五味子木脂素单一组分的制备
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种五味子木脂素单一组分的制备方法，属于医药技术领域，尤其是向亲油性五味子木脂素提取物中加入表面活性剂形成均一的水溶液，才可采用大孔吸附树脂进行初步纯化，然后采用ODS-A-HG或ODS-A的反相C18填料进行层析纯化，用乙醇水溶液进行梯度洗脱，得到纯度为98%以上的五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素单一组分。
【背景技术】
[0002]五味子(SbAisaflt/rachinensis (Turcz.) ifei77)，集酸、甜、苦、辣、咸五味于一身而得名。五味子的主要活性成分是木脂素，具有保肝、抗氧化、消炎、抗癌、抗艾滋病等功效。五味子木脂素成分不同，功效不同。在保肝抑制急性肝衰竭，增加肝糖原合成的五味子成分中，五味子醇乙效果明显，五味子乙素次之，其它成分作用不大；五味子醇甲对中枢神经有安定作用，可治疗失眠症；五味子酚、五味子乙素对抗脂质过氧化作用明显影响，五味子醇甲和五味子醇乙无明显影响；五味子甲素是一个与所有目前已知的多重耐药性逆转剂完全不同的天然成分，可以逆转肿瘤耐药，然而五味子醇甲、五味子丙素和五味子乙素、五味子醇乙、五味子酚等没有逆转肿瘤耐药的活性，或者活性很弱。目前国内生产的五味子木脂素主要为五味子总素和低含量的木脂素，价格低廉。用粗提物制备药物，不能充分发挥药物的功效，可能会出现药效拮抗或带来一些副作用。制备纯的木脂素可以用作药物，可以用于生物活性的实验研宄，可以作为分析检测的对照品，目前五味子对照品主要来源于国外进口，而且价格相当昂贵。
[0003]在五味子木脂素的分离纯化报道中，申请号为200910242188.X (发明名称:五味子单体成分的分离制备方法)和王磊等人(王磊，魏芸，袁其朋.高速逆流法分离纯化五味子中的五味子酚.北京化工大学学报:自然科学版，2009，2: 77-80.)采用高速逆流层析法分离木脂素，但要求提取物先经过硅胶柱层析纯化后，再采用高速逆流层析操作，此法处理量少而且成本高。申请号为200910010631.0 (发明名称:一种制备五味子醇甲和五味子醇乙的新工艺)采用硅胶柱层析法，硅胶柱一次上柱纯化效果差，需要反复多次层析操作，多种有机溶剂梯度洗脱的方法，效率低、成本高。申请号为200710150140.7 (发明名称:一种五味子的有效组分及其制备方法与用途)采用乙酸乙酯和乙醇的混合溶剂进行提取，将得到的浸膏乙醇溶解后直接过0DS-C18柱，95%的乙醇洗脱得到的混合物再上ZorbaxSB-C18制备色谱，水和乙腈混合液梯度洗脱，两次的C18柱层析法，处理量少，试剂乙腈成本尚。
[0004]大孔树脂吸附法从天然植物中分离提取活性成分，具有低的操作成本，低的溶剂消耗和容易再生的优点，已在环保、食品、医药等领域得到了广泛的应用。树脂吸附的物质都是水溶性或一定溶解度的有机物，五味子木脂素是亲油性有机物，不能溶解和均匀地分散到水溶液中，容易导致树脂床层的堵塞，不能有效地采用树脂吸附的方法进行分离纯化，如申请号200910216886.2 (发明名称:一种富集纯化五味子中五味子醇甲的方法)，及尹滟等人的报道(尹滟，刘严生，于叶玲，唐星.用大孔树脂提取和纯化五味子总木脂素.沈阳药科大学学报，2007，24 (2):113-118.)。Ma 等人(Chun-hui Ma, Ting-ting Liu, LeiYang, Yuan-gang Zu, Feng-jian Yang, Chun-jian Zhao, Lin Zhang, Zhong-hua Zhang.Preparat1n of high purity biphenyl cyclooctene lignans from Schisandra extractby 1n exchange resin catalytic transformat1n combined with macroporous resinseparat1n.Journal of Chromatography B, 2011, 879(30): 3444-3451)和Caichompoo等人(Wanida Caichompoo, Qiao-yan Zhang, Ting-ting Hou, Hua-juan Gao, Lu-pingQin， Xiu-jia Zhou.0ptimizat1n of extract1n and purificat1n of activefract1ns from Schisandra chinensis (Turcz.) and its osteoblastic proliferat1nstimulating activity.Phytotherapy Research, 2009, 23(2): 289-292.)米用加入乙醇到水溶液中以增加亲油性物质在水溶液中的溶解度，然后采用树脂吸附初步纯化的方法。为增加亲油性物质在水相中的溶解度和分散度，需要增加乙醇的浓度，乙醇是常用的解吸剂，乙醇的存在使吸附量降低，如果降低乙醇的浓度，将增加亲油性物质与溶液中杂质的聚集和沉淀。
[0005]考虑到木脂素不溶于水，乙醇不利于树脂吸附的两个特性，为了更好地提高木脂素的纯度和利用效果，本发明采用加入表面活性剂的方法，将木脂素类亲油性生物活性成分均匀分散于不含乙醇的水溶液中，得到均一稳定的溶液，然后进行大孔树脂初步分离及纯化五味子总木脂素，减轻后续层析纯化操作的负荷，最后采用C18反相层析介质ODS-A-HG或ODS-A进一步纯化木脂素，乙醇水溶液梯度洗脱获得高纯度的五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素单品。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是采用廉价而应用广泛的大孔吸附树脂法进行初步纯化，采用加入表面活性剂的方法使亲油性木脂素提取物均匀分散在水溶液中，以利于树脂的吸附操作；然后米用反相C18填料的ODS-A-HG或ODS-A层析介质对木脂素进行层析，乙醇水溶液梯度洗脱的方法得到五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素单品。
[0007]本发明技术方案所采用的生产工艺过程为:五味子果实一一烘干一一粉碎一一乙醇回流提取一一浓缩一一乙酸乙酯萃取一一浓缩一一吐温40和水混合分散成均一水溶液一一大孔吸附树脂初步纯化一一ODS-A-HG或ODS-A层析一一梯度洗脱一一浓缩干燥木脂素单品。
[0008]具体路线是:取适量五味子果实，经干燥后，再用粉碎机粉碎成粉末，加入60%?100%乙醇水溶液回流提取2次，每次I?2