降甲基齐墩果烷型三萜皂苷及其活性组合物的制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，涉及两个新的降甲基齐墩果烷型三萜皂苷类化合物黄 錯果阜苷，艮P :3-〇- a -L-arabinopyranosyl- (1 一 3) - a -L-arabinopyranosyl- (1 一 3) - α -L-Ara binopyranosyl_[β -D-xylopyranosyl-(1 一 2)]3〇-norolean-12-en-28_oic aci d a -L-rhamnopyranosyl- (I 一 4) - β -D-glucopyranosyl- (I 一 6) - β -D-glucopyra nosyl ester 和 3 β，20 α，24-trihydroxy-29-norolean-12-en-28-〇ic 8(^(124-0-6' -〇-acetyl-β -D-glucopyranoside，以及包含这两个新化合物的活性组合物及其分离、制备和在抗炎、 镇痛、保肝、利尿药物、保健品和功能食品中的开发与应用。
【背景技术】
[0002] 黄腊果（Stauntonia brachyanthera Hand-Mazz)为木通科野木瓜属植物，广泛分 布在我国南方地区。因其果实形态与猪腰子相似，因此在当地俗称"猪腰子"。黄腊果整株 植物都具有较大的药用价值，广泛应用于炎症、疼痛等疾病的治疗，其藤茎具有清热利尿、 通经活络、镇痛排脓、通乳等功效；果皮民间用于结石病的治疗；叶子用于治疗外感风寒， 头痛胸闷，吐泻腹胀等症。尽管黄腊果具有极大的药用价值，但时至今日国内外仍无任何有 关其化学成分及药用机理的相关报道，极大的限制了其应用。我们前期研究中发现，这一植 物提取物具有较好的抗炎、镇痛、保肝和利尿的生物活性。以活性指导分离制备得到了 2个 新的降甲基齐墩果烷型三萜皂苷类化合物黄蜡果皂苷，即：
[0003] Comp. I :3-〇-a-L-arabinopyranosyl-(1 一 3) - a-L-arabinopyranosyl-(1 一 3) -a -L-Arabinopyranosyl-[ β -D-xylopyranosyl- (1 一 2) ] 3〇-norolean-12-en-28_oic ac id a -L-rhamnopyranosyl- (1 一 4) - β -D-glucopyranosyl- (1 一 6) - β -D-glucopyranosyl ester
[0004] Comp. 2 ：3β,20 a ,24-trihydroxy-29-norolean-12-en-28-〇ic acid24-〇-6/ -〇 -acetyl-β -D-glucopyranoside 及他们的活性组合物。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供两个新的降甲基齐墩果烷型三萜皂苷类化合物。
[0006] Comp. I :3-〇-a-L-arabinopyranosyl-(1 一 3) - a-L-arabinopyranosyl-(1 一 3) -a -L-Arabinopyranosyl-[ β -D-xylopyranosyl- (1 一 2) ] 3〇-norolean-12-en-28_oic ac id a -L-rhamnopyranosyl- (1 一 4) - β -D-glucopyranosyl- (1 一 6) - β -D-glucopyranosyl ester
[0007] Comp. 2 :3 β，20 a，24-trihydroxy-29-norolean-12-en-28-〇ic acid 24-0-6'-O-acetyl-β -D-glucopyranoside〇
[0008] 本发明还包括两个化合物的制备方法和在抗炎、镇痛、保肝、利尿药物、保健品和 功能食品中的开发与应用。
[0009] 本发明的另一个目的是提供包含两个新的降甲基齐墩果烷型三萜皂苷类化合物 Comp. 1、Comp. 2的活性组合物及其制备方法，和在抗炎、镇痛、保肝、利尿药物、保健品和功 能食品中的开发与应用。
[0010] 本发明所述的两个降甲基齐墩果烷型三萜具有如下结构：
[0011]
[0012] 本发明提供的两个新的降甲基齐墩果烷型三萜皂苷，以及包含这两个新化合物的 活性组合物，是通过以下方法制备得到，
[0013] (1)分别取干燥黄錯果（Stauntonia brachyanthera Hand-Mazz)药材，包括其 根、茎、叶、果实，粉碎后经溶剂提取法，分别采用35% -95%的乙醇或甲醇水溶液，优选 60 % -80 %的乙醇或甲醇水溶液，浸泡后回流提取、浸渍提取、或超声提取2-3次，合并提取 液，减压回收至醇浓度低于5% ;
[0014] (2)步骤（1)所得粗提物溶于水或悬浮于水，依次用石油醚或环己烷或正己烷、二 氯甲烷或氯仿萃取后，再经乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； 或步骤（1)所得粗提物溶于水或悬浮于水后，经大孔吸附树脂柱，用甲醇/水或乙醇/水梯 度（0 :100-100 :0)洗脱，得到35% -85%醇洗脱部位，优选40% -70%的醇洗脱部位；减压 回收溶剂；
[0015] (3)上述步骤（2)所得乙酸乙酯或正丁醇层萃取物，或大孔吸附树脂洗脱流 分经硅胶色谱柱色谱法分离，以氯仿甲醇混合溶剂梯度洗脱得到洗脱流份，洗脱溶剂为 20:1-2:1的氯仿或二氯甲烷/甲醇；
[0016] (4)上述步骤⑶中所得流分经ODS柱色谱处理，以甲醇/水或乙腈/水为流动相 洗脱，其比例为1:9-7:3的甲醇/水混合溶剂、或1:15-4:3的乙腈/水混合溶剂，得到化合 物1、2和3。
[0017] 其中，所述步骤（2)中，提取物溶于水或悬浮于水后，其体积与生药材的重量比为 1:2-2:1 ；
[0018] 所述步骤（2)中萃取所用的石油醚的沸程为30-60°C或60-90°C，萃取溶剂与提取 液的体积比为1:2-2:1 ;萃取次数为2-4次。
[0019] 所述步骤（2)中大孔吸附树脂可选用非极性树脂（XAD-4, Diaion HP-20, D101、 D102、D401，DI、D2、D3、D4，HPD-100，X-5)、弱极性树脂（D-201，HPD-300，AB-8)和中等极性 树脂（HPD-400，XAD-6、XAD-7、XAD-8)等。
[0020] 步骤（2)中所得乙酸乙酯或正丁醇萃取物，或大孔吸附树脂35% -85%醇洗脱物， 为含有新化合物Comp. 1 和 Comp. 2,即 3-〇- a -L-arabinopyranosyl- (1 - 3) - a -L-arabino pyranosyl- (I 一 3) - a -L-Ara binopyranosyl_[ β -D-xylopyranosyl- (I 一 2) ] 30-norolean -12-en_28-〇ic acida -L_rhamnopyranosyl-(l - 4)-β -D-glucopyranosyl-(l - 6)-β -D-glucopyra nosyl ester和3β，20α，24-trihydroxy-29-norolean-12-en_28-〇ic acid24 -0-6' -〇-acetyl-0-D-glucopyranoside 的活性组合物。
[0021] 所述的活性组合物包含所述的降甲基齐墩果烷型三萜皂苷和化合物3-14中的一 种或几种：
[0022]
[0023]
[0024] 上述降甲基齐墩果烷型三萜皂苷或活性组合物，以及药学上可接受的赋形剂，组 成一种药物组合物。
[0025] 本发明所述的新降甲基齐墩果烷型三萜皂苷类化合物1和2,和包含这两个成分 的活性组合物，以及药物组合物，具有抗炎、镇痛、保肝、利尿的活性，可用于抗炎、镇痛、保 肝、利尿的药物以及保健品和功能食品中的开发和应用。
【具体实施方式】
[0026] 下面的实施例将对本发明予以进一步的说明，但并不因此而限制本发明。
[0027] 实施例1
[0028] 黄腊果根4kg，粉碎后用12倍，10倍和8倍的35%醇80°C下加热提取三次，（第一 次3小时，第二次2小时，第三次2小时）过滤，合并滤液，回收溶剂或蒸干至浓缩至醇浓度 小于5%，加水稀释至4升，按1:2的比例，分别用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取， 分别萃取4次，合并正丁醇萃取液，回收溶剂，得到浸膏，用硅胶柱色谱分离，按每克提取物 加入1. 5克硅胶拌样装柱，用二氯甲烷/甲醇系统20:1、15:1、12:1、10:1、7 :1、5:1、3:1、2:1 梯度洗脱。分别取10:1-2:1的流分用ODS分离，甲醇/