例2
[0026]取20g的磷脂混合物(PC含量为85 %，PC含量为85 %，LPC的含量为0.7%，GPC的含量为0.1 %，由蛋黄磷脂提取制得)，添加500ml的pH为6.5的缓冲液(0.25M柠檬酸-NaOH)，添加0.4g的偏甘油酯脂肪酶lipase G (天野公司产品，甘油二酯脂肪酶)，并将混合物均质I分钟。将反应混合物在40°C下正常搅拌I小时。然后利用液相色谱分析酶反应产物得到PC的含量为85 %，LPC的含量为0.1%，GPC的含量为0.7%。
[0027]实施例1
[0028]取20g的磷脂混合物(PC含量为85 %，LPC的含量为0.7%，GPC的含量为0.1%，由蛋黄磷脂提取制得)，添加500ml的pH为6.5的缓冲液(0.25M柠檬酸-NaOH)，添加0.2g的磷脂酶Lecitase Ultra (诺维信公司产品，具有磷脂酶Al活力)，同时添加0.4g的偏甘油酯脂肪酶lipase G(天野公司产品，甘油二酯脂肪酶)，并将混合物均质I分钟，将反应混合物在40°C下正常搅拌进行酶促反应。反应30分钟后取样，利用液相色谱分析酶反应产物得到PC的含量为38.5%, LPC的含量为4.6%,GPC的含量为42.8%;反应I个小时后取样，利用液相色谱分析酶反应产物得到PC的含量为1.7%，LPC的含量为1.5%，GPC的含量为82.6 %，GPC的得率为97 %。
[0029]实施例2
[0030]取20g的磷脂混合物(PC含量为85 %，LPC的含量为0.7%，GPC的含量为0.1%，由蛋黄磷脂提取制得)，添加500ml的pH为6.5的缓冲液(0.25M柠檬酸-NaOH)，添加0.2g的磷脂酶Lecitase Ultra (诺维信公司产品，具有磷脂酶Al活力)，同时添加0.4g的偏甘油酯脂肪酶Lipase SMGl，并将混合物均质I分钟，将反应混合物在30°C下正常搅拌进行酶促反应。反应30分钟后取样，利用液相色谱分析酶反应产物得到PC的含量为31.2%，LPC的含量为3.4%,GPC的含量为51.2%;反应I个小时后取样，利用液相色谱分析酶反应产物得到PC的含量为1.2%，LPC的含量为1.1%，GPC的含量为83.4%,GPC的得率为97.8%。
[0031]实施例3
[0032]取20g的磷脂混合物(PC含量为85 %，LPC的含量为0.7%，GPC的含量为0.1%，由蛋黄磷脂提取制得)，添加500ml的pH为6.5的缓冲液(0.25M柠檬酸-NaOH)，添加0.4g的磷脂酶Lecitase Ultra (诺维信公司产品，具有磷脂酶Al活力)，同时添加0.2g的偏甘油酯脂肪酶Lipase SMG1，并将混合物均质I分钟，将反应混合物在30°C下正常搅拌进行酶促反应。反应30分钟后取样，利用液相色谱分析酶反应产物得到PC的含量为18.1%，LPC的含量为23.6%, GPC的含量为44.1% ;反应I个小时后取样，利用液相色谱分析酶反应产物得到PC的含量为0.7%，LPC的含量为3.4%，GPC的含量为81.7%，GPC的得率为96.1% ο
[0033]实施例4
[0034]取20g的磷脂混合物(PC含量为85 %，LPC的含量为0.7%，GPC的含量为0.1%，由蛋黄磷脂提取制得)，添加1ml的pH为6.5的缓冲液(0.25M柠檬酸-NaOH)，5g的无水乙醇，添加0.2g的磷脂酶Lecitase Ultra(诺维信公司产品，具有磷脂酶Al活力)，同时添加0.4g的偏甘油酯脂肪酶Lipase SMGl，并将混合物均质I分钟，将反应混合物在30°C下正常搅拌进行酶促反应。并在反应进行到1inm时添加1g无水乙醇，20min时添加20g无水乙醇，共计添加35g的无水乙醇。反应30分钟后取样，利用液相色谱分析酶反应产物得到PC的含量为27.1%,LPC的含量为10.4%,GPC的含量为48.4%;反应I个小时后取样，利用液相色谱分析酶反应产物得到PC的含量为6.1%，LPC的含量为3.4%, GPC的含量为76.3%, GPC 的得率为 89.8%0
【主权项】
1.一种酶法制备甘油磷酸胆碱的方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将含有磷脂酰胆碱的磷脂与羟基供体、磷脂酶、偏甘油酯脂肪酶混合后，进行水解或醇解反应；所述磷脂酶为磷脂酶A和磷脂酶B中的一种或两种的混合物； (2)分离反应产物，回收甘油磷酸胆碱。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述偏甘油酯脂肪酶为偏甘油酯脂肪酶Lipase SMGl和Lipase G中的一种或两种的混合。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷脂酶和偏甘油酯脂肪酶的质量比为0.1:1?1:10 ;所述磷脂酶的质量分数为0.1?I %。
4.根据权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于，步骤(I)所述反应的时间为30?120分钟，pH为4-8，温度为10-50 0C ο
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述反应的时间为45?60分钟，pH为6-8，温度为 20-50 °C。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述反应的温度为30-45?。
7.根据权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于，所述羟基供体为水或短链一元醇。
8.根据权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于，所述羟基供体与磷脂酰胆碱的摩尔比不低于2:1。
【专利摘要】本发明公开了一种酶法制备甘油磷酸胆碱的方法，包括以下步骤：(1)将含有磷脂酰胆碱的磷脂与羟基供体、磷脂酶、偏甘油酯脂肪酶混合后，进行水解或醇解反应；所述磷脂酶为磷脂酶A和磷脂酶B中的一种或两种的混合物；(2)分离反应产物，回收甘油磷酸胆碱。本发明涉及磷脂酶和偏甘油酯脂肪酶一起用于酶反应，催化底物中磷脂酰胆碱去除脂肪酸酰基制备甘油磷酸胆碱。当采用偏甘油酯脂肪酶与磷脂酶一起使用时磷脂酰胆碱的转化率、酶反应速率和甘油磷酸胆碱的得率远高于磷脂酶单独使用时，其中底物中的磷脂酰胆碱的转化率可以达到95％以上，反应持续时间可以少于一个小时。
【IPC分类】C12P13-00
【公开号】CN104818303
【申请号】CN201510180687
【发明人】王卫飞, 王永华, 杨博, 严慧玲, 蓝东明, 李志刚
【申请人】华南理工大学
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年4月16日