较时，序列均与Genbank目的序列高度同源。将10倍稀释的阳性质粒模板DNA加 入前述反应体系，采用〇. 1%标准品对其进行灵敏性实验。结果能达到〇. 1%的检测阈值， 重复试验显示检测样品过程中具有很好重复性。稀释模板浓度对数值和Cp值之间也呈良 好的线性关系R 2多〇. 95。说明该方法具有较好的精确度和良好的稳定性。
[0043] 本发明与现有技术相比，具有以下优点：
[0044] 1)本发明试剂盒组分和配比合理，使用方便，检测快捷，准确，适用于荧光PCR检 测大豆Lectin基因和MON 87708基因；
[0045] 2)本发明检测方法简化了检测流程，大大缩短了检测周期，检测时间比传统培养 分析方法缩短两天左右；
[0046] 3)本发明检测方法整个过程，PCR产物无需再转入其它分析装置，实现闭管操作， 避免交叉污染，而且可同时完成定量分析。
[0047] 4)采用本发明检测方法在同一反应体系即可实现同时检测大豆Lectin基因和 MON 87708基因，操作简便、快速，成本低，检测结果准确。
【附图说明】
[0048] 图1为仅有大豆Lectin基因检出的扩增曲线图；
[0049] 图2为仅有大豆Lectin基因检出的HRM分析图；
[0050] 图3为仅有MON 87708检出的扩增曲线图；
[0051] 图4为仅有MON 87708检出的的HRM分析图；
[0052] 图5为大豆Lectin基因和MON 87708基因同时检出的扩增曲线图；
[0053] 图6为大豆Lectin基因和MON 87708基因同时检出的HRM分析图；
【具体实施方式】
[0054] 下面结合【具体实施方式】对本发明做进一步描述：
[0055] 实施例1
[0056] 本发明检测转基因大? M0N87708及内源基因 Lectin的引物，该引物的序列分别 为：
[0057] 上游引物 LectinF :TCTGTCGTTGTGGTGCTA
[0058] 下游引物 LectinR :CTGCGAGAITTGCTATGT
[0059] 上游引物 MON 87708F :GTCAAGGAGGACAAGGTCG
[0060] 下游引物 MON877O8R :CCAATGCCATAATACTCAAAC。
[0061] 实施例2
[0062] 本发明一种检测转基因大豆M0N87708及内源基因 Lectin的试剂盒，其中20 μ L 反应体系包括以下组分：
[0063] 终浓度I X的HRM反应预混液 IOuL 终浓度0.5 pmol/L的上游引物LectinF 0.5 U L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物LectinR 0.5 μ L 终浓度0.5 pmol/L的上游引物M0N87708F 0 5 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物M0N87708R 0.5 μ L DNA模版 I UL 水 补齐.申:20 μ L。
[0064] 其中引物序列如下：
[0065] 上游引物 LectinF :TCTGTCGTTGTGGTGCTA
[0066] 下游引物 LectinR :CTGCGAGATTTGCTATGT
[0067] 上游引物 MON 87708F :GTCAAGGAGGACAAGGTCG
[0068] 下游引物 MON877O8R :CCAATGCCATAATACTCAAAC。
[0069] 实施例3
[0070] 本发明用于检测转基因大豆M0N87708及内源基因 Lectin的试剂盒，其中20. 0 μ L 反应体系由以下组分组成：
[0071] 终浓度I X的HRM反应预混液 IOuL 终浓度0.5 pmol/L的上游引物LECTIN F 0.05 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物LECTIN R 0.05 μ L 终浓度0.5 pmol/L的上游引物ΜΟΝ87708 F 0.05 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物ΜΟΝ87708 R 0.05 μ L
[0072] DNA模版 IuL 水 补齐至20 μ L。
[0073] 其中：
[0074] 其中引物序列如下：
[0075] 上游引物 LectinF :TCTGTCGTTGTGGTGCTA
[0076] 下游引物 LectinR :CTGCGAGATTTGCTATGT
[0077] 上游引物 MON 87708F :GTCAAGGAGGACAAGGTCG
[0078] 下游引物 MON877O8R :CCAATGCCATAATACTCAAAC。
[0079] 实施例4
[0080] 本发明试剂盒中制备20 μ L反应体系由以下组分组成：
[0081] 终浓度I X的HRM反应预混液 IOuL 终浓度0.5 pmol/L的上游引物LECTIN F 0 8 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物LECTIN R 0.8 μ L 终浓度0.5 pmol/L的上游引物ΜΟΝ87708 F 0,9 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物ΜΟΝ87708 R 0.9 μ L DNA模版 IuL 水 补齐至20 PL。
[0082] 其中引物序列如下：
[0083] 上游引物 LectinF :TCTGTCGTTGTGGTGCTA
[0084] 下游引物 LectinR :CTGCGAGAITTGCTATGT
[0085] 上游引物 MON 87708F :GTCAAGGAGGACAAGGTCG
[0086] 下游引物 M0N87708R :CCAATGCCATAATACTCAAAC。
[0087] 实施例5
[0088] 本发明试剂盒中制备20 μ L反应体系由以下组分组成：
[0089] 终浓度I X的HRM反应预混液 IOuL 终浓度0.5 pmol/L的上游引物LECTIN F 0.05 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物LECTIN R 0.05 u L 终浓度0.5 pmol/L的上游引物MON87708 F 0.9 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物ΜΟΝ87708 R 0.9 μ L DNA模版 IpL 水 补齐至20 μ L 〇
[0090] 其中引物序列如下：
[0091] 上游引物 LectinF :TCTGTCGTTGTGGTGCTA
[0092] 下游引物 LectinR :CTGCGAGAITTGCTATGT
[0093] 上游引物 MON 87708F :GTCAAGGAGGACAAGGTCG
[0094] 下游引物 M0N87708R :CCAATGCCATAATACTCAAAC。
[0095] 实施例6
[0096] 本发明试剂盒中制备20 μ L反应体系由以下组分组成：
[0097] 终浓度I X的HRM反应预混液 IOuL 终浓度0.5 pmol/L的上游引物LECTINF 0.8 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物LECTIN R 0.8 U L 终浓度0.5 pmol/L的上游引物MON87708 F 0.05 μ L 终浓皮0.5 pmol/L的下游引物ΜΟΝ87708 R 0.05 μ L DNA模版 IPL
[0098] 水 补齐至20 μ L。
[0099] 其中引物序列如下：
[0100] 上游引物 LectinF :TCTGTCGTTGTGGTGCTA
[0101] 下游引物 LectinR :CTGCGAGATTTGCTATGT
[0102] 上游引物 MON 87708F :GTCAAGGAGGACAAGGTCG
[0103] 下游引物 M0N87708R :CCAATGCCATAATACTCAAAC。
[0104] 实施例7
[0105] 本发明试剂盒中制备20 μ L反应体系由以下组分组成：
[0106] 终浓度I X的HRM反应预混液 IOuL 终浓度0.5 pmol/L的上游引物LECTIN F 0 6 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物LECTIN R 0,6 U L 终浓度0.5 pmol/L的上游引物MON87708 F 0.7 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物ΜΟΝ87708 R 0.7 μ L DNA模版 IuL 水 补齐至20 μ L 。
[0107] 其中引物序列如下：
[0108] 上游引物 LectinF :TCTGTCGTTGTGGTGCTA
[0109] 下游引物 LectinR :CTGCGAGATTTGCTATGT
[0110] 上游引物 MON 87708F :GTCAAGGAGGACAAGGTCG
[0111] 下游引物 M0N87708R :CCAATGCCATAATACTCAAAC。
[0112] 实施例8
[0113] 本发明检测转基因大豆M0N87708及内源基因 Lectin的方法，包括以下步骤：
[0114] A、提取样品DNA ;
[0115] B、对步骤A中的样品DNA进行荧光PCR扩增，其中反应体系由以下组分组成：
[0116] 终浓度I X的HRM反应预混液 IOpL 终浓度0.5 pmol/L的上游引物LectinF 0.5 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物LectinR 0.5 μ L 终浓度0.5 pmol/L的上游引物MON87708F 0.5 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物MON87708R 0.5 μ L DNA模版 IuL 水 补齐至20 μ L 。
[0117] 其中引物序列如下：
[0118] 上游引物 LectinF :TCTGTCGTTGTGGTGCTA
[0119] 下游引物 LectinR :CTGCGAGATTTGCTATGT
[0120] 上游引物 MON 87708F :GTCAAGGAGGACAAGGTCG
[0121] 下游引物 M0N87708R :CCAATGCCATAATACTCAAAC。
[0122] 所述的荧光PCR扩增按以下步骤进行：
[0123] (1)92°C ~96°C预变性 30s ;
[0124] (2)92°C~96°C变性5s~10s，54°C~64°C退火20s~40s，共进行