酸酶是指全能核 酸酶* (Benzonase,核酸酶（默克公司（MerckKGaA)，英国），一种来自粘质沙雷菌的 基因工程化的2亚基（各自30kDa)核酸内切酶，它降解所有形式的DNA和RNA(单链、双链、 线性和环状的）。参见，例如，全能核酸酶产品表和美国专利号5, 173, 418,将两者以其全文 特此结合。
[0024] 在一些实施例中，本发明的方法不包括在分离过程中将一种外源核酸酶添加到该 组合物中。外源核酸酶是指衍生自或从外部源自包含被分离抗体的组合物的任何核酸酶的 添加。由此，术语外源核酸酶包括以蛋白质形式添加至包含该抗体的组合物中的任何核酸 酶。外源核酸酶还包括从衍生自或外部源自该组合物（例如基因修饰有机体）的遗传物质 表达的任何核酸酶，其中该基因修饰包括编码并能够表达核酸酶的遗传物质的插入。在一 些实施例中，在此描述的方法不包括添加一种核酸内切酶。在一些实施例中，在此描述的方 法不包括添加一种核酸外切酶。
[0025] 在此描述的方法提供了用于从一种组合物分离一种抗体例如Synagis?的方 法，其中该组合物包括该抗体以及一种或多种杂质。术语"分离（isolate,isolating和isolation) "是指将该抗体与组合物中的杂质或其他污染物分开。在一些实施例中，将至 少50%、70%、80%、90%、95%、98%、99%、99.5%、或99.9%^/^)的杂质纯化离开抗体。 例如，在一些实施例中，一种抗体例如Synagis%的纯化包括将该抗体与最初存在于该组 合物中的99% (w/w)的宿主细胞蛋白分开。
[0026] 在一些实施例中，术语"分离（isolate,isolating和isolation) "指的是将一种 抗体（例如Synagis# )与组合物中的杂质或其他污染物在一定程度上分开以与政府组织 (例如世界卫生组织或美国食品与药物管理局）的准则一致。例如，"分离（isolating)"可 以指代DNA从该组合物的一定程度的去除，其中终产物包括彡0. 5pgDNA/mg蛋白质。
[0027] 如在此使用的术语"组合物"是指一种抗体例如Synagi与一种或多种化合物、 生物材料、和或任何其他不同于该感兴趣抗体的分子的混合物。出于便利目的，该组合物的 除该感兴趣抗体之外的所有元素（例如，化合物、生物材料、和或任何其他不同于该感兴趣 抗体的分子）将称为"杂质"。在一些实施例中，该组合物包括生物物质、细胞宿主有机体 (例如，哺乳动物细胞）、以及足以使宿主有机体繁殖并允许该抗体的表达或生产的生长培 养基。在一些实施例中，该杂质可以包括感兴趣抗体的多聚体（例如，二聚体、三聚体，等）。 在一些实施例中，该杂质可以包括不希望的截短形式的抗体，或凝聚形式（例如，错误折叠 或变性形式）的抗体。
[0028] 如在此使用的术语"组合物"可以在本发明的方法中经历不同的转化。例如，在该 方法开始时，该组合物可以包括相对低浓度的抗体和高浓度的杂质。随着该方法的进展，在 该组合物中一种或多种杂质的浓度可以降低和/或该抗体的浓度可以升高。
[0029] 在一些实施例中，该杂质可以包括完整的哺乳动物细胞（例如，中国仓鼠卵巢细 胞（CH0细胞）或鼠类骨髓瘤细胞（NS0细胞））、或部分细胞（例如细胞碎片）。在一些实 施例中，该杂质包括蛋白质（例如，可溶或不溶性蛋白质、或蛋白质片段，如来自宿主细胞 蛋白）、脂类（例如，细胞壁材料）、核酸（例如染色体或染色体外的DNA)、核糖核酸（t-RNA 或mRNA)、或其组合，或不同于感兴趣抗体的任何其他细胞碎片。在一些实施例中，该杂质可 以源自产生或包含感兴趣抗体例如Synagis14的宿主有机体。例如，杂质可以是表达感兴 趣蛋白质的原核或真核细胞的细胞组分（例如，细胞壁、细胞蛋白、DNA或RNA等）。在一些 实施例中，该杂质不是来自宿主有机体，例如杂质可以来自细胞培养基或生长培养基、缓冲 液、或培养基添加剂。如在此使用的杂质可以包括单一不希望的组分、或一些不希望的组分 的组合。
[0030] 在一些实施例中，该组合物选自下组，该组由以下各项组成：免疫动物血清、腹水 液、杂交瘤或骨髓瘤上清液、衍生自重组细胞系培养的条件培养基、以及产免疫球蛋白细胞 的细胞提取物。本发明的抗体可以分离自包含生长培养基和各种真核细胞如哺乳动物细胞 的组合物。本领域技术人员可以依据感兴趣抗体的详情选择一种适当的细胞系。本发明的 哺乳动物细胞，包括用于本发明的方法中的哺乳动物细胞的，是能够在培养中生长的任何 哺乳动物细胞。示例性哺乳动物细胞包括例如〇10、￥￡1?0、8册、海拉〇161^)、(^1、]\?0(、293、 3丁3、(：127、？(：12、冊1(-293、？￡1?06、5口2/0、呢0、1138细胞以及骨髓瘤细胞系（尤其是鼠类 的）。还可以使用衍生自前述细胞的任一种的哺乳动物细胞。
[0031] 在一些实施例中，该组合物包括培养基、或源自培养基的浓缩的细胞。培养基的选 择与使用对于本领域技术人员而言是已知的。在一些实施例中，该培养基是一种细胞培养 基。根据被繁殖的细胞培养物的类型，细胞培养基可变化。在一些实施例中，该细胞培养 基是可商购的培养基。在一些实施例中，该组合物包括这样的培养基，该培养基包括例如， 无机盐、碳水化合物（例如，糖类，如葡萄糖、半乳糖、麦芽糖或果糖）、氨基酸、维生素（例 如，B族维生素（例如，B12)、维生素A、维生素E、核黄素、硫胺素和生物素）、脂肪酸和脂类 (例如，胆固醇和类固醇）、蛋白质和肽（例如，白蛋白、转铁蛋白、纤连蛋白和胎球蛋白）、血 清（例如，包含白蛋白、生长因子和生长抑制剂的组合物，如胎牛血清、新生小牛血清以及 马血清）、痕量元素（例如，锌、铜、硒以及三羧酸中间体）及其组合。生长培养基的实例包 括但不限于基础培养基（例如MEM、DMEM、GMEM)、复合培养基（RPMI1640、IscovesDMHM、 LeibovitzL-15、LeibovitzL-15、TC100)、无血清培养基（例如CHO、HamF10 和衍生物、 HamF12、DMEM/F12)。在培养基中发现的一般缓冲液包括PBS、汉克斯（Hanks)BSS、厄尔斯 (Earles)盐、DPBS、HBSS、和EBSS。用于培养哺乳动物细胞的培养基在本领域中是熟知的， 并且可获得自例如西格玛-奥德里奇公司（Sigma-AldrichCorporation)(圣路易斯，密苏 里州）、HyClone(洛根，犹他州）、英杰公司（InvitrogenCorporation)(卡尔斯巴德，加利 福尼亚州）、Cambrex公司（E.拉塞福（Rutherford)，新泽西州）、JRH生物科学公司（莱内 克萨，堪萨斯州）、欧文科学公司（IrvineScientific)(圣安娜，加利福尼亚州）等。在培 养基中发现的其他组分可以包括抗坏血酸盐、柠檬酸盐、半胱氨酸/胱氨酸、谷氨酰胺、叶 酸、谷胱甘肽、亚油酸、亚麻酸、硫辛酸、油酸、棕榈酸、吡哆醛/吡哆醇、核黄素、硒、硫胺素、 转铁蛋白。本领域的技术人员将会认识到有对培养基的多种修改，这些修改落入本发明的 范围内。在一些实施例中，该培养基可以包括牛的产物，例如血清白蛋白、转铁蛋白、脂蛋白 部分、或其组合。在一些实施例中，通过从被美国农业部和欧洲共同体认为是无BSE的来源 获得牛的产物降低了传播牛海绵状脑病（BSE)的风险。
[0032] 术语抗体是指多克隆、单克隆、多特异性、人类、人源化或嵌合抗体、单链抗体、Fab 片段、F(ab'）2片段、通过Fab表达文库产生的片段、抗独特型（抗-Id)抗体、以及上述任 一个的表位结合片段。在一些实施例中，术语"抗体"是指单克隆抗体。术语"抗体"还指 代免疫球蛋白分子以及免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即包含免疫特异性地结合抗原的 抗原结合位点的分子。可以通过本发明的方法纯化的免疫球蛋白分子可以是免疫球蛋白分 子的任何类型（例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA以及IgY)、类别（例如IgGl、IgG2、IgG3、#& IgG4)或子类。在一个优选实施例中，该抗体是IgG或IgA，最优选是IgG。
[0033] 在一些实施例中，该有待分离的抗体是Synagis8、Synagis% (Synagis，医学免 疫公司（Medlmmune))是一种重组人源化（嵌合鼠类-人类）IgGlK单克隆抗体糖蛋白， 具有针对呼吸道合胞体病毒（RSV)的F(融合）蛋白的A抗原性位点中的表位的特异性。 帕利珠单抗可以从稳定的鼠类（小鼠）骨髓瘤细胞系（NS0)表达。在一些商业实施例中， Synagis?是由两个重链（各50. 6kDa)和两个轻链（各27. 6kDa)组成，包含按重量计 1%