专利名称：一种施罗氏弧菌多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒和检测方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种专用于可导致珊瑚发生白化现象的病原弧菌一施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)的快速检测试剂盒和检测方法。
背景技术：
施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)是一种海洋弧菌,能够侵染珊瑚，引起珊瑚的细菌性白化。目前，施罗氏弧菌的检测方法主要是传统的微生物分类鉴定方法及依赖于PCR技术的检测方法。传统的微生物分类和鉴定方法主要是以微生物的形态学和生理生化等特 性作为判断依据，虽然结果可信度高，但是繁琐且费时。现阶段采用最多的还是分子生物学的方法，其主要依赖于PCR技术对某些特异性的基因进行扩增。可是这些方法都存在一定的缺陷(I)检测耗时，过程繁琐；(2)检测灵敏度低，检测出病原菌时往往是发病晚期；检测的目标基因过于单一，容易漏检由于环境差异导致的同种不同菌株，不能全面反应该种病原菌的潜在致病性。因此，在做病原细菌的检测时，只有同时检测尽可能多的特异基因，才能使检测结果更加具有可靠性，对病原细菌的鉴定更加准确。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种更为快速准确地评价施罗氏弧菌(Vibrioshilonii)致病性的施罗氏弧菌多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒。本发明的施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒，包括PCR反应试剂，多基因PCR引物和GeXP多重扩增反应试剂，其特征在于，所述的多基因PCR引物包括13对多基因PCR引物和一对通用引物，具体如下含有荧光标记的通用引物对序列，可按常规技术将荧光标记加到下述通用引物序列上，所述的荧光标记优选为CY5荧光标记TY-F: 5，-AGGTGACACTATAGAATA-3，TY-B: 5，-GTACGACTCACTATAGGGA-3，为毒力基因sod(NCBI Reference Sequence:NZ_ABCH01000140. I)设计的引物，扩增片段大小约为IlObp sod-F AGGTGACACTATAGAATA CCGTTCATGTAGTCTGGACGsod-R GTACGACTCACTATAGGGA GCAGCGACTCCACTAACAGA为毒力基因fldA(NCBI Reference Sequence:NZ_ABCH0100015l. I)设计的引物，扩增片段大小约为117bp fIdA-F AGGTGACACTATAGAATA ACGTGACATCGTTGAAGCAAfldA-R GTACGACTCACTATAGGGA AGGCCAACGAATTGTGACTC为毒力基因ompUL(GenBank:EU727214. I)设计的引物，扩增片段大小约为124bp ompUL-F AGGTGACACTATAGAATA TTGGTGCGGGTTATCAGCTA
ompUL-R GTACGACTCACTATAGGGA CGAATACGGTCTGTTAGGTCG为毒力基因toxS(GenBank:EU727211. I)设计的引物，扩增片段大小约为131bp toxS-F AGGTGACACTATAGAATA CGCGGATATATTCACCACCTtoxS-R GTACGACTCACTATAGGGA CAATGAATGGCAATCCAACA为毒力基因Bcp(NCBIReference Sequence:NZ_ABCH01000011. I)设计的引物，扩增片段大小约为138bp Bcp-F AGGTGACACTATAGAATA AACGTTGTGAGCGTCAAGCBcp-R GTACGACTCACTATAGGGA GGCAACACCGTCACACTACA
为毒力基因dnaj (GenBank:ΑΒ263067· I)设计的引物，扩增的片段大小约为145bp dnaJ-F AGGTGACACTATAGAATA ATTCGGTGATATCTTTGGCGdnaJ-R GTACGACTCACTATAGGGA CTCAACGAGCGTTGGAACTT为毒力基因mshA (GenBank:NZ_ABCH01000011. I)设计的引物，扩增片段大小约为152bp mshA-F AGGTGACACTATAGAATA CTGAGCGACGGTTATCAACAmshA-R GTACGACTCACTATAGGGA ATGGTCACGTTAGTTTGCCC为毒力基因z2z3 (GenBank:AF009900. I)设计的引物，扩增片段大小约为159bp z2z3-F AGGTGACACTATAGAATA CTCTCATTGGTTAGCCCTCGz2z3-R GTACGACTCACTATAGGGA ATCATCGGAAGATCAGCGTC为毒力基因fimA(NCBI Reference Sequence:NZ_ABCH01000010. I)设计的引物，扩增片段大小约为166bp fimA-F AGGTGACACTATAGAATA AGCTGTGGTTGATTGGCTCTfimA-R GTACGACTCACTATAGGGA TACCGTTACTGGTGGTGCAA为毒力基因pyrH(GenBank:JN039147. I)设计的引物，扩增片段大小约为173bp pyrH-F AGGTGACACTATAGAATA GACCGTATGGCACAAGAGGTpyrH-R GTACGACTCACTATAGGGA CGCATAGCTAGGCCATTCAT为毒力基因toxRL(GenBank:EU727208. I)设计的引物，扩增片段大小约为180bp toxRL-F AGGTGACACTATAGAATA ACTACGACCATTGCCCAAACtoxRL-R GTACGACTCACTATAGGGA TAGTGTTGAGCGCTCTGTGC为毒力基因rpoA(GenBank:AJ842695. I)设计的引物，扩增片段大小约为187bp rpoA-F AGGTGACACTATAGAATA ACGTGTTGAGCAGCGTACTGrpoA-R GTACGACTCACTATAGGGA AATAGGATCGAACTCCGGCT为毒力基因recA(GenBank:AJ580887. I)设计的引物，扩增片段大小约为195bp recA-F AGGTGACACTATAGAATA ACCATGGACGTTGAAACCATrecA-R GTACGACTCACTATAGGGA GGCATGTTCTGCATCGATAA。本发明的第二个目的是提供施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)多重毒力因子GeXP快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤提取施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)的基因组DNA，以其作为模板，用上述13对多基因PCR引物和I对通用引物进行多重PCR扩增得到多重PCR反应产物，利用GenomeLabGeXP遗传分析系统对多重PCR反应产物进行检测分析。如果能扩增到相应的PCR产物，则证明该施罗氏弧菌具有相应的毒力基因。本发明的施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)多重毒力因子GeXP快速检测方法是用于非诊断目的的。所述的以施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)的基因组DNA作为模板，用上述13对多基因PCR引物和I对通用引物进行多重PCR扩增得到多重PCR反应产物是以施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)的基因组DNA作为模板，用上述13对多基因PCR引物等比例混合，每个引物终浓度为0. 2-2 μ M，再加入通用引物对，终浓度为1-20 μ Μ，混合均匀为引物预混液，其反应体系和程序优选为2(Γ50μ L的PCR反应体系，包括10XPCR Buffer 2 5 μ L，IOmMdNTP I. 6 4μ L，5M/y L 的 TaqE O. 2 O. 5 μ L，引物预混液 O. 2 O. 5 μ L，模板 DNA O. 8 2 μ L，ddH2015 37. 5μ L ;反应程序为94°C 3min ；94°C 30s、59 62°C 50 60s、72°C 100s，25 35 个循环；72°C 7min。 本发明针对已知13个施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)的毒力基因，设计特异性引物，利用本发明的检测试剂盒，按照本发明的方法，可以通过单管反应，一次性快速、高效的同时检测13种基因，而得知检测出样品或环境中是否含有携带这些毒力相关基因、具有潜在致病能力的施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)，其检测覆盖面广，可大大提高施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)致病性评价的准确性,为施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)致病性评价提供了更为有效的检测手段，在对珊瑚虫白化病害的监测、防治方面具有重大的意义。
图I是实施例I的检测结果图；图2是实施例2的检测结果图。
具体实施例方式以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。实施例I :(I)提取施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)的基因组DNA首先对珊瑚样品中的施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)进行平板的纯化分离,再培养施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)。①在离心管中加入50 μ L10%(w/v)无菌Chelex-100溶液；②从施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)培养平板上,挑取单菌落至上述Chelex-100溶液中；③将离心管放置在涡旋混合器上充分震荡10s，沸水浴lOmin，冷却至室温，再充分震荡IOs ；④12000r/min离心2min,上清液即为施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)基因组DNA,置于-20°C冰箱备用。(2)多基因PCR引物的设计与合成为毒力基因sod(NCBI Reference Sequence:NZ_ABCH01000140. I)设计的引物，扩增片段大小约为IlObp
sod-F AGGTGACACTATAGAATA CCGTTCATGTAGTCTGGACGsod-R GTACGACTCACTATAGGGA GCAGCGACTCCACTAACAGA为毒力基因fldA(NCBI Reference Sequence:NZ_ABCH0100015l. I)设计的引物，扩增片段大小约为117bp fIdA-F AGGTGACACTATAGAATA ACGTGACATCGTTGAAGCAAfldA-R GTACGACTCACTATAGGGA AGGCCAACGAATTGTGACTC为毒力基因ompUL(GenBank:EU727214. I)设计的引物，扩增片段大小约为124bp ompUL-F AGGTGACACTATAGAATA TTGGTGCGGGTTATCAGCTA
ompUL-R GTACGACTCACTATAGGGA CGAATACGGTCTGTTAGGTCG为毒力基因toxS(GenBank:EU727211. I)设计的引物，扩增片段大小约为131bp toxS-F AGGTGACACTATAGAATA CGCGGATATATTCACCACCTtoxS-R GTACGACTCACTATAGGGA CAATGAATGGCAATCCAACA为毒力基因Bcp(NCBIReference Sequence:NZ_ABCH01000011. I)设计的引物，扩增片段大小约为138bp Bcp-F AGGTGACACTATAGAATA AACGTTGTGAGCGTCAAGCBcp-R GTACGACTCACTATAGGGA GGCAACACCGTCACACTACA为毒力基因dnaj (GenBank:AB263067. I)设计的引物，扩增的片段大小约为145bp dnaJ-F AGGTGACACTATAGAATA ATTCGGTGATATCTTTGGCGdnaJ-R GTACGACTCACTATAGGGA CTCAACGAGCGTTGGAACTT为毒力基因mshA (GenBank:NZ_ABCH01000011. I)设计的引物，扩增片段大小约为152bp mshA-F AGGTGACACTATAGAATA CTGAGCGACGGTTATCAACAmshA-R GTACGACTCACTATAGGGA ATGGTCACGTTAGTTTGCCC为毒力基因z2z3 (GenBank:AF009900. I)设计的引物，扩增片段大小约为159bp z2z3-F AGGTGACACTATAGAATA CTCTCATTGGTTAGCCCTCGz2z3-R GTACGACTCACTATAGGGA ATCATCGGAAGATCAGCGTC为毒力基因fimA(NCBI Reference Sequence:NZ_ABCH01000010. I)设计的引物，扩增片段大小约为166bp fimA-F AGGTGACACTATAGAATA AGCTGTGGTTGATTGGCTCTfimA-R GTACGACTCACTATAGGGA TACCGTTACTGGTGGTGCAA为毒力基因pyrH(GenBank:JN039147. I)设计的引物，扩增片段大小约为173bp pyrH-F AGGTGACACTATAGAATA GACCGTATGGCACAAGAGGTpyrH-R GTACGACTCACTATAGGGA CGCATAGCTAGGCCATTCAT为毒力基因toxRL(GenBank:EU727208. I)设计的引物，扩增片段大小约为180bp toxRL-F AGGTGACACTATAGAATA ACTACGACCATTGCCCAAACtoxRL-R GTACGACTCACTATAGGGA TAGTGTTGAGCGCTCTGTGC为毒力基因rpoA(GenBank:AJ842695. I)设计的引物，扩增片段大小约为187bp rpoA-F AGGTGACACTATAGAATA ACGTGTTGAGCAGCGTACTG
rpoA-R GTACGACTCACTATAGGGA AATAGGATCGAACTCCGGCT为毒力基因recA(GenBank:AJ580887. I)设计的引物，扩增片段大小约为195bp recA-F AGGTGACACTATAGAATA ACCATGGACGTTGAAACCATrecA-R GTACGACTCACTATAGGGA GGCATGTTCTGCATCGATAA带有CY5荧光标记的通用引物序列，可按常规技术将CY5荧光标记加到通用引物序列上TY-F: 5，-AGGTGACACTATAGAATA-3，TY-B: 5，-GTACGACTCACTATAGGGA-3，
·
(3)多重 PCR 扩增(XP-PCR)以施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)的基因组DNA作为多重PCR反应的模板，用上述13对多基因PCR引物等比例混合，每个引物终浓度为O. 2 μ M，再加入通用引物对，终浓度为I μ Μ，混合均匀为引物预混液，配制25μ L的PCR反应体系，包括10 X PCR Buffer
2.5μ L, IOmM dNTP 2 μ L，5M/μ L 的 TaqE O. 25 μ L，引物预混液 O. 25 μ L，模板 DNAl μ L，ddH2019y L。将反应物混匀后，放置在PCR仪中，按如下反应循环进行扩增
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I’安装毛细管和凝胶。2’将毛细管温度调整至50° C。3’按照O. 4ml凝胶，重复3次模式执行初级管路冲洗。4’执行毛细管充胶，重复3次。5’执行光路聚焦。6 ’监控仪器基线，低于4000RF M。b.输入样本信息 I’输入样本名。2’对每个样本指定Freg-3分离方法,指定默认的GeXP分析方法。3’保存样本信息。c. GeXP 样本分析I’使用蒸馏水清洗水槽。2’放入样本板和缓冲液板。3’开始运行样本。d.查看片段分析结果I’打开片段分析模块；2’使用分析后结果(Analyzed Data)建立一个新的分析(Study)。3’在片段列表(Fragments)窗口中设定过滤参数，过滤非D4染料峰及其他非产物峰。4’确认现有分析结果正确。5’查看片段分析结果。6’对照标准图谱可以判读结果，每个峰代表一个基因，结果如图I所示，图I中具有13个峰，根据横坐标size nt数值大小判断基因，从左到右分别为sod IlObp, fldA117bp, ompUL 124bp, toxS 131bp,bcp 138bp, dnaj 145bp, mshA 152bp,z2z3 159bp, fimA166bp, pyrH 173bp, toxRL 180bp, rpoA 187bp, recA 195bp,由此表明样品施罗氏弧菌含有这13个毒性因子，这个结果与本实施例的样品施罗氏弧菌按照常规方法检查出来的毒性因子相同。可见本发明所提供的方法能快速准确地检测施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)的13种毒性因子，从而能快速准确的评价施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)致病性。实施例2 (I)提取施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)的基因组DNA首先对珊瑚样品中的施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)进行平板的纯化分离，再培养施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)。①在离心管中加入50 μ L 10%(w/v)无菌Chelex-100溶液；②从施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)培养平板上,挑取单菌落至上述Chelex-100溶液中；③将离心管放置在涡旋混合器上充分震荡10s，沸水浴lOmin，冷却至室温，再充分震荡IOs ；④12000r/min离心2min,上清液即为施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)基因组DNA,置于-20°C冰箱备用。
(2)多基因PCR引物的设计与合成为毒力基因sod(NCBI Reference Sequence:NZ_ABCH01000140. I)设计的引物，扩增片段大小约为IlObp sod-F AGGTGACACTATAGAATA CCGTTCATGTAGTCTGGACGsod-R GTACGACTCACTATAGGGA GCAGCGACTCCACTAACAGA为毒力基因fldA(NCBI Reference Sequence:NZ_ABCH01000151. I)设计的引物，扩增片段大小约为117bp fIdA-F AGGTGACACTATAGAATA ACGTGACATCGTTGAAGCAAfldA-R GTACGACTCACTATAGGGA AGGCCAACGAATTGTGACTC 为毒力基因ompUL(GenBank:EU727214. I)设计的引物，扩增片段大小约为124bp ompUL-F AGGTGACACTATAGAATA TTGGTGCGGGTTATCAGCTAompUL-R GTACGACTCACTATAGGGA CGAATACGGTCTGTTAGGTCG为毒力基因toxS(GenBank:EU727211. I)设计的引物，扩增片段大小约为131bp toxS-F AGGTGACACTATAGAATA CGCGGATATATTCACCACCTtoxS-R GTACGACTCACTATAGGGA CAATGAATGGCAATCCAACA为毒力基因Bcp(NCBI Reference Sequenc e:NZ_ABCH01000011. I)设计的引物，扩增片段大小约为138bp Bcp-F AGGTGACACTATAGAATA AACGTTGTGAGCGTCAAGCBcp-R GTACGACTCACTATAGGGA GGCAACACCGTCACACTACA为毒力基因dnaj (GenBank:AB263067. I)设计的引物，扩增的片段大小约为145bp dnaJ-F AGGTGACACTATAGAATA ATTCGGTGATATCTTTGGCGdnaJ-R GTACGACTCACTATAGGGA CTCAACGAGCGTTGGAACTT为毒力基因mshA (GenBank:NZ_ABCH01000011. I)设计的引物，扩增片段大小约为152bp mshA-F AGGTGACACTATAGAATA CTGAGCGACGGTTATCAACAmshA-R GTACGACTCACTATAGGGA ATGGTCACGTTAGTTTGCCC为毒力基因z2z3 (GenBank:AF009900. I)设计的引物，扩增片段大小约为159bp z2z3-F AGGTGACACTATAGAATA CTCTCATTGGTTAGCCCTCGz2z3-R GTACGACTCACTATAGGGA ATCATCGGAAGATCAGCGTC为毒力基因fimA(NCBI Reference Sequence:NZ_ABCH01000010. I)设计的引物，扩增片段大小约为166bp fimA-F AGGTGACACTATAGAATA AGCTGTGGTTGATTGGCTCTfimA-R GTACGACTCACTATAGGGA TACCGTTACTGGTGGTGCAA为毒力基因pyrH(GenBank:JN039147. I)设计的引物，扩增片段大小约为173bp pyrH-F AGGTGACACTATAGAATA GACCGTATGGCACAAGAGGTpyrH-R GTACGACTCACTATAGGGA CGCATAGCTAGGCCATTCAT为毒力基因toxRL(GenBank:EU727208. I)设计的引物，扩增片段大小约为180bp toxRL-F AGGTGACACTATAGAATA ACTACGACCATTGCCCAAAC
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权利要求
1. 一种施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒，包括PCR反应试剂，多基因PCR引物和GeXP多重扩增反应试剂，其特征在于，所述的多基因PCR引物包括13对多基因PCR引物和一对通用引物，具体为 为毒力基因sod设计的引物sod-F AGGTGACACTATAGAATA CCGTTCATGTAGTCTGGACGsod-R GTACGACTCACTATAGGGA GCAGCGAC TCCACTAACAGA为毒力基因fldA设计的引物fIdA-F AGGTGACACTATAGAATA ACGTGACATCGTTGAAGCAAfIdA-R GTACGACTCACTATAGGGA AGGCCAACGAATTGTGACTC为毒力基因ompUL设计的引物ompUL-F AGGTGACACTATAGAATA TTGGTGCGGGTTATCAGCTAompUL-R GTACGACTCACTATAGGGA CGAATACGGTCTGTTAGGTCG为毒力基因toxS设计的引物toxS-F AGGTGACACTATAGAATA CGCGGATATATTCACCACCTtoxS-R GTACGACTCACTATAGGGA CAATGAATGGCAATCCAACA为毒力基因Bcp设计的引物Bcp-F AGGTGACACTATAGAATA AACGTTGTGAGCGTCAAGCBcp-R GTACGACTCACTATAGGGA GGCAACACCGTCACACTACA为毒力基因dnaj设计的引物dnaJ-F AGGTGACACTATAGAATA ATTCGGTGATATCTTTGGCGdnaJ-R GTACGACTCACTATAGGGA CTCAACGAGCGTTGGAACTT为毒力基因mshA设计的引物mshA-F AGGTGACACTATAGAATA CTGAGCGACGGTTATCAACAmshA-R GTACGACTCACTATAGGGA ATGGTCACGTTAGTTTGCCC为毒力基因z2z3设计的引物z2z3-F AGGTGACACTATAGAATA CTCTCATTGGTTAGCCCTCGz2z3-R GTACGACTCACTATAGGGA ATCATCGGAAGATCAGCGTC为毒力基因fimA设计的引物fimA-F AGGTGACACTATAGAATA AGCTGTGGTTGATTGGCTCTfimA-R GTACGACTCACTATAGGGA TACCGTTACTGGTGGTGCAA为毒力基因pyrH设计的引物pyrH-F AGGTGACACTATAGAATA GACCGTATGGCACAAGAGGTpyrH-R GTACGACTCACTATAGGGA CGCATAGCTAGGCCATTCAT为毒力基因toxRL设计的引物toxRL-F AGGTGACACTATAGAATA ACTACGACCATTGCCCAAACtoxRL-R GTACGACTCACTATAGGGA TAGTGTTGAGCGCTCTGTGC为毒力基因rpoA设计的引物rpoA-F AGGTGACACTATAGAATA ACGTGTTGAGCAGCGTACTGrpoA-R GTACGACTCACTATAGGGA AATAGGATCGAACTCCGGCT为毒力基因recA设计的引物recA-F AGGTGACACTATAGAATA ACCATGGACGTTGAAACCATrecA-R GTACGACTCACTATAGGGA GGCATGTTCTGCATCGATAA 含有荧光标记的通用引物对序列，可按常规技术将荧光标记加到通用引物序列上TY-F:5， -AGGTGACACTATAGAATA-3，TY-B:5， -GTACGACTCACTATAGGGA-3，。
2.根据权利要求I所述的施罗氏弧菌(Vibrioshilonii)多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒，其特在在于，所述的荧光标记为CY5荧光标记。
3.一种施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)多重毒力因子GeXP快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤提取施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)的基因组DNA，以其作为模板，用权利要求I所述的13对多基因PCR引物和一对通用引物进行多重PCR扩增得到多重PCR反应产物，利用GenomeLab GeXP遗传分析系统对多重PCR反应产物进行检测分析。
4.如权利要求3所述的施罗氏弧菌(Vibrioshilonii)多重毒力因子GeXP快速检测方法，其特征在于，所述的以施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)的基因组DNA作为模板，用权利要求I所述的13对多基因PCR引物和一对通用引物进行多重PCR扩增得到多重PCR反应产物是以施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)的基因组DNA作为模板，用权利要求I所述的13对多基因PCR引物等比例混合，每个引物终浓度为O. 2 2 μ Μ，再加入通用引物对，终浓 度为1-20 μ Μ，混合均匀为引物预混液，多重PCR反应体系和程序为2(Γ50 μ L的PCR反应体系，包括10XPCR Buffer 2 5 μ L，IOmM dNTP I. 6 4 μ L，5M/μ L 的 TaqE O. 2 O. 5 μ L，引物预混液O. 2 O. 5 μ L，模板DNA O. 8 2 μ L，ddH20 15 37. 5 μ L ;反应程序为-MV 3min ；94°C 30s、59 62°C 50 60s、72。。100s，25 35 个循环；72°C 7min。
全文摘要
本发明公开了一种施罗氏弧菌多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒和检测方法。它是先提取施罗氏弧菌的基因组DNA，以其作为模板，用13对多基因PCR引物和一对通用引物进行多重PCR扩增得到多重PCR反应产物，利用GenomeLab GeXP遗传分析系统对其进行检测分析。本发明针对已知13个施罗氏弧菌毒力基因设计特异性引物，通过单管反应，一次性快速高效的检测13种基因而得知检测出样品中是否含有携带毒力基因、具有潜在致病能力的施罗氏弧菌，其检测覆盖面广，可大大提高施罗氏弧菌检测的准确性。对珊瑚白化现象的防治提供一定的理论基础，对进一步保护我国珊瑚岛屿，防止其进一步退化具有重要的现实意义。
文档编号C12Q1/04GK102899402SQ20121032855
公开日2013年1月30日 申请日期2012年9月6日 优先权日2012年9月6日
发明者陈偿, 高磊, 任春华, 胡超群 申请人:中国科学院南海海洋研究所