛中的用途。所述trk抑制剂3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺和制备所述trk抑制剂的方法披露于国际专利申请pct/us14/69469和美国专利申请14/564,773，各自标题为原肌球蛋白相关激酶(trk)抑制剂，通过引用将其并入本文。
背景技术：
：不适用技术实现要素：本发明的第一方面涉及trk抑制剂3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的结晶形式，其中使用cukα辐射测量的x射线粉末衍射图含有以下2θ峰：7.14、8.89、10.22、12.42、12.73和14.31。本发明的第二方面涉及药物制剂，其包含trk抑制剂3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的结晶形式和药用赋形剂，其中使用cukα辐射测量的x射线粉末衍射图含有以下2θ峰：7.14、8.89、10.22、12.42、12.73和14.31。本发明的第三方面涉及trk抑制剂3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式。本发明的第四方面涉及药物制剂，其包含trk抑制剂3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式和药用赋形剂。本发明的第五方面涉及延长释放药物制剂，其包含负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球。在第六方面，本发明涉及制备3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的结晶形式的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺与溶剂混合以形成混悬液；b.搅拌混悬液；c.通过过滤收集混悬液中的固体；和d.使固体干燥。在第七方面，本发明涉及制备3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺与溶剂混合以形成混悬液；b.搅拌混悬液；c.通过过滤收集混悬液中的固体；和d.使固体干燥。在第八方面，本发明涉及通过溶剂萃取制备负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶于有机溶剂以形成药物溶液；b.添加聚合物至药物溶液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液；c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液混合至水溶液中以形成乳液；d.添加去离子水至乳液；e.通过溶剂萃取从乳液中形成微球；和f.使用表面活性剂溶液筛分所得微球。以及在第九方面，本发明涉及通过溶剂萃取制备负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散于有机溶剂以形成药物混悬液；b.添加聚合物至药物混悬液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液；c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液与水溶液混合以形成乳液；d.添加去离子水至乳液；e.通过溶剂萃取从乳液中形成微球；和f.使用表面活性剂溶液筛分所得微球。在第十一方面，本发明涉及通过喷雾干燥制备负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶于有机溶剂以形成药物溶液；b.添加聚合物至药物溶液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液；和c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液通过喷雾器泵入干燥器以形成球状颗粒。在第十二方面，本发明涉及通过喷雾干燥制备负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散于有机溶剂以形成药物混悬液；b.添加聚合物至药物混悬液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液；和c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液通过喷雾器泵入干燥器以形成球状颗粒。本发明还涉及以下方面：项1.3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的结晶形式，其中使用cukα辐射测量的x射线粉末衍射图含有以下2θ峰：3.6、7.1、8.9、10.4、10.7、12.4、12.7和14.3。项2.药物制剂，其包含项1的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的结晶形式和药用赋形剂。项3.组合物，其包含：项4.药物制剂，其包含：a.具有以下结构式的化合物：和b.药用赋形剂。项5.项4的药物制剂，其中所述药用赋形剂包括稀释剂。项6.项5的药物制剂，其中所述稀释剂选自：麦芽糖醇、葵花子油、藻酸铵、碳酸钙、乳酸钙、无水磷酸氢钙、磷酸氢钙二水合物、磷酸钙、硅酸钙、硫酸钙、纤维素(粉末状、硅化微晶纤维素)、乙酸纤维素、可压缩糖、糖果剂的糖、玉米淀粉和预胶化淀粉、葡聚糖结合剂、糊精、葡萄糖、赤藓糖醇、乙基纤维素、果糖、富马酸、棕榈酸硬脂酸甘油酯、吸入乳糖、异麦芽糖醇、高岭土、拉克替醇、乳糖(无水的、一水合物和玉米淀粉、一水合物和微晶纤维素，喷雾干燥的)、碳酸镁、氧化镁、糊精-麦芽糖复合剂、麦芽糖、甘露糖醇、中链甘油三酯、微晶纤维素、聚葡萄糖、聚甲基丙烯酸酯、二甲硅油、藻酸钠、氯化钠、山梨糖醇、淀粉(预胶化的、可灭菌的玉米淀粉)、蔗糖、糖球、磺丁基醚β-环糊精、滑石、西黄蓍胶、海藻糖、木糖醇。项7.项6的药物制剂，其中所述稀释剂为山梨糖醇。项8.项4至7中任一项的药物制剂，其中所述药用赋形剂包括助悬剂。项9.项8的药物制剂，其中所述助悬剂选自：阿拉伯胶、琼脂、藻酸、膨润土、硬脂酸钙、卡波姆、羧甲基纤维素(钙和钠)、角叉菜胶、纤维素(微晶纤维素、微晶纤维素和羧甲基纤维素钠，粉末状)、胶体二氧化硅、糊精、明胶、瓜尔胶、水辉石、疏水性胶体二氧化硅、羟基乙基纤维素、羟基甲基纤维素、羟基丙基纤维素、羟丙甲纤维素、高岭土、硅酸镁铝、麦芽糖醇溶液、中链甘油三酯、甲基纤维素、硼酸苯汞、磷脂、聚卡波非、聚乙二醇、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚维酮(聚乙烯基吡咯烷酮)、藻酸丙二醇酯、皂石、麻油、藻酸钠、脱水山梨糖醇酯、蔗糖、西黄蓍胶、维生素e聚乙二醇琥珀酸酯和黄原胶。项10.项9的药物制剂，其中所述助悬剂为聚维酮。项11.项4至10中任一项的药物制剂，其中所述药用赋形剂包括缓冲剂。项12.项11的药物制剂，其中所述缓冲剂选自：己二酸、氨溶液、硼酸、碳酸钙、氢氧化钙、乳酸钙、磷酸钙、柠檬酸一水合物、磷酸氢二钠、二乙醇胺、甘氨酸、马来酸、苹果酸、甲硫氨酸、磷酸二氢钠、单乙醇胺、谷氨酸单钠、磷酸、柠檬酸钾、乙酸钠、碳酸氢钠、硼酸钠、碳酸钠、柠檬酸钠二水合物、氢氧化钠、乳酸钠和三乙醇胺。项13.项12的药物制剂，其中所述缓冲剂为磷酸。项14.项4至13中任一项的药物制剂，其中所述药用赋形剂包括稀释剂、助悬剂和缓冲剂。项15.项14的药物制剂，其中所述稀释剂为山梨糖醇，所述助悬剂为聚维酮，且所述缓冲剂为磷酸。项16.项2的药物制剂，其中所述药用赋形剂包括稀释剂、助悬剂和缓冲剂。项17.项16的药物制剂，其中所述稀释剂为山梨糖醇，所述助悬剂为聚维酮，且所述缓冲剂为磷酸。项18.项2和4至18中任一项的药物制剂，其用于治疗骨关节炎。项19.项2和4至18中任一项的药物制剂，其用于治疗疼痛。项20.项2和4至18中任一项的药物制剂，其用于治疗与骨关节相关的疼痛。项21.延长释放药物制剂，其包含负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球。项22.项21的延长释放药物制剂，其中所述微球包含聚合物。项23.项22的延长释放药物制剂，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯)。项24.项22的延长释放药物制剂，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。项25.项22的延长释放药物制剂，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。项26.项23或项25的延长释放药物制剂，其中所述聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.35dl/g的固有粘度。项27.项23或项25的延长释放药物制剂，其中所述聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度。项28.项23或项25的延长释放药物制剂，其中所述聚(d,l-丙交酯)具有0.25-0.35dl/g的固有粘度。项29.项24或项25的延长释放药物制剂，其中所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.24dl/g的固有粘度。项30.项24或项25的延长释放药物制剂，其中所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.22dl/g的固有粘度。项31.项24或项25的延长释放药物制剂，其中所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度。项32.项25的延长释放药物制剂，其中所述聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.35dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.24dl/g的固有粘度。项33.项25的延长释放药物制剂，其中所述聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.22dl/g的固有粘度。项34.项25的延长释放药物制剂，其中所述聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度。项35.项25的延长释放药物制剂，其中所述聚(d,l-丙交酯)具有0.25-0.35dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.22dl/g的固有粘度。项36.项25的延长释放药物制剂，其中所述聚(d,l-丙交酯)具有0.25-0.35dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度。项37.项25和32至36中任一项的延长释放药物制剂，其中所述微球包含9:1比率的聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。项38.项25和32至36中任一项的延长释放药物制剂，其中所述微球包含9.5:0.5比率的聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。项39.项21至38中任一项的延长释放药物制剂，其中所述微球负载有1％w/w至99％w/w的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。项40.项39的延长释放药物制剂，其中所述微球负载有12％w/w至50％w/w的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。项41.项39的延长释放药物制剂，其中所述微球负载有15％w/w至40％w/w的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。项42.项39的延长释放药物制剂，其中所述微球负载有12％w/w的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。项43.项39的延长释放药物制剂，其中所述微球负载有15％w/w的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。项44.项39的延长释放药物制剂，其中所述微球负载有16％w/w的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。项45.项39的延长释放药物制剂，其中所述微球负载有17％w/w的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。项46.项39的延长释放药物制剂，其中所述微球负载有18％w/w的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。项47.项39的延长释放药物制剂，其中所述微球负载有19％w/w的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。项48.项39的延长释放药物制剂，其中所述微球负载有20％w/w的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。项49.项39的延长释放药物制剂，其中所述微球负载有25％w/w的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。项50.项39的延长释放药物制剂，其中所述微球负载有30％w/w的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。项51.项39的延长释放药物制剂，其中所述微球负载有40％w/w的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。项52.项39的延长释放药物制剂，其中所述微球负载有50％w/w的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。项53.项21至52中任一项的延长释放药物制剂，其用于治疗骨关节炎。项54.项21至52中任一项的延长释放药物制剂，其用于治疗疼痛。项55.项21至52中任一项的延长释放药物制剂，其用于治疗与骨关节炎相关的疼痛。项56.制备3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的结晶形式的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺与溶剂混合以形成混悬液；b.搅拌混悬液；c.通过过滤收集混悬液中的固体；和d.使固体干燥。项57.项56的方法，其中所述溶剂包括丙酮和水的混合物。项58.项56至57中任一项的方法，其中将所述混悬液搅拌过夜。项59.项56至58中任一项的方法，其中将所述固体进行空气干燥。项60.项56的方法，其中所述溶剂包括丙酮和水的混合物，将所述混悬液搅拌过夜，且将所述固体进行空气干燥。项61.制备3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺与溶剂混合以形成混悬液；b.搅拌混悬液；c.通过过滤收集混悬液中的固体；和d.使固体干燥。项62.项61的方法，其中所述溶剂包括丙酮和水的混合物。项63.项61至62中任一项的方法，其中将所述混悬液搅拌过夜。项64.项61至63中任一项的方法，其中将所述固体进行空气干燥。项65.项61的方法，其中所述溶剂为丙酮和水的混合物，将所述混悬液搅拌过夜，且将所述固体进行空气干燥。项66.通过溶剂萃取制备负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶于有机溶剂以形成药物溶液；b.添加聚合物至药物溶液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液；c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液混合至水溶液中以形成乳液；d.添加去离子水至乳液；e.通过溶剂萃取从乳液中形成微球；和f.使用表面活性剂溶液筛分所得微球。项67.项66的方法，其中所述有机溶剂包括(i)二氯甲烷和甲醇，(ii)二氯甲烷，(iii)苯甲醇和甲醇，(iv)二氯甲烷和苯甲醇，(v)氯仿，(v)氯仿和甲醇，或(vii)氯仿和苯甲醇。项68.项67的方法，其中所述有机溶剂包括二氯甲烷和甲醇。项69.项67的方法，其中所述有机溶剂包括二氯甲烷、苯甲醇和甲醇。项70.项67的方法，其中所述有机溶剂包括二氯甲烷和苯甲醇。项71.项66至70中任一项的方法，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯)。项72.项66至70中任一项的方法，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。项73.项66至70中任一项的方法，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。项74.项66至73中任一项的方法，其中所述水溶液包括聚乙烯醇在水中的溶液。项75.项66至73中任一项的方法，其中所述表面活性剂溶液包括泊洛沙姆407在水中的溶液、聚山梨酯80在水中的溶液或聚山梨酯20在水中的溶液。项76.项75的方法，其中所述表面活性剂溶液包括泊洛沙姆407在水中的溶液。项77.通过溶剂萃取制备负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散于有机溶剂以形成药物混悬液；b.添加聚合物至药物混悬液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液；c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液与水溶液混合以形成乳液；d.添加去离子水至乳液；e.通过溶剂萃取从乳液中形成微球；和f.使用表面活性剂溶液筛分所得微球。项78.项77的方法，其中所述有机溶剂包括(i)乙酸乙酯，(ii)二氯甲烷，(iii)氯仿，(iv)乙酸乙酯和二氯甲烷，(v)乙酸乙酯和氯仿，(vi)二氯甲烷和氯仿或(vii)乙酸乙酯、二氯甲烷和氯仿。项79.项78的方法，其中所述有机溶剂包括乙酸乙酯。项80.项78的方法，其中所述有机溶剂包括二氯甲烷。项81.项78的方法，其中所述有机溶剂包括二氯甲烷和乙酸乙酯。项82.项77至81中任一项的方法，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯)。项83.项77至81中任一项的方法，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。项84.项77至81中任一项的方法，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。项85.项77至84中任一项的方法，其中所述水溶液包括聚乙烯醇在水中的溶液。项86.项77至85中任一项的方法，其中所述表面活性剂溶液包括泊洛沙姆407在水中的溶液、聚山梨酯80在水中的溶液或聚山梨酯20在水中的溶液。项87.项86的方法，其中所述表面活性剂溶液包括泊洛沙姆407在水中的溶液。项88.通过喷雾干燥制备负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶于有机溶剂以形成药物溶液；b.添加聚合物至药物溶液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液；和c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液通过喷雾器泵入干燥器以形成球状颗粒。项89.项88的方法，其中所述有机溶剂包括(i)二氯甲烷和甲醇，(ii)二氯甲烷，(iii)苯甲醇和甲醇，(iv)二氯甲烷和苯甲醇，(v)氯仿，(v)氯仿和甲醇，或(vii)氯仿和苯甲醇。项90.项89的方法，其中所述有机溶剂包括二氯甲烷和甲醇。项91.项89的方法，其中所述有机溶剂包括二氯甲烷、苯甲醇和甲醇。项92.项89的方法，其中所述有机溶剂包括二氯甲烷和苯甲醇。项93.项88至92中任一项的方法，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯)。项94.项88至92中任一项的方法，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。项95.项88至92中任一项的方法，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。项96.项88至95中任一项的方法，其中所述喷雾器具有0.7ml/min的喷雾速率。项97.项88至96中任一项的方法，其中所述喷雾器具有4l/min的雾化氮气流速。项98.项88至97中任一项的方法，其中所述干燥器具有50℃的入口温度。项99.项88至98中任一项的方法，其中所述干燥器具有40-45℃的腔室温度。项100.项99的方法，其中所述腔室温度为40-43℃。项101.项99的方法，其中所述腔室温度为41-43℃。项102.项88至101中任一项的方法，其中所述干燥器具有20-30℃的排气温度。项103.项102的方法，其中所述排气温度为22-28℃。项104.通过喷雾干燥制备负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散于有机溶剂以形成药物混悬液；b.添加聚合物至药物混悬液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液；和c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液通过喷雾器泵入干燥器以形成球状颗粒。项105.项104的方法，其中所述有机溶剂包括(i)乙酸乙酯，(ii)二氯甲烷，(iii)氯仿，(iv)乙酸乙酯和二氯甲烷，(v)乙酸乙酯和氯仿，(vi)二氯甲烷和氯仿或(vii)乙酸乙酯、二氯甲烷和氯仿。项106.项105的方法，其中所述有机溶剂包括乙酸乙酯。项107.项105的方法，其中所述有机溶剂包括二氯甲烷。项108.项105的方法，其中所述有机溶剂包括二氯甲烷和乙酸乙酯。项109.项104至108中任一项的方法，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯)。项110.项104至108中任一项的方法，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。项111.项104至108中任一项的方法，其中所述聚合物包括聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。项112.项104至111中任一项的方法，其中所述喷雾器具有0.7ml/min的喷雾速率。项113.项104至112中任一项的方法，其中所述喷雾器具有4l/min的雾化氮气流速。项114.项104至113中任一项的方法，其中所述干燥器具有50℃的入口温度。项115.项104至114中任一项的方法，其中所干燥器具有40-45℃的腔室温度。项116.项115的方法，其中所述腔室温度为40-43℃。项117.项115的方法，其中所述腔室温度为41-43℃。项118.项104至117中任一项的方法，其中所述干燥器具有20-30℃的排气温度。附图说明图1：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的x射线粉末衍射(xrpd),4-40°2θ。使用cukα测量的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的xrpd显示出在7.14、8.89、10.22、12.42、12.73和14.312θ峰处的独特峰。图2：以10℃/min加热的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的差示扫描量热法(dsc)和热重量分析(tga)热解曲线。所述dsc热解曲线展现在76.72、160.13和195.78℃的三个热事件，所述tga热解曲线显示出在25-100℃的3.7％重量损失。图3：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的结晶结构。展现出trk抑制剂的一水合物形式的结晶结构。图4：实验性xrpd图与由单晶结构计算出的xrpd图的叠加。该图展现了实验性粉末图与从单晶结构计算出的图的叠加。强的匹配度表明，单晶结构表示散装材料(bulkmaterial)。图5：api载量对ivr分布(profile)的作用-12％api/9:1r202h:752h、16％api/9:1r202h:752h和20％api/9:1r202h:752h微球。该图比较了3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺负载对不同组成的微球的体外释放分布的作用。图6：16％api/9:1r202h:752h和20％api/9:1r202h:752h微球的dsc热解曲线。所述dsc热解曲线表明20％微球显示130-150℃的熔化吸热，这证实了存在表面药物晶体。图7：16％api/9:1r202h:752h微球的扫描电子显微镜(sem)视图(1500x)。所述16％载药微球未显示药物晶体，指示药物为无定形的。图8：20％api/9:1r202h:752h微球的扫描电子显微镜(sem)视图(1500x)。所述20％载药微球显示表面药物晶体。图9：api载量对ivr分布的作用-15％api/r202h、17％api/r202h和19％api/r202h微球。该图比较了3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺负载对不同组成的微球的体外释放分布的作用。图10：api载量对ivr分布的作用-16％api/9.5:0.5r202h:752h、18％api/9.5:0.5r202h:752h和20％api/9.5:0.5r202h:752h微球。该图比较了3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺负载对不同组成的微球的体外释放分布的作用。图11：聚合物共混物对ivr分布的作用-16％api/r202h、16％api/9.0:0.5r202h:rg752h和16％api/9:1r202h:rg752h微球。该图比较了聚合物共混物对不同组成的微球的体外释放分布的作用。图12：聚合物共混物对ivr分布的作用-16％api/r202h、16％api/9.5:0.5r202h:rg502h和16％api/9:1r202h:rg502h微球。该图比较了聚合物共混物对不同组成的微球的体外释放分布的作用。图13：显示历时180天的零级ivr分布的制剂-15％api/9:1r203h:rg752h和16％api/9.5:0.5r202h:rg502h微球。使用比率为9:1的r203h:752h聚合物中15％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺以及比率为9.5:0.5的r202h:rg502h聚合物中16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制备的微球展现出历时6个月的假零级释放分布。图14：制备中的共溶剂系统对ivr分布的作用-16％api/9:1r203h:rg752h微球-9:1dcm:meoh、9:0.5:0.5dcm:meoh:ba、9.5:.05dcm:ba、9:1dcm:ba。该图比较了微球制备中使用的共溶剂系统对含有16％药物载量和9:1r203h:rg752h的聚合物共混物的微球的体外释放分布的作用。图15：用于增加api载量的dcm:ba共溶剂系统对ivr分布的作用-16％api/9:1r202h:rg752h、25％api/9:1r202h:rg752h、30％api/r202h、40％api/r202h、25％api/r203h、30％api/r203h、40％api/r203h、50％api/r203h微球。该图比较了用于增加药物载量的微球制备中使用的共溶剂系统对不同聚合物共混物的微球的体外释放分布的作用。图16：用微粒化混悬液微囊化方法(micronizedsuspensionmicroencapsulationprocess)制备的微球的扫描电子显微镜(sem)视图(1500x)。通过包囊3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的混悬液产生的微球是球形的，其由于存在嵌入表面的药物晶体而具有粗糙的表面纹理(texture)。图17：微粒化混悬液微囊化方法对ivr分布的作用-25％api/9:1r202h:rg752h39ml5％pva+2.6mlea,25％api/9:1r202h:rg752h39ml5％pva+3.25mlea,25％api/r203h39ml5％pva+2.0mlea,30％微流化api/9:1r202h:rg752h39ml5％pva+2.0mlea,40％微流化api/9:1r202h:rg752h39ml5％pva+2.0mlea,30％微流化api/9:1r202h:rg752h39ml5％pva+2.0mlea,30％微流化api/9:1r202h:rg752h39ml5％pva+2.3mlea,30％微流化api/r202s39ml5％pva+2.0mlea,30％微流化api/r203s39ml5％pva+2.0ml微球。该图比较了在微球制备中使用的微粒化混悬液微囊化方法对具有不同药物载量的微球的体外释放分布的作用。图18：通过溶剂萃取制备的16％api/9:1r202h:rg752h微球的扫描电子显微镜(sem)视图(1000x)。溶剂萃取微球是球形的，具有光滑的表面纹理。图19：通过喷雾干燥制备的16％api/9:1r202h:rg752h微球的扫描电子显微镜(sem)视图(1000x)。喷雾干燥的微球是球形的，具有一些表面纹理。图20：微囊化方法对ivr分布的作用-16％api/9:1r202h:rg752h通过溶剂萃取的微球(ow)、16％api/9:1r202h:rg752h通过喷雾干燥的微球(20％和22.5％聚合物)和16％api/9:1r203h:rg752h通过喷雾干燥的微球(22.5％聚合物)。该图比较了通过溶剂萃取和喷雾干燥制备的负载16％药物的9:1r202h:rg752h微球的体外释放分布。图20：微囊化方法对ivr分布的作用-16％api/9:1r202h:rg752h通过溶剂萃取的微球(ow)、16％api/9:1r202h:rg752h通过喷雾干燥的微球(20％和22.5％聚合物)和16％api/9:1r203h:rg752h通过喷雾干燥的微球(22.5％聚合物)。该图显示了微囊化方法对不同制剂的微球的体外释放分布的作用。图21：喷雾干燥的16％api/1:1r202h:r203h/无添加剂微球的扫描电子显微镜(sem)视图(1000x)。示出喷雾干燥的16％api/1:1r202h:r203h/无添加剂的微球。图22：喷雾干燥的16％api/1:1r202h:r203h/31.25mgpeg微球的扫描电子显微镜(sem)视图(1000x)。示出喷雾干燥的16％api/1:1r202h:r203h/31.25mgpeg微球。图23：喷雾干燥的16％api/1:1r202h:r203h/31.25mg泊洛沙姆407微球的扫描电子显微镜(sem)视图(1000x)。示出喷雾干燥的16％api/1:1r202h:r203h/31.25mg泊洛沙姆407微球。图24：1％10kdapeg或1％泊洛沙姆407对ivr分布的作用-16％api/1:1r202h:r203h/无添加剂、16％api/1:1r202h:r203h/31.25mgpeg、16％api/1:1r202h:r203h/31.25mg泊洛沙姆407。该图比较了通过喷雾干燥制备的16％api/1:1r202h:r203h/无添加剂微球、16％api/1:1r202h:r203h/31.25mgpeg微球和16％api/1:1r202h:r203h/31.25mg泊洛沙姆407的体外释放分布。图25：体内(大鼠)ivr分布-16％api/9:1202h:rg502h和15％api/9:1r203h:rg752h微球。该图显示了历经约3-4个月和5-6个月对于16％api/9:1202:h:rg502h和15％api/9:1r203h:rg752h微球的体内近零级释放。图26：随时间保留的[14c]3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺(大鼠膝关节)-16％api/9:1202h:rg502h和15％api/9:1203h:rg752h微球。关节内给予至大鼠膝关节后，对于16％api/9:1202:h:rg502h和15％api/9:1r203h:rg752h微球显示持续5至6个月的药物释放；16％api/9:1202:h:rg502h显示5个月后在关节中保留12％且15％api/9:1r203h:rg752h显示6个月后保留30％药物。图27：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺浓度-时间分布(大鼠血液)-16％api/9:1202:h:rg502h和15％api/9:1r203h:rg752h微球。该图显示关节内给予负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球后血液中的药物浓度-时间分布。图28：ivr分布-16％api/9:1202:h:rg752h、15％api/9:1r203h:rg752h和40％api/203h微球。图29：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺浓度-时间分布-16％api/9:1202:h:rg752h、15％api/9:1r203h:rg752h和40％api/203h微球。图30：形式1至4(无水物和水合物)的测量或模拟xrpd。示出3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的无水物和水合物形式的xrpd。图31：形式5(乙醇)的xrpd。呈现3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的形式5(乙醇)的xrpd。图32：形式9(丙酮)的xrpd。呈现3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的形式9(丙酮)的xrpd。图33：形式10(丙酮)和形式9(丙酮)的xrpd比较。该图提供了在丙酮中获得的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的两种形式的比较。图34：形式11(乙腈)的xrpd。呈现3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的形式11(乙腈)的xrpd。图35：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的固体结晶相。该图提供了实验中获得的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的十种结晶形式的比较。具体实施方式本发明涉及一种原肌球蛋白相关激酶抑制剂(“trk抑制剂”)，即3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的药物制剂，以及3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式。所述trk抑制剂微晶溶液药物制剂包含呈其一水合物形式的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺，其相对于无水物形式而言显示出改善的特性。本发明还涉及trk抑制剂3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的延长释放药物制剂，其包含负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球。本发明还涉及使用这些药物制剂治疗疾病包括炎性疾病、自身免疫性疾病、骨代谢缺陷和癌症，以及治疗骨关节炎(oa)、疼痛、术后疼痛和与oa有关的疼痛中的用途。本发明的trk抑制剂的药物制剂抑制原肌球蛋白相关激酶a(trka)、原肌球蛋白相关激酶b(trkb)、原肌球蛋白相关激酶c(trkc)和c-fms(集落刺激因子-1(csf-1)的细胞受体)。原肌球蛋白相关激酶(trk)是由称为神经营养因子(neutrophin,nt)的可溶性生长因子活化的高亲和力受体。trka也称为神经营养性酪氨酸激酶受体1型，由神经生长因子(ngf)活化。trkb由脑源性生长因子和nt-4/5活化。trkc由nt3活化。trk的活化导致牵涉细胞信号传导的下游激酶的活化，包括细胞增殖、存活、血管生成和转移。trk牵涉许多疾病，包括oa。本发明的trk抑制剂的药物制剂也可抑制c-fms(集落刺激因子-1(csf-1)的细胞受体)。c-fms在调节巨噬细胞功能中发挥作用，且被认为是在炎性疾病、自身免疫性疾病、骨代谢缺陷和癌症中发挥作用(burnsandwilks,2011,informahealthcare)。oa是以慢性疼痛和关节软骨的破坏为特征的流行和使人虚弱的关节疾病。最近的临床试验已经证实在oa膝盖疼痛中阻断ngf的作用，证明通过静脉内输注抗ngf阻断抗体治疗的患者中显著的疼痛缓解和高像应率(lane,2010,nengljmed)。然而，由于全身抑制ngf信号传导(fda关节炎咨询委员会讨论与抗神经生长因子因子药物相关的安全问题会议；http://www.fda.gov/advisorycommittees/calendar/ucm286556.htm)，这种方式(modality)可能导致不良事件的风险增加。因此，通过开发trk抑制剂，特别是trka抑制剂，ngf的高亲和力受体，采用了靶向ngf介导的oa疼痛的新方法(nicol,2007,molecularinterv)。本发明的trk抑制剂被局部递送，从而避免了静脉内抗ngf给予观察到的全身分布(distribution)。该治疗策略通过允许在非局部位点维持生理必需的ngf信号传导(即感觉/交感神经维持，血管发生)来提供增强的剂量方便性以及更高的安全性。本发明涉及trk抑制剂的药物制剂和使用trk抑制剂的药物制剂治疗疾病的方法。更具体地，本发明涉及用trk抑制剂的药物制剂治疗疼痛、oa、与oa有关的疼痛、术后疼痛、炎性疾病、自身免疫性疾病、骨代谢缺陷和癌症的方法。trk抑制剂的药物组合物可以多种剂型给予，包括作为微晶混悬液和延长释放制剂的局部递送的注射剂。trk抑制剂是包含trk抑制剂的药物组合物中的活性药物成分。trk抑制剂也可与其他活性成分共同给予和/或共同配制用于治疗疾病，包括治疗疼痛、oa和与oa有关的疼痛。本发明的trk抑制剂的药物制剂包含作为活性药物成分的由式(i)表示的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-胺也称为gz389988。式(i)：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺(gz389988)用本发明所要解决的问题是配制包含3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的组合物中的困难。该问题的解决方法是发现3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式与无水物形式相比具有改善的物理和化学性质，包括更佳的物理稳定性和更慢的水溶出度。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的无水物形式证实在溶液中相对不稳定，产生与其配制成药物组合物相关的问题。无水物形式在某些条件下展现出可变的固体形式变化，包括转化成水合物。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式容许额外的稳定性且有必要避免经长期储存和加工期间的无定形转化，且导致增强的物理稳定性。此外，观察到一水合物形式在水溶液中更慢的溶出。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式，也称为gz389988a，由下式(ii)表示。式(ii)：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式(gz389988a)3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的分子量为470.54g/mol，且分子式(elementalformula)为c26h26n6o3。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式是一种灰白色粉末，且在偏振光显微镜下其看上去是精细针状物或纤维状颗粒。根据实施例1合成3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式。本发明的一个具体实施方案是3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的结晶形式，其中使用cukα辐射测量的x射线粉末衍射图(xrpd)含有以下2θ峰：7.14、8.89、10.22、12.42、12.73和14.31。获得xrpd计算结果的方法的详细内容在实施例1中提供。本发明的另一实施方案是一种药物制剂，其包含trk抑制剂3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的结晶形式和药用赋形剂。本发明的另一实施方案涉及trk抑制剂3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺在其它溶剂中的其它晶体形式，所述溶剂包括乙醇、丙酮、乙腈和混合溶剂。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的其它形式和获得xrpd计算结果的方法的详细内容在实施例4中提供。本发明还涉及一种组合物和药物制剂，所述组合物包含由式(i)表示的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的组合物，所述药物制剂包含trk抑制剂3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式和药用赋形剂。trk抑制剂的药物制剂可包含一种或多种药用赋形剂。trk抑制剂的药物制剂的给予方式包括口服、舌下、静脉内、皮下、肌内、关节内、透皮、经直肠、吸入、鞘内/心室内和局部给予。因此，trk抑制剂的药物制剂可配制成例如胶囊、片剂、粉剂、溶液、混悬液、乳剂、冻干粉末或包含可注射微胶囊的延长释放制剂。trk抑制剂的药物制剂中使用的赋形剂将取决于trk抑制剂的药物制剂预期的给予途径。合适的赋形剂包括但不限于无机或有机材料，诸如稀释剂、溶剂、明胶、白蛋白、乳糖、淀粉、稳定剂、熔化剂、乳化剂、助悬剂、盐和缓冲剂。用于关节内制剂诸如溶液或混悬液的合适的药用赋形剂包括但不限于市售的惰性凝胶或液体。由于trk抑制剂3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺和3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的溶解性低，需要助悬剂来制备用于关节内注射的微晶混悬液制剂，其包含trk抑制剂作为活性药物成分。常用的药用助悬剂包括：阿拉伯胶、琼脂、藻酸、膨润土、硬脂酸钙、卡波姆、羧甲基纤维素(钙和钠)、角叉菜胶、纤维素(微晶纤维素、微晶纤维素和羧甲基纤维素钠，粉末状)、胶体二氧化硅、糊精(destrin)、明胶、瓜尔胶、水辉石、疏水性胶体二氧化硅、羟基乙基纤维素、羟基甲基纤维素、羟基丙基纤维素、羟丙甲纤维素、高岭土、硅酸镁铝、麦芽糖醇溶液、中链甘油三酯、甲基纤维素、硼酸苯汞、磷脂、聚卡波非(poycarbophil)、聚乙二醇、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚维酮(聚乙烯基吡咯烷酮)、藻酸丙二醇酯、皂石、麻油、藻酸钠、脱水山梨糖醇酯、蔗糖、西黄蓍胶、维生素e聚乙二醇琥珀酸酯和黄原胶(handbookofpharmaceuticalexcipients,6thedition)。缓冲剂也可用于关节内给予的溶液的制剂，其中所述活性成分为trk抑制剂3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式。药用缓冲剂包括：己二酸、氨溶液、硼酸、碳酸钙、氢氧化钙、乳酸钙、磷酸钙、柠檬酸一水合物、磷酸氢二钠、二乙醇胺、甘氨酸、马来酸、苹果酸、甲硫氨酸、磷酸二氢钠、单乙醇胺、谷氨酸单钠、磷酸、柠檬酸钾、乙酸钠、碳酸氢钠、硼酸钠、碳酸钠、柠檬酸钠二水合物、氢氧化钠、乳酸钠和三乙醇胺(handbookofpharmaceuticalexcipients,6thedition)。因为本发明的trk抑制剂的药物制剂是关节内给予的制剂，它们也可含有稀释剂。适用于本发明应用的稀释剂包括：麦芽糖醇、葵花子油、藻酸铵、碳酸钙、乳酸钙、无水磷酸氢钙、磷酸氢钙二水合物、磷酸钙、硅酸钙、硫酸钙、纤维素(粉末状，硅化微晶纤维素)、乙酸纤维素、可压缩糖、糖粉(confectioner’ssugar)、玉米淀粉和预胶化淀粉、葡聚糖结合剂(dextrate)、糊精、葡萄糖、赤藓糖醇、乙基纤维素、果糖、富马酸、棕榈酸硬脂酸甘油酯、吸入乳糖、异麦芽糖醇、高岭土、拉克替醇、乳糖(无水、一水合物和玉米淀粉、一水合物和微晶纤维素，喷雾干燥的)、碳酸镁、氧化镁、糊精-麦芽糖复合剂、麦芽糖、甘露糖醇、中链甘油三酯、微晶纤维素、聚葡萄糖、聚甲基丙烯酸酯、二甲硅油(simethicone)、藻酸钠、氯化钠、山梨糖醇、淀粉(预胶化的、可灭菌的玉米淀粉)、蔗糖、糖球、磺丁基醚β-环糊精、滑石、西黄蓍胶、海藻糖、木糖醇(handbookofpharmaceuticalexcipients,6thedition)。含有3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式作为活性成分的trk抑制剂的药物制剂的微晶混悬液述于实施例2。本发明还涉及制备3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的结晶形式和制备3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的方法，其包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺与溶剂混合以形成混悬液；b.搅拌混悬液；c.通过过滤收集混悬液中的固体；和d.使固体干燥。在该方法中，用于形成混悬液的溶剂可为丙酮和水的混合物。此外，混悬液可搅拌过夜，并且收集的固体可为空气干燥的。trk抑制剂的延长释放药物制剂可包含3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺或3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式，因为在由药物溶液制备的制剂的情况下，trk抑制剂在微胶包囊和配制之前溶于溶剂中，并且在由药物混悬液制备的制剂的情况下，trk抑制剂在微胶包囊和配制之前混悬于溶剂中。然后如实施例3所述，将含有活性成分的溶液或混悬液与多种聚合物合并，从而微囊化3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微囊化有助于提供具有延长的效果的制剂，至多且持续3个月，且有助于在患者中提供持续的治疗效果。在本发明的具体实施方案中，包含3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的药物制剂包含药用稀释剂、药用助悬剂和药用缓冲剂。在本发明的药物制剂的某些实施方案中，所述稀释剂为山梨糖醇，所述助悬剂为聚维酮，且所述缓冲剂为磷酸。本发明还涉及延长释放药物制剂，其包含负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球。在这些延长释放制剂中，所述trk抑制剂可为3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺或所述化合物的一水合物形式。所述载药微球可进一步包含聚合物。在包含聚合物的负载trk抑制剂的微球的具体实施方案中，所述聚合物选自聚(d,l-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)及聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)两者的组合。在本发明的某些实施方案中，延长释放制剂中使用的聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.35dl/g的固有粘度(inherentviscosity)。在另一实施方案中，聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度。在另一实施方案中，所述聚(d,l-丙交酯)具有0.25-0.35dl/g的固有粘度。在本发明的某些实施方案中，所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.24dl/g的固有粘度。在一个实施方案中，聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.22dl/g的固有粘度。在另一实施方案中，所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度。在包含聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)两者的延长释放制剂中，所述聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.35dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.24dl/g的固有粘度。在一个实施方案中，所述聚(d,l-丙交酯)具有度0.16-0.24dl/g的比浓对数粘且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.22dl/g的固有粘度。在另一实施方案中，所述聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度。在另一实施方案中，所述聚(d,l-丙交酯)具有0.25-0.35dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.22dl/g的固有粘度。且在另一实施方案中，所述聚(d,l-丙交酯)具有0.25-0.35dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.16-0.24dl/g的固有粘度。在另一实施方案中，包含负载trk抑制剂的微球的延长释放药物制剂包含9:1比率的聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。在这些延长释放制剂中，所述聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.35dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.24dl/g的固有粘度。在另一实施方案中，包含负载trk抑制剂的微球的延长释放药物制剂包含9.5:0.5比率的聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。在这些制剂中，所述聚(d,l-丙交酯)具有0.16-0.35dl/g的固有粘度且所述聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)具有0.14-0.24dl/g的固有粘度。在包含负载trk抑制剂的微球的延长释放药物制剂中，所述微球负载有1％w/w至99％w/w3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。在一个更具体的实施方案中，所述微球负载有12％w/w至50％w/w3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。在另一实施方案中，所述微球负载有12％w/w至50％w/w3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。在更具体的实施方案中，所述微球负载有12％w/w、15％w/w、16％w/w、17％w/w、18％w/w、19％w/w、20％w/w、25％w/w、30％w/w、40％w/w或甚至50％w/w3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。本发明还涉及通过溶剂萃取和通过喷雾干燥制备负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的方法。本发明的一种溶剂萃取方法涉及由3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的溶液形成负载trk抑制剂的微球。该方法包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶于有机溶剂以形成药物溶液；b.添加聚合物至药物溶液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液；c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液混合至水溶液中以形成乳液；d.添加去离子水至乳液；e.通过溶剂萃取从乳液中形成微球；和d.使用表面活性剂溶液筛分所得微球。在该方法中，所述有机溶剂可包括(i)二氯甲烷和甲醇，(ii)二氯甲烷，(iii)苯甲醇和甲醇，(iv)二氯甲烷和苯甲醇，(v)氯仿，(v)氯仿和甲醇，或(vii)氯仿和苯甲醇。该方法中的聚合物可为聚(d,l-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)或聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)的组合。该方法中的水溶液可为聚乙烯醇在水中的溶液。该方法中的表面活性剂溶液可为泊洛沙姆407在水中的溶液、聚山梨酯80在水中的溶液或聚山梨酯20在水中的溶液。本发明的另一溶剂萃取方法涉及由3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的混悬液形成负载trk抑制剂的微球。该方法包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散于有机溶剂以形成药物混悬液；b.添加聚合物至药物混悬液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液；c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液与水溶液混合以形成乳液；d.添加去离子水至乳液；e.通过溶剂萃取从乳液中形成微球；和f.使用表面活性剂溶液筛分所得微球。在该方法中，所述有机溶剂可包括(i)乙酸乙酯，(ii)二氯甲烷，(iii)氯仿，(iv)乙酸乙酯和二氯甲烷，(v)乙酸乙酯和氯仿，(vi)二氯甲烷和氯仿，或(vii)乙酸乙酯、二氯甲烷和氯仿。该方法中的聚合物可为聚(d,l-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)或聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)的组合。该方法中的水溶液可为聚乙烯醇在水中的溶液。该方法中的表面活性剂溶液可为泊洛沙姆407在水中的溶液、聚山梨酯80在水中的溶液或聚山梨酯20在水中的溶液。在另一方面，本发明涉及通过喷雾干燥由负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的溶液形成负载trk抑制剂的微球的方法。该方法包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶于有机溶剂以形成药物溶液；b.添加聚合物至药物溶液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液；和c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶液通过喷雾器泵入干燥器以形成球状颗粒。在该方法中，所述有机溶剂可包括(i)二氯甲烷和甲醇，(ii)二氯甲烷，(iii)苯甲醇和甲醇，(iv)二氯甲烷和苯甲醇，(v)氯仿，(v)氯仿和甲醇，或(vii)氯仿和苯甲醇。该方法中的聚合物可为聚(d,l-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)或聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)的组合。该方法的附加参数涉及喷雾器的喷雾速率和雾化氮气流速。所述喷雾速率可为0.7ml/min；所述雾化氮气流速可为4l/min。干燥器中各点处的温度也是可被控制以影响所得微球大小的因素。在该方法中，所述干燥器具有50℃的入口温度、40-45℃的腔室温度和20-30℃的排气温度。在一个更具体的实施方案中，所述腔室温度为40-43℃；更具体地，所述腔室温度为41-43℃。在另一实施方案中，所述排气温度为22-28℃。在另一方面，本发明涉及通过喷雾干燥由负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的混悬液形成负载trk抑制剂的微球的方法。该方法包括：a.使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散于有机溶剂以形成药物混悬液；b.添加聚合物至药物混悬液以形成聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液；和c.使聚合物/3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺分散液通过喷雾器泵入干燥器以形成球状颗粒。在该方法中，所述有机溶剂可包括(i)乙酸乙酯，(ii)二氯甲烷，(iii)氯仿，(iv)乙酸乙酯和二氯甲烷，(v)乙酸乙酯和氯仿，(vi)二氯甲烷和氯仿，或(vii)乙酸乙酯,二氯甲烷和氯仿。该方法中的聚合物可为聚(d,l-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)，或聚(d,l-丙交酯)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)的组合。该方法的附加参数涉及喷雾器的喷雾速率和雾化氮气流速。所述喷雾速率可为0.7ml/min；所述雾化氮气流速可为4l/min。干燥器中各点处的温度也是可被控制以影响所得微球大小的因素。在该方法中，所述干燥器具有50℃的入口温度，40-45℃的腔室温度和20-30℃的排气温度。在一个更具体的实施方案中，所述腔室温度为40-43℃；更具体地，所述腔室温度为41-43℃。在另一实施方案中，所述排气温度为22-28℃。以下非限制性实施例示例性说明本发明的各种实施方案，包括制备3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式、含有3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的药物制剂、3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的延长释放药物制剂的方法以及制备这些延长释放制剂的方法。实施例实施例1：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式实施例1-1：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的合成向3-甲氧基-4-(4-甲氧基苄基氧基)苯基)甲胺(2.00g,7.32mmol)和5-溴-2-氯-3-硝基吡啶(1.66g,6.97mmol)于乙腈(50ml)中的经搅拌溶液中添加n,n-二异丙基乙基胺(1.13g,8.71mmol)。将所得混合物加热至回流并搅拌。64h后，将反应混合物冷却至室温并用水稀释。用二氯甲烷萃取混合物两次。将合并的有机相以硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到3.34g(>100％)5-溴-n-(3-甲氧基-4-(4-甲氧基苄基氧基)苄基)-3-硝基吡啶-2-胺，其为黄棕色固体。向搅拌的5-溴-n-(3-甲氧基-4-(4-甲氧基苄基氧基)苄基)-3-硝基吡啶-2-胺于四氢呋喃(40ml)、乙醇(40ml)和水(40ml)中的溶液中添加亚硫酸氢钠(6.09g,34.99mmol)。将所得混合物加热至回流并搅拌。4h后，将反应混合物冷却至室温并用水稀释。用二氯甲烷萃取黄色混合物三次。将合并的有机相用盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩，得到3.10g黄棕色固体。进行色谱纯化(combi-flash40gsio2gold柱,1-2.5％甲醇/二氯甲烷)，得到1.28g(51％)5-溴-n2-(3-甲氧基-4-(4-甲氧基苄基氧基)苄基)吡啶-2,3-二胺，其为黄色固体。向经搅拌的5-溴-n2-(3-甲氧基-4-(4-甲氧基苄基氧基)苄基)吡啶-2,3-二胺(0.850g,1.91mmol)于二氯甲烷(30ml)和甲醇(30ml)中的溶液中添加溴化氰(5.0m于乙腈中,573μl,2.87mmol)。将所得溶液在室温搅拌。24h后，添加第二等份的溴化氰溶液(600μl)并继续搅拌。48h后，添加第三等份的溴化氰溶液(600μl)并继续搅拌。总计72h后，浓缩反应混合物，并将残余物溶于二氯甲烷。将溶液用1n氢氧化钠溶液洗涤，以硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到1.17g棕色固体。进行色谱纯化(combi-flash,40gsio2gold柱,1-10％2m氨/甲醇/二氯甲烷)，得到0.28g(32％)6-溴-3-(3-甲氧基-4-(4-甲氧基苄基氧基)苄基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺，其为棕色固体。向经搅拌的6-溴-3-(3-甲氧基-4-(4-甲氧基苄基氧基)苄基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺(0.25g,0.53mmol)于1,4-二噁烷(10ml)和水(4ml)中的溶液中添加1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1h-吡唑(0.14g,0.66mmol)、磷酸钾(0.39g,1.84mmol)、三环己基膦(0.015g,0.052mmol)、乙酸钯(ii)(0.005g,0.026mmol)。将反应混合物在微波反应器中加热至125℃。15min后，将反应混合物冷却至室温并用水稀释。用乙酸乙酯萃取混合物两次。将合并的有机相用盐水洗涤，以硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到0.36g，绿棕色固体。进行色谱纯化(combi-flash,12gsio2gold柱,1-10％2m氨/甲醇/二氯甲烷)，得到0.10g(41％)产物，其为浅绿色固体。将3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺添加至丙酮(2ml)和水(0.1ml)的混合物中。将混悬液在室温通过磁力搅拌棒搅拌过夜。通过过滤收集固体并在空气中干燥。通过质子nmr证实结构。差示扫描量热法(dsc)热解曲线在76.72、160.13和195.78℃展现三个热事件，热重量分析(tga)热解曲线显示自25至100℃的3.7％重量损失，x射线粉末衍射分析(xrpd)显示使用cukα测量的在3.6、7.1、8.9、10.4、10.7、12.4、12.7和14.32θ峰的独特峰(准确度±0.2°)。实施例1-2：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的结晶结构的鉴定还解析了3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的结晶结构。自丙酮/水中重结晶3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的晶体。当将大小为0.20*0.08*0.03mm的晶体置于mitegenmicromount的顶端时，其符合合适的衍射框。在bruker/axs三圆衍射仪上收集x射线衍射数据，所述衍射仪装配有smartapex区域探测器(area-detector)、低温装置(lt2型)和铜-k微焦点发生器，其在45kv/650μa和具有约250μm图像焦点直径的聚焦光束montel多层光学器件操作(wiesmannetal.,2007)。使用程序包smartv5.628(brukeraxs,2001)收集数据，并使用程序saint+release6.45(brukeraxs,2003)进行处理。该分析产生2459次反射(0<h<24,-4<k<0,-19<l<19)，其中全部2459次反射均是独特的(rint＝n.a.,rσ＝0.1583)。使用1405次反射进行晶胞参数的精修。应用经验吸收校正并使用apex2套件的“结构-解析(structure-solution)”模块解析相位问题。使用apex2套件的xl模块(brukeraxs,2011)，通过最小二乘法((fo2–fc2)2的最小化)来精修结构。计算所有氢原子的位置，s拟合优度＝1.085，r所有数据＝0.1329(1614次反射的robs.数据＝0.0920，其中|fobs|>4σ,wr2所有数据＝0.2710,wr2观测数据＝0.2377)。差示图中的最大未分配峰对应于c-c键的平均估计标准偏差(e.s.d.)为o-c键的平均估计标准偏差为且n-c键的平均估计标准偏差为平均e.s.d.c-c-c键角的平均估计标准偏差为0.7且c-c-c-c扭转角的平均估计标准偏差为1.004°。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的结晶结构示于图3。图4显示由单晶结构计算出的实验粉末图的叠加。强的匹配度表明，单晶结构表示散装材料。实施例2：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物微晶混悬液制剂开发了trk抑制剂的药物制剂的微晶混悬液，其中3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式为活性成分。将这些制剂开发成不溶性3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺颗粒的混悬液以使得所述trk抑制剂随时间持续递送至体内。该方法依赖于活性成分的差溶解度和用于控制释放持续时间的剂量；其还显示3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺约1个月的体内持续递送。实施例2-1：20mg/ml3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物注射用微晶混悬液制备包含每毫升溶液20mg3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的药物制剂。20mg/ml微晶混悬液的组合物提供于下表1中。表1：20mg/ml微晶混悬液制剂应用10％的过量填装(overfilling)实施例2-2：制备20mg/ml3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物微晶混悬液制剂的方法根据以下步骤制备3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的20mg/ml溶液：1.通过以下方式制备磷酸盐缓冲液10mmph7.4：组合适量注射用水(wfi)和磷酸二氢钠，搅拌至完全溶解，然后用氢氧化钠1n溶液调节ph至7.4(±0.2)。2.通过以下方式制备媒介物：组合适量山梨糖醇和聚维酮k17热原(pyrogen)，添加磷酸盐缓冲液10mmph7.4并搅拌直至完全溶解。3.然后通过0.22μmpvdf[聚偏二氟乙烯]亲水型过滤器过滤所得媒介物。4.通过以下方式制备浓缩的混悬液：使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式与媒介物大致混合，以获得30mg/ml浓缩的混悬液。5.在75μm不锈钢筛上过滤保持在搅拌下的浓缩的混悬液。6.预过滤的混悬液仍保持搅拌并在40μm不锈钢筛上过滤，以获得浓缩物混悬液。7.用经过滤的媒介物浓缩混悬液调节，以获得20mg/ml混悬液。8.将最终的混悬液填充至无菌和去热原的无色i型玻璃小瓶中至3.6ml填充体积。用无菌和去热原的经etfe包覆的溴丁基瓶塞封闭小瓶。将瓶塞用无菌铝盖和无菌白色塑料盖压接在小瓶上。9.将填充的小瓶在高压灭菌设备中灭菌。实施例2-3：20mg/ml3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物微晶混悬液制剂的临床剂量将3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的20mg/ml微晶混悬液进一步修饰，以获得呈成品药品构型的将要向患者给予的剂量和体积。必要时由20mg/ml微晶混悬液重构目标剂量。不同的剂量和体积格式的总结在表2中提供。表2：20mg/ml3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物微晶混悬液的临床处方重构不需要达到所需的最终浓度。2x2.7ml小瓶实施例3：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺延长释放制剂在一些情况下，期望延长药物释放的持续时间，例如延长至大于3个月的暴露时间。因此，使用化合物的无水物或一水合物形式产生和配制的trk抑制剂3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺作为活性成分的延长释放制剂。所述延长释放制剂方法使用聚(d,l-丙交酯)(pla)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)(plga)聚合物或pla-plga聚合物的组合，以包囊3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺(活性药物成分[api]或药物物质[ds])，从而产生可注射微囊的药品[dp]溶液。这些制剂可提供持续或大于3个月的药物暴露于体内。该实施例的延长释放制剂的制备中使用的不同聚合物的总结在表3中提供。表3：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物延长释放制剂中使用的聚合物*用ubbelhode大小0c玻璃毛细管粘度计以0.1％w/v于chcl3中在25℃测量固有粘度。来源：http://www.resomer.com/product/biodegradable-polymers/en/pharma-polymers/products/pages/bioresorbable-polymer.aspx含有3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺作为活性成分的trk抑制剂的延长释放药物制剂使用生物可消化的聚合物，即聚(d,l-丙交酯)和/或聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)，以改变活性成分从药物颗粒溶解至聚合物水解的释放的控制。使用聚合物与活性成分载量的适当组合，可控制药物释放速率以导致3个月或更长的暴露。plga/pla聚合物和3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的具体组合以延长药物释放的持续时间大于3个月的方式组合；这些制剂在该实施例中进一步讨论。实施例3-1：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺负载对体外释放分布的作用通过溶剂萃取制备包含3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的药物组合物。用于制备各批次的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺和pla/pgla聚合物物料的量示于表4。检查了各种制剂的体外释放(ivr)动力学。表4：微球的组合物–12％api/9:1r202h:752h、16％api/9:1r202h:752h和20％api/9:1r202h:752h通过溶剂萃取制备gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*总聚合物量＝260mg伴随轻微加热(约30分钟)，将3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶于2ml9:1二氯甲烷(dcm):甲醇(meoh)。历经30分钟添加聚合物并溶解。另外，将39ml冷的无菌过滤的聚乙烯胺(pva)溶液(5％w/v于水中)置于装配有7.9x38.1mmteflon磁力搅拌棒的250ml烧杯中。将烧杯置于在ikarct基本搅拌平台设置(basicstirplateset)(500rpm)上的冰浴中。使用连接至5cc玻璃hamilton注射器的pallacrodisc0.2μmptfe注射器过滤器，将聚合物/药物溶液过滤至pva溶液中。添加后，聚合物/药物溶液形成乳状液。1分钟后，添加160ml冷去离子水。5分钟后，搅拌速度降至300rpm。历经3小时通过溶剂萃取法形成微球。通过75μm和38μm叠筛使用冷的0.1％kolliphorp407于去离子水中筛选微球；收集38-75μm级分并除去多余的淋洗液。将微球在-80℃冷冻并冻干。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺自微球制剂中释放的ivr动力学通过制备与其模拟膝盖的关节内环境的微球于0.2％透明质酸+0.2％kolliphorp407中的2％(w/v)含水混悬液确定。在一式三份中，将一定体积含有500μg3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的理论载量的混悬液吸入含有0.5％十二烷基硫酸钠/pbs,ph7.4释放介质的单独的50ml玻璃离心管中。将管置于37℃互动摇床培养箱侧。在每个时间点，允许微球沉降，取样1ml释放介质并置换。为了确定ivr样品中3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的实际总质量，将用于释放研究的相同体积的混悬液取样(一式三份)并添加10ml二甲基亚砜。将样品进行超声处理，轻轻加热并在室温置于摇臂上以溶解。使用hplc-uv分析这些样品的总3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺含量。将累积ivr分布对实际3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺载量相对于时间的百分数作图。3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺包囊效率通过将实际药物载量除以理论载量来确定。为了确定实际载量，将精确称重的负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球溶于二甲基亚砜中，并通过hplc-uv测量3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺浓度。ivr分布显示，高于16％(w/w)的药物载量水平显示突然释放(burstrelease)(图5)。通过差示扫描量热法(dsc)和扫描电子显微镜(sem)鉴定了该突然释放的原因。dsc分析表明，高于16％(w/w)的药物载量水平显示在微球中药物结晶，如通过在130-150℃的熔融吸热所证明(图6)。药物结晶也通过sem显示，其中高于16％的药物载量水平显示微球表面上的药物晶体(图7)。图6说明20％微球显示130-150℃之间的熔化吸热，确证表面药物晶体的存在。图7和图8显示负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球在1500x的sem。图7，16％载药微球，显示没有药物晶体(药物为无定形的)；图8，20％载药微球，显示表面药物晶体。使用相关的微球组合物还说明了药物结晶对ivr的影响。图9显示由用r202h聚合物制备的微球的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的ivr。图10显示由用9.5:0.5比例的r202h和rg752h聚合物制备的微球的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的ivr。在这些实施例中，高于16％(w/w)的药物载量水平显示突然释放；药物突然释放程度与药物载量水平直接相关。实施例3-2：聚-丙交酯和聚-丙交酯-共-乙交酯聚合物共混物对3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的体外释放分布的作用实施例3-2-1：16％api/r202h、16％api/9.0:0.5r202h:rg752h和16％api/9:1r202h:752h微球制备包含于r202h、9.0:0.5r202h:rg752h和9:1r202h:752h中的16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺及于r202h、9.0:0.5r202h:rg502h和9:1r202h:rg502h中的16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的药物组合物，以评估不同聚合物共混物对3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的体外释放动力学的影响。表5示出用于制备每批的药物和聚合物质量。用于制备这些制剂的方法描述于实施例3-1。表5：含有聚-丙交酯和聚-丙交酯-共-乙交酯聚合物共混物(16％api/r202h、16％api/9.0:0.5r202h:rg752h和16％api/9:1r202h:rg752h)的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺微球制剂通过溶剂萃取制备gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*总聚合物量＝260mg包囊效率和ivr分析如实施例3-1所述进行。制剂4、5和6的包囊效率分别为96.1±2.6％、87.8±6.3％和77.7±8.6％。使用于r202h聚合物中的16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制备的微球展现出双相释放速率，具有0-70天的缓慢初始释放速率和随后70-110天的更快二次释放速率(图11)。将更亲水的聚合物rg752h(75:25plga)混合至pla微球制剂增加了初始释放速率。该plga聚合物允许更快的水吸收至微球中，导致速率增加。以9:1r202h:rg752h的比率，初始释放与二次释放速率相匹配，产生历时3个月的假零级释放分布(图11)。实施例3-2-2：16％api/r202h、16％api/9.5:0.5r202h:rg502h和16％api/9:1r202h:rg502h微球制备含有于r202h、9.0:0.5r202h:rg502h和9:1r202h:rg502h中的16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的药物组合物，以评估不同聚合物共混物对3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的体外释放动力学的影响。表6示出用于制备各批次的药物和聚合物质量。用于制备这些制剂的方法述于实施例3-1。表6：微球的组合物–16％api/r202h、16％api/9.5:0.5r202h:rg502h和16％api/9:1r202h:rg502h通过溶剂萃取制备gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*总聚合物量＝260mg包囊效率和ivr分析如实施例3-1所述进行。制剂7、8和9的包囊效率分别为96.1±2.6％、91.7±3.3％和94.2±2.5％。使用于r202h聚合物中的16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制备的微球展现出双相释放速率，具有0-70天的缓慢初始释放速率和随后70-110天的更快二次释放速率(图12)。将更亲水的50:50plga聚合物(rg752h)混合至pla微球制剂增加了初始释放速率。rg752h允许更快的水吸收至微球中，导致该速率增加。以9.5:0.5r202h:rg502h的比率，初始释放与二次释放速率相匹配，产生历时6个月的假零级释放分布(图12)。实施例3-3：显示历时180天的零级体外释放动力学的微球制剂的制备和表征制备包含于9:1r203h:rg752h中的15％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺及于9.0:0.5r202h:rg502h中的16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的药物组合物并分析体内释放动力学。表7示出用于制备各批次的药物和聚合物质量。表7：微球的组合物–15％api/9:1r203h:rg502h和16％api/9.5:0.5r202h:rg502h)通过溶剂萃取制备gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*总聚合物量＝260mg包囊效率和ivr分析如实施例3-1所述进行。制剂10和11的包囊效率分别为89.7±2.1％和91.7±3.3％。使用于9:1比率的r203h:752h聚合物中的15％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺及于9.5:0.5比率的r202h:rg502h聚合物中的16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制备的微球展现出历时6个月的假零级释放分布(图13)。实施例3-4：制备中的共溶剂系统对3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的体外释放分布的作用实施例3-4-1：如于9:1dcm:meoh、9:0.5:0.5dcm:meoh:ba、9:5dcm:ba和9:1dcm:ba中制备的16％api/9:1r202h:rg752h使用具有不同比率的溶剂二氯甲烷(dcm)、甲醇(meoh)和苯甲醇(ba)的各种共溶剂溶液制备包含于9:1r202h:rg752h中的负载16％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的药物组合物。所用的比率为9:1dcm:meoh、9:0.5:0.5dcm:meoh:ba、9.5:0.5dcm:ba和9:1dcm:ba。对于用于制备各批次的药物、聚合物和共溶剂，参见表8。用于制备这些制剂的方法述于实施例3-1。表8：用共溶剂系统制备的微球的组合物–16％api/9:1r203h:rg752h通过溶剂萃取制备(各种共溶剂系统)gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*总聚合物量＝260mg包囊效率和ivr分析如实施例3-1所述进行。制剂12、13、14和15的包囊效率分别为77.7±8.6％、94.9±2.0％、90.5±2.6％和94.4±1.5％。由于其增强溶解3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的能力，选择苯甲醇掺入共溶剂系统中。图14和图15显示苯甲醇可用作含有二氯甲烷或二氯甲烷和甲醇的共溶剂的部分，以产生微球而不影响释放速率。这可用于减少微球产生过程中3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺可能的重结晶。实施例3-4-2：dcm:ba用于提高3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺载量的用途使用不同体积的二氯甲烷(dcm)和苯甲醇(ba)制备药物组合物，其包含于9:1r202h:rg752h中的16％和25％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺及于r202h中的30％和40％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺及于r203h中的25％、30％、40％和50％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。对于用于制备各批次的药物和聚合物质量及溶剂体积，参见表9。用于制备这些制剂的方法述于实施例3-1。表9：用dcm:ba共溶剂系统制备的微球的组合物–16％api/9:1r202h:rg752h、25％api/9:1r202h:rg752h、30％api/r202h、40％api/r202h、25％api/r203h、30％api/r203h、40％api/r203h、50％api/r203h通过溶剂萃取制备gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*总聚合物量＝260mg包囊效率和ivr分析如实施例3-1所述进行。用不同体积二氯甲烷(dcm)和苯甲醇(ba)产生的制剂的包囊效率为：由于其增强溶解3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的能力，选择苯甲醇掺入共溶剂系统中。图10显示苯甲醇可用作含有二氯甲烷的共溶剂的部分，以产生具有高至载量50％(w/w)的微球。一些所示释放分布具有应当达到3-6月持续时间的最小突然释放和动力学。方法中使用的苯甲醇的体积影响3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的突然释放。减少溶剂系统中苯甲醇的量，但仍保持api即3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺在聚合物溶液中的溶解度，降低突然释放效应(bursteffect)。通过减少向患者给予的聚合物的量，增加api载量提供了益处。这预期提高植入物的生物相容性并减少重复给予后聚合物积聚的可能性。此外，增加的api载量应转化成较低的每单位制造成本。实施例3-5：微粒化混悬液微囊化方法对3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的体外释放分布的作用用3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式制备药物组合物，其包含于9:1r202h:rg752h中的25％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺(一水合物形式)、于9:1r203h:rg752h中的30％和40％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺、于r202h中的25％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺、于r202s中的30％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺及于r203s中的30％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。对于用于制备各批次的药物和聚合物质量，参见表10。使用来自生产批次的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制备批次27、28和29，而使用3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制备批次30、31、32、33、34和35，其使用微流化方法进行微粉化以确保粒径小于10μm直径。该实施例比较了当聚合物分散在具有或不具有乙酸乙酯(ea)的聚乙烯醇(pva)溶液中获得的微球中的差异，以及api载量、聚合物组成和不同聚合物溶液浓度(通过改变ea体积)。表10：用微粒化混悬液微囊化方法制备的微球的组合物–16％api/9:1r202h:rg752h、25％api/9:1r202h:rg752h、30％api/r202h、40％api/r202h、25％api/r203h、30％api/r203h、40％api/r203h、50％api/r203h通过溶剂萃取制备gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*总聚合物量＝260mgsem分析显示，通过包囊3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的混悬液产生的微球由于嵌入表面的药物晶体的存在而是球形的，具有粗糙的表面纹理(图16)。包囊效率和ivr分析如实施例3-1所述进行。批号30、31、32、33、34和35的包囊效率分别为103.3±3.8％、101.6±5.3％、94.7±4.0％、97.1±0.2％、35.6±0.8％和62.5±3.0％。没有在批次27、28或29上进行包囊效率。ivr分布显示突然释放范围为25％至47％，接着是4天后的无释放(图17)。对批次进行评估长达21天。实施例3-6：包囊方法对3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的体外释放分布的作用使用9:1比率的二氯甲烷(dcm):苯甲醇(ba)制备药物组合物，其包含于9:1r202h:rg752h中的16％和25％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺及于r203h中的25％和30％3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。对于用于制备各批次的药物和聚合物质量，参见表11。用于制备批次23的方法述于实施例3-1,批次2。通过伴随轻微超声处理使3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺溶于5.016g9:1dcm/meoh制备批次24。然后添加两种聚合物并溶解。表11：通过溶剂萃取和喷雾干燥制备的微球的组合物–16％api/9:1r202h:rg752h和无api/9:1r202h:rg752hgz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*总聚合物量＝260mg(对于批次23)和1254mg(对于批次24)喷雾干燥使用装配有具有0.4mm开口的流体喷嘴的procept,4m8装置进行。喷雾干燥条件和参数如下：sem分析显示，溶剂萃取微球是球形的，具有光滑的表面纹理，而喷雾干燥微球是球形的，具有一些表面纹理(图18和图19)。包囊效率和ivr分析如实施例3-1所述进行。溶剂萃取批次36和喷雾干燥批次37和38的包囊效率分别为107.4±11.6％、91.4±4.3％和92.6±3.6％。两种微囊化方法产生具有近零级释放分布的微球。图18和图19显示负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球在1000x的sem。ivr分布显示不同的释放速率(图20)；喷雾干燥制剂实现3-6个月递送的期望持续时间。实施例3-7：1％10kdapeg或1％泊洛沙姆407对16％(w/w)3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的喷雾干燥微球的体外释放分布的作用进行该实验以确定添加亲水性添加剂是否可用于加速来自pla/pga微球的gz389988的体外释放速率。在该实验中，将微球(无添加剂)与用1％10kdapeg或1％泊洛沙姆407制备的微球进行比较。表12详细说明了用于制备每批的药物和聚合物质量。表12：用1％10kdapeg或1％泊洛沙姆407制备的微球的组合物–16％api/1:1r202h:r203h/无添加剂、16％api/1:1r202h:r203h/31.25mgpeg、16％api/1:1r202h:r203h/31.25mg泊洛沙姆407通过喷雾干燥制备gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺喷雾干燥使用装配有具有0.4mm开口的双流体喷嘴的procept,4m8装置进行。喷雾干燥条件和参数如下：批号404142gz389988载量(％,w/w)161616plga溶液浓度(％,w/v):22.522.522.5喷雾速率(ml/min):0.70.70.7空气流速(l/min):0.350.350.35雾化氮气流速(l/min):444冷却器温度(℃):-4-4-4入口温度(℃):505050腔室温度(℃):404040排气温度(℃):292929预旋流器压力(mbar):27-3027-3027-30sem分析显示，用或不用亲水性添加剂制备的喷雾干燥微球显示类似的大小分布和表面纹理；所有喷雾干燥微球均是球形的，具有一些表面纹理(图21、图22和图23)。包囊效率和ivr分析如实施例3-1所述进行。喷雾干燥批号40、41和42的包囊效率分别为102.0±16.3％、101.7±16.3％和100.5±16.1％。不用添加剂制备的微球显示gz389988的缓慢的近零级释放，其中历经35天释放约20％的活性化合物(图24)。1％10kdapeg或1％泊洛沙姆407的添加增加了释放速率；历经35天释放约42％的活性化合物。该实施例说明，掺入亲水性赋形剂可加速gz389988从pla/pga微球中的体外释放速率。实施例4：体内研究实施例4-1：关节内注射至大鼠膝关节后负载[14c]-3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球的体内表现选择两种制剂来比较体外释放动力学与大鼠膝关节中的体内药物持久性。制剂示于表13。使用实施例3-1中所述的方法进行体外释放测试。使用[14c]-3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺和未标记的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺进行体内药物持久性测试；两种药物形式在微囊化过程中共溶解，以确保微球中药物分布均匀。向每只大鼠关节给予的放射性活度(radioactivity)总量为约1.2mbq。大鼠膝关节中药物保留的评价如下进行：在每个时间点处死2-3只大鼠，冷冻研磨膝关节并从研磨的组织提取3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺。通过液体闪烁计数进行定量。通过将每个时间点的放射性计数除以处理后0.1小时处死的大鼠的放射性计数，计算关节中回收的放射性活度的量。将大鼠血液中的放射性药物的浓度(以neq/g表示)随时间作图并与化合物的已知ic50值进行比较。表13：体内测试的微球的组合物–16％api/9:1202:h:rg502h和15％api/9:1r203h:rg752hgz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺*总聚合物量＝260mg批次40和41的ivr分布分别显示历时近3-4个月和5-6个月的近零级段释放(图25)。关节内注射至大鼠膝关节后，批次43和44显示超过5至6个月的药物释放；批次43显示5个月后关节中12％的保留且批次44显示6个月后30％的药物保留(图26)。相比于可能由于微球在滑膜中的定位而导致的ivr率，体内药物释放率略低。图27显示血液中的药物浓度-时间分布。关节内给予负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球后，系统隔室中3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的浓度在第一周内略高于ec50值(基于细胞)，但是然后在实验期间(5-6个月)下降到低于ec50值。该实验说明，负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球以低系统性(即亚治疗性)药物暴露提供持续的局部药物递送至膝关节。实施例4-2：评估单一关节内注射三种负载3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的微球缓释微球制剂后gz389988的药物动力学选择三种制剂来比较大鼠膝关节中关节内注射后系统隔室内的体外和体内药物动力学。制剂示于表14。使用实施例3-1中所述的方法进行体外释放测试。通过用给予微球制剂注射3只雄性wistar大鼠(0.1或1mg的gz389988至膝关节)来测量体内表现。在每个时间点，通过颈静脉插管收集血液样品(约0.25ml)并置于含有k2edta作为抗凝剂的冷冻管中，混合，并保持在冰上直至离心。将样品在4℃的温度收集1小时内，在3,000×g离心5至10分钟。将血液样品离心至聚丙烯管后，收集血浆。将血浆样品在干冰上冷冻，并在lc-ms/ms分析前在-60至-80℃冷冻保存。将gz389988在大鼠血浆中的浓度(以ng/ml表示)对时间(总共28天)作图。表14：评估gz389988的药物动力学中测试的微球的组成和剂量gz389988＝3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺制剂a和制剂b的ivr分布显示缓释，历经28天约有10％的活性化合物释放。制剂c在最初5天显示稍高的初始释放，接着在剩余的23天显示降低的释放率；历经28天约22％的活性化合物释放。关节内给予至大鼠膝关节后，制剂a和b历经28天显示出类似的血浆-药物暴露分布；两种制剂均显示出在实验持续时间内具有稳态血浆水平的1-1.5小时的tmax值(对于0.1和1.0mg剂量分别为0.08和0.8ng/ml)。与制剂a和b相比，制剂c在实验持续时间内显示出更高的cmax值和更高的稳态血浆水平(对于0.1和1.0mg剂量分别为1.2至12ng/ml)(图29)。这些结果与ivr实验结果非常一致。实施例4-3：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺在具有膝盖的疼痛性骨关节炎的患者中的安全性、耐受性和药物动力学的临床研究在两部分双盲安慰剂对照临床研究中，测试3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的一水合物形式的安全性和功效，以评估单次逐步增加的关节内剂量的安全性、耐受性和药物动力学，随后评估具有膝盖的疼痛性骨关节炎的患者中单次关节内剂量的功效、安全性、耐受性和药物动力学。在第一部分研究中，膝盖中单次关节内注射各种剂量的根据上述实施例2制备的3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺一水合物微晶混悬液，针对3ml和5ml的安慰剂剂量进行测试。诊断为原发性膝盖骨关节炎的成年男性和女性有资格参与研究。患者具有症状超过6个月并在与研究相关的任何手术之前提供书面知情同意书。在注射后12周，基于安全性和耐受性(不良事件、体检、体重、体温、临床实验室测试、血压、心率、12导联心电图、局部耐受性)评价功效。还评价了药物动力学(血浆和(如果可能的话)滑膜液中)和药效学。在研究药物或安慰剂给予后，患者被随访84±7天，并选择继续进行长期观察性安全性研究而无需额外的研究药物给予，以评估长期安全性和疗效。实施例5：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的多晶型现象研究为了鉴定3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺在纯溶剂及溶剂和水的受控混合物中的晶型，进行了gz389988的多晶型现象研究。用作多晶型物的表征工具的技术包括x射线粉末衍射(xrpd)、高分辨率x射线粉末衍射(hr-xrpd)和单晶x射线衍射(xrscd)、热重量分析(tga)与红外光谱(ft-ir)或质谱(ms)、水和溶剂的动态蒸气吸附(dvs)和光学显微术(om)。这些技术在下文更详细地描述。高分辨率x射线粉末衍射(hr-xrpd)在panalyticalx'pertprompd粉末衍射仪的环境条件下，使用偶联有x'celerator检测器的bragg-brentano(垂直θ-2θ配置)准聚焦几何图形记录高分辨率图。使用密封的铜阳极x射线管，在45kv和40ma水平运行的。入射光束单色仪(johansson型：对称切割的弯曲锗(111)晶体)产生纯cukα1辐射对于每组实验，将产品的薄层沉积在用单晶硅晶片覆盖的样品架的表面上。通过系统消光根据si(510)结晶取向切割晶片，阻止硅的任何bragg反射。可用的角度范围从2延伸到50°2θ，其中步长为0.017°2θ。使用每步100到2500秒的可变计数时间。x射线粉末衍射(xrpd)其他xrpd分析在siemens-bruckerd8advance粉末衍射仪上进行，还使用bragg-brentano(垂直θ-θ配置)准聚焦几何形状和anton-paarttk450温度室。产品的薄层沉积在单晶硅晶片上，通过系统消光根据si(510)结晶取向切割，阻止晶片的任何bragg反射。使用在40kv和35ma水平运行的密封铜阳极x射线管。通常发射两条线：和放置在检测器和样品之间的镍β过滤器并没有完全消除辐射，其仍然贡献了检测器(制造商的数据)约1％的衍射光束。光束通过soller狭缝发送，以改善其平行度。可变发散狭缝保持样品面积的照度不变。准直器限制管和样品之间的扩散。lynxeye线性检测器完成了设置。它在2θ角度处有一个3.5°宽的检测窗口。在以下条件记录图：在环境温度，从2至40°2θ角度扫描。积分时间取决于实验条件。使用以2θ为计的每步0.1秒计数时间进行进化研究和大多数扫描。更长的积分时间(至多5s)可能已被用于表征稳定形式。x射线单晶衍射(xrscd，也称scxrd)在brukersmartapex单晶衍射仪上记录xrscd数据。使用钼iμs微聚焦x射线源，在50kv和0.6ma运行，发射mo-kα辐射电荷耦合元件(ccd芯片：4k,62mm)面积检测器位于6.0cm处。oxfordcryosystems氮气低温恒温器(cryostreamplus)允许在100k进行xrscd实验。将晶体从paratonentm油滴安装到低背景mylarmitegen环上。收集了一个完整的ewald反射球体(3个ω扫描，680帧，帧宽为0.3°)。累积时间取决于晶体。使用apex2(v2014.11-0)程序套件建立取向矩阵和单位晶胞。使用saint(v8.34a)程序进行3d反射分布和所有反射的整合。sadabs(v2014/5)程序用于校正lorentz和极化效应以及通过样品的吸收。试验性空间群用xprep(v2014/2)程序确定。shelxtl(v2014/7)套件用于通过内在定相方法解析结构，并通过f2全矩阵最小二乘法精修解决方案。多晶型物鉴定和表征使用上述技术，鉴定3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的晶型。这些形式、使用辐射测量的xrpd2θ峰和形成条件示于下表15。表15：3-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-胺的形式一水合物形式1、无水物形式2和3的测量hr-xrpd图以及倍半水合物形式4的模拟xrpd图在图30中绘制在一起。在混合溶剂乙醇/水(99/1)中将20mg/mlgz389988a形式一水合物的混悬液在80℃加热1小时。然后过滤混悬液。接下来，将溶液在室温保持过夜。一夜之后，观察到晶体，随后鉴定为对应于乙醇溶剂化物形式(标示为形式5)。通过乙醇和水的混合物(99/1)的缓慢蒸发获得的晶体的物理性质适于通过单晶x射线衍射进行分析。在5x50x200μm3晶体上以100k进行测量，累积时间为300s/帧。衍射图证实了所分析颗粒的结晶度。图31显示了在室温测量的乙醇溶剂化物粉末的hr-xrpd图(底部)，与由在100k测量的xrscd数据模拟的xrpd图(上部)相比。在丙酮/水的混合物(99/1)或纯丙酮中制备20mg/mlgz389988a形式一水合物1(形式1)的混悬液，并在80℃加热1小时以实现完全溶解。接下来，过滤混悬液。然后将溶液保持在室温或5℃。一夜之后，裸眼可见晶体，随后鉴定为对应于丙酮溶剂化物形式(标示为形式9)。通过丙酮和水的混合物(99/1)的缓慢蒸发获得的晶体的物理性质适于通过单晶xr衍射进行分析。在100x200x2000μm3晶体上以100k进行测量，累积时间为30s/帧。图32展现了在室温测量的丙酮溶剂化物粉末的xrpd图(底部)，并由xrscd在100k模拟的图(上部)。在另一实验中，在纯丙酮中制备20mg/mlgz389988a形式一水合物1(形式1)的混悬液，并在80℃加热1小时。接下来，过滤混悬液，然后直接冷却至5℃并在该温度储存。一夜之后，裸眼可见晶体且类似于针对丙酮溶剂化物1,形式9所获得的那些。将其在研钵中悬浮研磨后，鉴定为对应于另一种丙酮溶剂化物,形式10。图33比较了两种丙酮溶剂化物形式的xrpd，形式9(底部)和形式10(上部)。将20mg/mlgz389988a形式一水合物在乙腈(acn)中的混悬液在80℃加热4小时。然后过滤混悬液。接下来，将溶液在40℃保持过夜，然后放置2小时，冷却至室温。一夜之后，在小瓶的底部形成晶体簇。乙腈(acn)溶剂化物形式(形式11)的hr-xrpd图如图34所报道。在丙酮/水和乙腈/水混合溶剂中形成的固体结晶相的鉴定50mggz389988a一水合物1补充有三种不同重量比的2ml溶剂(丙酮或乙腈)和去矿物质水的混合物：50/50、80/20和95/5。用丙酮探测比率为99/1和98/2的其他混合物。在80℃2小时后，在标称孔径为0.45μm的ptfe注射器过滤器上过滤样品，过滤后再次在80℃储存15分钟。然后将样品在40℃放置冷却过夜，然后在室温再冷却24小时。然后通过xrpd在用相应溶剂饱和的腔中分析样品。如果需要，将大晶体在小瓶中用刮刀粉碎成更细的粉末。然后将“湿”粉末的样品尽可能平坦地沉积在样品架上。这些分析的结果示于下表16。表16：丙酮/水和乙腈/水混合物中gz389988a的固体结晶相在本实施例中研究并示出了由一水合物1在乙醇、丙酮、乙腈及丙酮/水和乙腈/水混合物中的结晶的溶剂化物和水合物的形成。已经鉴定了十种结晶相：·无水物相1(形式2)·无水物相2(形式3)·无水物相3(形式6/7)·一水合物1(形式1)·一水合物2(形式8)·倍半水合物(形式4)·乙醇溶剂化物(形式5)·丙酮溶剂化物1(形式9)·丙酮溶剂化物2(形式10)·乙腈溶剂化物(形式11)相应的衍射图在图35中绘制在一起。从对乙醇、丙酮和乙腈以及溶剂混合物(丙酮/水和乙腈/水)的多晶型现象研究可得出若干结论。所有三种纯溶剂导致形成固体结晶溶剂化物相。gz389988a在乙醇和乙腈中重结晶各自导致一种溶剂化物形式。从丙酮中重结晶已经得到两种溶剂化物形式。在重量比为98:2、97:3、95:5、80:20和50:50的丙酮/水混合溶剂体系中形成的晶体均呈一水合物1结晶相。在重量比为95:5、80:20和50:50的乙腈/水混合溶剂体系中形成的晶体也均为一水合物1晶体。已经观察到丙酮溶剂化物1经去溶剂化转化为大部分无定形固体。如果通过混合丙酮和水的蒸气的存在增加分子迁移率，则初始丙酮溶剂化物1晶体和无定形固体重组成一水合物1。乙醇、乙腈和丙酮溶剂化物1在氮气下暴露于120℃的温度去溶剂化成相同的无水结晶相2。对于乙醇、乙腈和丙酮溶剂化物2形式观察到同晶型现象(isomorphism)(待单晶x射线衍射确证)。它们均可逆地溶剂化成相同的无水物相3。无水物相3水合成一水合物形式，即不同于一水合物1的“一水合物2”。当前第1页1 2 3