降甲基齐墩果烷型三萜皂苷及其活性组合物的制备方法和应用_2

文档序号:8933194阅读:来源:国知局
水1:9、2 :8、3:7、5:5、6:4、7:3梯度 洗脱,依次得到化合物2 (20. lmg)、I (9. 2mg)。
[0029] 实施例2
[0030] 黄腊果根4kg,粉碎后用12倍,10倍和8倍的95%醇室温下温浸提取三次,(第 一次4小时,第二次4小时,第三次3小时)过滤,合并滤液,回收溶剂或蒸干至浓缩至无 醇味后,加水稀释至2升,用非极性大孔吸附树脂D-101分离,流动相为甲醇/水,依次经 水、40^^85%甲醇洗脱,得到40%醇洗脱物,进一步用硅胶柱色谱分离,按每克提取物加入 1. 5克硅胶拌样装柱,用二氯甲烷/甲醇系统20:1、15:1、12:1、10 :1、7:1、5:1、3:1、2:1梯度 洗脱。取 10:1-2:1 的流分用 ODS 分离,经 1:15、1:10、3:20、1:5、1 :4、1:3、2:5、1:1、4:3 的 乙腈/水梯度洗脱,依次得到化合物2 (5. 6mg)、1 (4. 3mg)。
[0031] 实施例3
[0032] 黄腊果茎3kg,粉碎后用12倍,10倍和8倍的60%醇80°C下加热提取三次,(第 一次4小时,第二次3小时,第三次3小时)过滤,合并滤液,回收溶剂或蒸干至醇浓度小 于5%,加水稀释至6升,按1:1的比例,用环己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,分别萃取2 次,目标化合物主要富集于正丁醇层,合并正丁醇萃取液,回收溶剂,得到浸膏,用硅胶柱色 谱分离,按每克提取物加入1. 5克硅胶拌样装柱,用二氯甲烷/甲醇系统20:1、15:1、12:1、 10:1、7:1、5:1、3 :1、2:1 梯度洗脱。取 10:1-2:1 的流分用 ODS 分离,经 1:15、1:10、3:20、 1: 5、1: 4、1: 3、2: 5、1:1、4:3的乙腈/水梯度洗脱,依次得到化合物2 (20. lmg)、I (II. 6mg)。
[0033] 实施例4
[0034] 黄腊果茎3kg,粉碎后用12倍,10倍和8倍的80%醇80°C下加热回流提取三次, (第一次4小时,第二次3小时,第三次3小时)过滤,合并滤液,回收溶剂或蒸干至浓缩无醇 味,加水稀释至6升,用非极性大孔吸附树脂HPD-100分离,流动相为乙醇/水,依次经水、 40%、70%乙醇洗脱,得到70%醇洗部分,回收溶剂,得到浸膏,用硅胶柱色谱分离,按每克 提取物加入1.0克硅胶拌样装柱,用二氯甲烷/甲醇系统20:1、15:1、12:1、10:1、7:1、5:1、 3:1、2:1梯度洗脱。分别取10:1-2:1的流分用ODS分离,甲醇/水1:9、2 :8、3:7、5:5、6:4、 7:3梯度洗脱,依次得到化合物2 (3. 7mg)、I (3. 2mg)。
[0035] 实施例5
[0036] 黄腊果根3kg,用12倍,10倍和8倍的60%甲醇室温下超声提取三次,(第一次3 小时,第二次2小时,第三次2小时)过滤,合并滤液,回收溶剂或蒸干至浓缩无醇味,加水 稀释至3升,按1:2的比例,用正己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,分别萃取3次,目标化 合物主要富集于乙酸乙酯层,合并、回收溶剂,得到浸膏;进一步用硅胶柱色谱分离,按每克 提取物加入1.0克硅胶拌样装柱,用二氯甲烷/甲醇系统20:1、15:1、12:1、10:1、7:1、5:1、 3:1、2:1梯度洗脱。分别取10:1-2:1的流分用ODS分离,甲醇/水1:9、2 :8、3:7、5:5、6:4、 7:3梯度洗脱,依次得到化合物2 (25. 3mg)、1 (17. 4mg)。
[0037] 实施例6
[0038] 黄腊果茎4kg,用12倍,10倍和8倍的80%甲醇室温下超声提取三次,(第一次 3小时,第二次2小时,第三次2小时)过滤,合并滤液,回收溶剂或蒸干至浓缩无醇味,加 水稀释至2升,经中等极性树脂XAD-6大孔吸附吸附树脂,流动相为甲醇/ 7K,依次经水、 45%、85%甲醇洗脱,得到85%醇洗部分,回收溶剂,得到浸膏,用硅胶柱色谱分离,按每克 提取物加入1.0克硅胶拌样装柱,用二氯甲烷/甲醇系统20:1、15:1、12:1、10:1、7:1、5:1、 3:1、2:1 梯度洗脱。分别取 10:1-2:1 的流分用 ODS分离,经 1:15、1:10、3:20、1:5、1:4、1:3、 2: 5、1:1、4:3的乙腈/水梯度洗脱,依次得到化合物2 (15. 3mg)、1 (10. 4mg)。
[0039] 实施例7
[0040] 黄腊果叶2kg,用12倍,10倍和8倍的75%醇室80°C提取三次,(第一次4小时, 第二次3小时,第三次3小时)过滤,合并滤液,回收溶剂或蒸干至浓缩至醇浓度低于5%, 加水稀释至4升,弱极性大孔吸附树脂AB-8纯化,流动相为乙醇/水,依次经水、40 %、80 % 乙醇洗脱,得到80%醇洗部分,回收溶剂,得到浸膏,用硅胶柱色谱分离,按每克提取物加入 1.0克硅胶拌样装柱,用二氯甲烷/甲醇系统20 :1、15:1、12:1、10:1、7:1、5 :1、3:1、2:1梯 度洗脱。分别取10:1-2:1的流分用ODS分离,甲醇/水1:9、2 :8、3:7、5:5、6:4、7:3梯度洗 脱,依次得到化合物2 (I I. 2mg)、I (7. 5mg)。
[0041] 实施例8
[0042] 黄腊果果实4kg,用12倍,10倍和8倍的70%醇室80°C提取三次,(第一次4小时, 第二次3小时,第三次3小时)过滤,合并滤液,回收溶剂或蒸干至浓缩至无醇味,加水稀释 至4升,按1:1的比例,用正己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,分别萃取3次,目标化合物 主要富集于正丁醇层,合并、回收溶剂,得到浸膏;进一步用硅胶柱色谱分离,按每克提取物 加入1.0克硅胶拌样装柱,用二氯甲烷/甲醇系统20:1、15 :1、12:1、10:1、7:1、5:1、3 :1、2:1 梯度洗脱。分别取10:1-2:1的流分用ODS分离,甲醇/水1:9、2:8、3 :7、5:5、6:4、7:3梯度 洗脱,依次得到化合物2 (I I. 2mg)、I (9. 5mg)。
[0043] 实施例9
[0044] 黄腊果根6kg,粉碎后用12倍,10倍和8倍的70%乙醇室80°C提取三次(第一次 4小时,第二次3小时,第三次3小时)过滤,合并滤液,回收溶剂或蒸干至浓缩至醇浓度低 于5%,加水稀释至6升,经非极性大孔吸附树脂HPD 100以乙醇/水为流动相,依次经水、 40%、70%乙醇洗脱,得到70%醇洗部分,回收溶剂,得到浸膏,用硅胶柱色谱分离,按每克 提取物加入1.0克硅胶拌样装柱,用二氯甲烷/甲醇系统20:1、15:1、12:1、10:1、7:1、5:1、 3:1、2:1梯度洗脱。分别取10:1-2:1的流分用ODS分离,甲醇/水1:9、2 :8、3:7、5:5、6:4、 7:3梯度洗脱,依次得到化合物2 (47. 2mg)、1 (29. 5mg)。
[0045] 实施例10
[0046] 黄腊果根6kg,粉碎后用12倍,10倍和8倍的70%乙醇室80°C提取三次(第一次 4小时,第二次3小时,第三次3小时)过滤,合并滤液,回收溶剂或蒸干至浓缩至醇浓度低 于5%,加水稀释至6升,经非极性大孔吸附树脂HPD 100以乙醇/水为流动相,依次经水、 40 %、70 %乙醇洗脱,得到70 %醇洗部分的活性组合物。
[0047] 实施例11
[0048] 黄腊果茎4kg,用12倍,10倍和8倍的70%醇室80°C提取三次,(第一次4小时, 第二次3小时,第三次3小时)过滤,合并滤液,回收溶剂或蒸干至浓缩至无醇味,加水稀释 至4升,按1:1的比例,用正己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,分别萃取3次,富集于正丁 醇层,合并、回收溶剂,得到活性组合物。
[0049] 化合物1、2的结构鉴定数据如下:
[0050] 化合物1:白色粉末(CH3OH),254nm下无暗斑,365nm下无突光,体积分数为10%硫 酸-乙醇显紫色,HR-TOF-MS中给出准分子离子峰[2M+Na+K] 2+:m/z 1500. 6718 (calcd. for 1500. 5993),示分子式为 C67H1Q6033。
[0051] 化合物2 :白色针状粉末(CH3OH),紫外(254nm)下无暗斑,体积分数为10 %硫 酸-乙醇溶液显紫色,HR-ESI-MS中给出准分子离子峰[M+Na]+;m/z:701. 3880(calcd 701. 3871,C37H58Na1O11),示分子式为 C37H580n。
[0052] 表1化合物1和2降甲基三萜母核部分的核磁数据
[0053]
[0054]
[0055] 表2化合物1糖部分的核磁数据
[0056] Γ?,、《·, .、 如1,*^,.、 X / ? 1 I_I I D,、<, ?-i
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