分别以甲酸钠、葡萄糖、柠檬酸钠、乙酸钠、酒石酸钾钠、琥珀酸钠 作为唯一碳源，在C/N= 15, pH= 7. 6,盐度3%，28°C，160r/min条件下震荡培养16h，测 定菌浊度（〇D_)及硝酸盐及亚硝酸盐含量。实验结果如图1所示，菌株在以柠檬酸钠为唯 一碳源时，生长好且脱氮效率最高，能在16h内能将100mL N03_-N完全去除且无亚硝酸盐积 累。
[0054] 2?不同C/N比对海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp. )CYT1_8反硝化性能的影响： 以100mL N03_-N为唯一氮源，柠檬酸钠为碳源，pH = 7. 6,盐度3%，设置不同C/N比（3、6、 9、12、15、18、21、24)，28°0，16〇17^11震荡培养1611，测定菌浊度（00 6(|(|)及硝酸盐和亚硝酸 盐含量。结果见图2,结果表明海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp. )CYTl-8在C/N为时3-24 均能生长，在(：/^为12、15、18、21、24时，1611内海洋卓贝尔氏菌（2(*611611 &8口.）0￥1'1-8 能将100mL NCV-N去除完全。
[0055] 3?不同pH值对海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp. )CYT1_8反硝化性能的影响：以 100mL N03_-N为唯一氮源，柠檬酸钠为碳源，C/N= 12,盐度3%，设置不同的pH值（5. 5、 6. 5、7. 5、8. 5、9. 5、10. 5)，28°C，160r/min震荡培养16h，测定菌浊度（0D6J及硝酸盐和亚 硝酸盐含量。结果见图3,结果表明海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp.)CYTl_8脱氮pH范围 较广，偏酸（pH = 6. 5)或者偏碱（pH = 9. 5)时，海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp. )CYTl-8 对硝酸盐的去除率均达到100%，无亚硝酸盐残留。
[0056] 4.不同盐度对海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp.)CYTl_8反硝化性能的影响：以 100mL NCV-N为唯一氮源，柠檬酸钠为碳源，C/N= 12，pH= 7. 8,设置不同盐度（0、10、20、 30、40、50、60〇,281：，16017/1^11震荡培养1611，测定菌浊度（00 6(|(|)及硝酸盐和亚硝酸盐含 量。结果见图4,结果表明海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp.)CYTl_8在盐度为0~3%时， 菌体生长较快且脱氮效果高，16h内脱氮效率均达到100%，并且无亚硝酸盐累积。
[0057] 5.不同温度对菌株反硝化性能的影响：以lOOmL N03_-N为唯一氮源，柠檬酸钠 为碳源，（：州=12，？11 = 7.8，盐度为3%，设置不同温度（151：、251：、351：、401：、45°〇， 160r/min震荡培养16h，测定菌浊度（0D_)及硝酸盐和亚硝酸盐含量。结果见图5,结果表 明35~40°C，海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp. )CYTl-8生长速度快，16h时0D6QQ分别为 0. 745和0. 950,硝酸盐去除效率达到100 %且无亚硝酸积累。
[0058] 实施例3最优条件下卓贝尔氏菌的反硝化性能测定
[0059] 挑取海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp. ) CYT1-8的单菌落划线至Marine Agar固 体平板上，28°C培养24h后取出，刮取新鲜菌体，用无氮培养基制成菌悬液，菌种浓度调至 109(^11/1^，按照0.2%的接种量分别接种到以1001^勵 34或勵21为唯一氮源的海水培 养基中（以柠檬酸钠为唯一碳源，C/N = 12, pH = 7. 8,盐度3% )，于35°C，160r/min摇床 中培养，每隔4h取样检测亚硝酸盐和硝酸盐的浓度、菌体浓度0D_。结果见图6和7,结果 表明海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp. )CYT1_8在最优条件下，对硝酸盐和亚硝酸盐去除效 率高，16h时的脱氮率达到100%，脱氮速率为6. 25mg-N/l ? h。
[0060] 实施例4海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp. )CYT1_8对高浓度N02_-N耐受性及脱 氮效果
[0061] 培养方法同实施例3。以500mL、600mL、700mL、1000mL NCV-N为唯一氮源对海洋 卓贝尔氏菌（Zobellella sp.)CYTl_8生长情况及脱氮性能进行测定。结果见图8,结果表 明海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp. )CYT1_8对高浓度亚硝酸盐具有很好的耐受性和去除 能力，分别能在72h、84h、96h和168h内将500mL、600mL、700mL和1000mL亚硝酸盐完全脱 除，脱除速率分别为：6. 94mg_N/l ? h、7. 14mg_N/l ? h、7. 29mg_N/l ? h、5. 95mg_N/l ? h。
[0062] 实施例5海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp. )CYT1_8在海水养殖生物脱氮中的应 用
[0063] 选择已养殖4个月的南美白对虾高位池，采集养殖水12L，0. 22 ym滤膜过滤除菌。 收集海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp. )CYT1_8新鲜菌体，用无菌生理盐水洗涤后接种到装 有2L上述无菌养殖水的玻璃缸中，调整菌体浓度使得水体中海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp.) CYT1-8初始菌体浓度为1 X 107cfu/mL。同时设置不加菌液的过滤养殖海水为对照，每 组设3个平行。在每个缸中放养20尾体长约0. 5cm的南美白对虾幼苗，在水温28°C下进 行实验，每隔24h取水样测定养殖海水中的COD、N03_-N、N0 2_-N和NH4_-N浓度，以及培养液 的〇D_，同时统计虾苗的存活情况。96h后，经统计分析虾苗存活率在85%~95%，实验 组和对照组之间的虾苗存活率无显著差异，说明海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp.)CYTl_8 对海水养殖对虾没有毒害作用。此外，如图9所示，经过海洋卓贝尔氏菌（Zobellella sp.) CYT1-8处理4d后，养殖水的NCV-N、NCV-N和NH，-N浓度由初始的25. 5mL、5. 38mL和 13. 5mL分别降到9. 6mL、3. 05mL和4. 98mL，总脱氮率达到60. 3 %。并且COD也从87. 3mL 降为52. 5mL。而对照组在处理过程中和原养殖水水质差别不大。因此海洋卓贝尔氏菌 (Zobellella sp. )CYT1_8对养殖水体氮素有较好的脱除效果，且对养殖生物无毒害作用， 在海水养殖生物脱氮中具有较好的应用前景。
【主权项】
1. 海洋卓贝尔氏菌（Zobellellasp. )CYT1_8,已于2015年04月29日保藏于中国典 型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCN0:M2015267。
2. 如权利要求1所述海洋卓贝尔氏菌（Zobellellasp. )CYT1_8在处理亚硝酸盐废水 中应用。
3. 如权利要求1所述海洋卓贝尔氏菌（Zobellellasp. )CYT1_8在海淡水养殖生物脱 氮中应用。
4. 如权利要求3所述应用，其特征在于：所述海淡水养殖生物脱氮包括但不限于海水 养殖废水或淡水养殖废水的脱氮。
5. 如权利要求1所述海洋卓贝尔氏菌（Zobellellasp. )CYT1_8在亚硝酸盐毒害去除 中应用。
6. 如权利要求1所述的海洋卓贝尔氏菌（Zobellellasp. )CYT1_8在制备用于任何形 式的好氧、厌氧反硝化脱氮活菌制剂中应用。
【专利摘要】一株海洋卓贝尔氏菌及其应用，属于微生物应用技术领域。海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8，保藏编号：CCTCC NO:M 2015267。海洋卓贝尔氏菌(Zobellella sp.)CYT1-8可在处理亚硝酸盐废水、在海淡水养殖生物脱氮、在亚硝酸盐毒害去除、在制备用于任何形式的好氧厌氧反硝化脱氮活菌制剂等中应用。所述海淡水养殖生物脱氮包括但不限于海水养殖废水或淡水养殖废水的脱氮。CCTCC NO: M 201526720150429
【IPC分类】C12N1-20, C12R1-01, C02F3-34, C02F101-16
【公开号】CN104845920
【申请号】CN201510316321
【发明人】邵宗泽, 王丽萍, 李小义
【申请人】国家海洋局第三海洋研究所
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年6月10日