抗体和一种或多种杂质的组合物可以基于 电荷差采用阳离子交换基质来分离的任何方法。阳离子交换基质大体上包括共价结合的负 电荷基团。可以使用弱的或强的阳离子交换树脂。通常，强阳离子交换树脂包括含有磺酸 或磺酸酯基团（取决于pH)的被负载的有机基团。弱阳离子交换树脂通常包括含有羧酸或 羧酸酯基团（取决于pH)的被负载的有机基团。在某些实施例中，可以使用多峰阳离子交 换树脂，其结合了另外的结合机制以及离子相互作用，例如氢键相互作用和疏水相互作用 中的一者或多者。适合的阳离子交换树脂的实例是本领域中熟知的，并且可以包括但不限 于Fractogel、羧甲基（CM)、磺乙基（SE)、磺丙基（SP)、磷酸盐（P)以及磺酸盐（S)、PROPAC WCX-10?(戴安公司（Dionex)、卡普托S、S_ 交联琼脂糖FF、FractogelEMDS03M、Toyopearl MegacapIISP550C、波罗斯50HS、以及SP-交联琼脂糖基质。在优选实施例中，该阳离子树 脂选自卡普托S、S_交联琼脂糖FF、FractogelEMDS03M、ToyopearlMegacapIISP550C、 波罗斯50HS，最优选波罗斯50HS。在一些实施例中，可以对该组合物使用多于一个阳离子 交换色谱过程。在一些实施例中，该阳离子交换色谱过程是以相对于抗体的结合模式来使 用，即，使用所述过程而使得该感兴趣抗体被吸附到阳离子交换基质上，同时一种或多种杂 质不被吸附，由此将抗体从杂质分离。在一些实施例中，将该阳离子交换基质用缓冲液洗涤 一次或多次，以去除额外的杂质，之后将吸附的抗体从阳离子交换基质去除。在已经使用阳 离子交换色谱以结合模式将一种或多种杂质从一种组合物去除之后，可以将吸附的抗体从 阳离子交换基质洗脱。从阳离子交换洗脱抗体的方法取决于基质，并且对于本领域技术人 员来说是已知的。
[0043] 可替代地，在一些实施例中，该阳离子交换过程可以按照流经模式（flow-thru mode)来使用，S卩，使用所述过程而使得该感兴趣抗体不被吸附到阳离子交换基质上，同时 一种或多种杂质被吸附到基质上，由此将抗体从杂质分离。在流经模式中，一种或多种杂质 被吸附到（或被阻止到）阳离子交换基质上，并且抗体穿过基质进入流经溶液中。
[0044] 在一些实施例中，该阳离子交换色谱过程的产物，例如从波罗斯50HS色谱基质的 洗脱物，可以产生具有表1中的特征的产物。 表1.阳离子交换色谱过程产生的产物的特征
【主权项】
1. 一种从包含SynagiS?的组合物分离Synagi的方法,该方法包括：
1. 对该组合物进行一个离子交换色谱过程； ii. 对该组合物进行一个亲和纯化过程；并且 iii. 对该组合物进行一个过滤过程； 其中一种终产物包括获得自（i)、（ii)、和（iii)的Synagis?，其中该终产物适合于向 人类给予并且具有< 0. 5pg/mg的DNA浓度，并且其中该方法不包括向该组合物中添加全能 核酸酶。
2. -种从包含Synagis?的组合物分离Synagi的方法,该方法包括： i. 对该组合物进行一个阳离子交换色谱过程以形成一种包含Synagis?的第一产物； ii. 添加一种缓冲液到该第一产物中以形成一种缓冲产物； iii. 对该缓冲产物进行一个亲和纯化过程以形成一种包含Synagis?的第二产物； iv. 对该第二产物进行一个过滤过程以形成一种包含Synagis@的第三产物； V.对该第三产物进行一个病毒灭活过程；并且 vi.配制该第三产物以形成一种终产物，该终产物包含Synagis?，其中该终产物适合 于向人类给予并且具有彡0. 5pg/mg的DNA浓度； 其中该方法不包括向该组合物中添加全能核酸酶。
3. -种从包含Synagis4的组合物分离Synagis1^的方法，该方法包括（i)-(v)中的 至少三个： i. 对该组合物进行一个阳离子交换色谱过程； ii. 对该组合物进行一个亲和纯化过程； iii. 对该组合物进行一个超滤过程； iv. 对该组合物进行一个病毒灭活过程；并且 V.对该组合物进行一个阴离子交换色谱过程； 其中获得自（i)-(v)中的至少三个的产物包含Synagis%并且适合于向人类给予并且 具有< 0. 5pg/mg的DNA浓度；并且其中该方法不包括向该组合物中添加全能核酸酶。
4. 如权利要求1所述的方法，其中该方法不包括添加一种外源核酸酶到该组合物中。
5. 如权利要求1所述的方法，进一步包括一个病毒灭活过程。
6. 如权利要求5所述的方法，其中该病毒灭活过程包括在pH小于4. 0下孵育该组合 物。
7. 如权利要求1所述的方法，其中该抗体是IgG。
8. 如权利要求1所述的方法，其中该亲和纯化过程包括一个蛋白A纯化过程。
9. 如权利要求1所述的方法，其中该离子交换色谱过程是一个阳离子交换色谱过程。
10. 如权利要求9所述的方法，其中该阳离子交换过程包括吸附该抗体到选自 下组的一种阳离子树脂上，该组由以下各项组成：卡普托S(Capt〇 S)、S-交联琼脂糖 FF(S-S印harose FF)、以及波罗斯 50HS(Poros 50HS)。
11. 如权利要求1所述的方法，进一步包括一种第二离子交换过程。
12. 如权利要求11所述的方法，其中该第二离子交换过程是一个阴离子交换色谱过 程。
13. 如权利要求12所述的方法，其中该阴离子交换过程包括使该抗体穿过选自下组的 一种阴离子膜，该组由以下各项组成：超级Q(Super Q)、那翠丝Q(Natrix Q)、科罗马索布 Q (Chromasorb Q)以及木斯塘 Q (Mustang Q)。
14. 如权利要求1所述的方法，其中该终产物具有>80% (mol/mol)的抗体得率和/或 其中该终产物的DNA浓度< 200ng/mg。
15. 如权利要求1所述的方法，其中该组合物选自下组，该组由以下各项组成：免疫动 物血清、腹水液、杂交瘤或骨髓瘤上清液、衍生自重组细胞系培养的条件培养基、产免疫球 蛋白细胞的细胞提取物、以及生物反应器制剂。
16. 如权利要求1所述的方法，其中该组合物具有大于100升的体积。
17. 如权利要求1所述的方法，其中该组合物具有大于1000升的体积。
18. 如权利要求1所述的方法，其中（ii)的过程发生在（i)的过程后。
19. 如权利要求1所述的方法，其中（iii)的过程发生在（ii)的过程后。
20. 如权利要求1所述的方法，其中Synagis<包括： 具有SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的重链以及具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链； SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO:2的重链可变区以及轻链SEQ ID NO:6的轻链可变区；或 具有氨基酸序列TSGMSVG(SEQ ID N0:3)的Hl互补决定区（⑶R)、具有氨基酸序列 DIffffDDKKDYNPSLKS (SEQ ID NO: 4)的 H2CDR、具有氨基酸序列 SMITNWYFDV(SEQ ID NO: 5)的 H3CDR;具有氨基酸序列KCQLSVGYMH(SEQ ID N0:7)的L1CDR、具有氨基酸序列DTSKLAS(SEQ ID N0:8)的 L2CDR、以及具有氨基酸序列 FQGSGYPFT(SEQ ID N0:9)的 L3CDR。
【专利摘要】本发明针对一种从组合物中分离抗体的方法。在一些实施例中，该方法包括从包含的组合物中分离该方法包括：(i)对该组合物进行一个离子交换色谱过程；(ii)对该组合物进行一个亲和纯化过程；以及(iii)对该组合物进行一个过滤过程，其中一种终产物包括获得自(i)、(ii)、和(iii)的其中该终产物适合于向人类给予并且具有≤0.5pg/mg的DNA浓度，并且其中该方法不包括向该组合物中添加全能核酸酶。
【IPC分类】C07K14-00, C07K16-00
【公开号】CN104854125
【申请号】CN201380057815
【发明人】M·万, C·福斯布林, R·莱普斯维奇, E·沙恩, C·奥利弗
【申请人】米迪缪尼有限公司
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2013年11月5日
【公告号】CA2890339A1, EP2914617A2, WO2014071344A2, WO2014071344A3, WO2014071344A8