ΕΑ和12mg戊二酸酐，室温下搅拌过夜，柱色谱分离纯化，得固体物。再用2mL DMF 溶解后，加 IOOmg半胱-天冬-脯-甘-酪-异亮-甘-丝-精多肽、50mg BOP和60 μ L DIPEA，室温下搅拌1小时，减压去溶剂，加5%乙酸、300uL TFA和700uL吡啶，乙酸乙酯萃 取，乙酸乙酯萃取，制备型高效液相色谱分离纯化，得乙酰-半胱-天冬-脯-甘-酪-异 亮-甘-丝-精-表阿霉素化合物。
[0073] 实施例27 :乙酰-半胱-天冬-脯-甘-酪-异亮-甘-丝-精-吡喃阿霉素 (YAN-136)的合成
[0074] 80mg盐酸吡喃阿霉素溶入2mLDMF中，加50mgFmoc-0Su，溶于50μLDIPEA中， 室温下搅拌反应3小时，减压去除溶剂，0. 1 % TFA水溶液洗涤，过滤，干燥后加 ImL DMF、 25μ?)ΙΡΕΑ和12mg戊二酸酐，室温下搅拌过夜，柱色谱分离纯化，得固体物。再用2mL DMF 溶解后，加 IOOmg半胱-天冬-脯-甘-酪-异亮-甘-丝-精多肽、50mg BOP和60 μ L DIPEA，室温下搅拌1小时，减压去溶剂，加5%乙酸、300uL TFA和700uL吡啶，乙酸乙酯萃 取，乙酸乙酯萃取，制备型高效液相色谱分离纯化，得乙酰-半胱-天冬-脯-甘-酪-异 亮-甘-丝-精-吡喃阿霉素化合物。
[0075] 实施例28 :乙酰-半胱-天冬-脯-甘-酪-异亮-甘-丝-精-米托蒽醌 (YAN-146)的合成
[0076] 80mg盐酸米托蒽醌溶入2mL DMF中，加25 μ LDIPEA和30mg戊二酸酐，室温下 搅拌过夜，柱色谱分离纯化得中间产物。取2mL DMF溶解中间产物后，加 IOOmg半胱-天 冬-脯-甘-酪-异亮-甘-丝-精多肽、50mg BOP和60 μ L DIPEA，室温下搅拌1小时，减 压去溶剂，加5%乙酸，乙酸乙酯萃取，制备型高效液相色谱法分离纯化，得乙酰-半胱-天 冬-脯-甘-酪-异亮-甘-丝-精-米托蒽醌化合物。
[0077] 实施例29 :乙酰-半胱-天冬-脯-甘-酪-异亮-甘-丝-精-替洛蒽醌 (ΥΑΝ-156)的合成
[0078] 80mg替洛蒽醌溶入2mL DMF中，加25 μ LDIPEA和30mg戊二酸酐，室温下搅拌过 夜，柱色谱分离纯化，取得的产物经2mL DMF溶解后，加 IOOmg半胱-天冬-脯-甘-酪-异 亮-甘-丝-精多肽、50mgB0P和60μLDIPEA，室温下搅拌l小时，减压去溶剂，加5%乙 酸，乙酸乙酯萃取，制备型高效液相色谱法分离纯化，得乙酰-酪-异亮-甘-丝-精-替 洛蒽醌化合物。
[0079] 实施例30 :含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的阿霉素衍生物细胞毒性
[0080] 取对数生长期的67LR高表达人肝癌MHCC97细胞、人乳腺癌MDAMB231细胞和67LR 低表达人肺癌MR-90细胞胰酶消化，用含血清的培养液收集细胞，离心、重悬、计数。96孔 培养板中间十列的各孔中加入200 μ L细胞悬液，每孔细胞数为5 X IO3个细胞。将200 μ L 培养液加入第1列和第12列的8个孔中。第1列为不含细胞的空白对照。细胞在37°C CO2培养箱中培养24小时后分待测化合物实验组和阿霉素阳性对照组。实验组以待测化合物 中阿霉素的浓度计，用不含血清的细胞培养液5倍系列稀释，共形成8个浓度梯度。阳性对 照用不含血清的细胞培养液将阿霉素进行5倍系列稀释，形成8个浓度，做好标记。小心移 去第2至11列各孔培养液。在第2列和第11列的8个孔中加入200 μ L不含血清的新鲜 培养液，这些细胞作为对照。而在第3至10列各孔细胞中加入200 μ L含不同浓度受试物 的培养液，每个浓度至少4孔。细胞继续在37°C、C02培养箱中培养48小时。加200 μ L新 鲜培养液，在第1-11列所以孔中各加入20 μ L、5mg/mL四甲基偶氮唑盐（MTT)。37°C孵育4 小时后，弃去孔中培养液和MTT，在第1-11列所有孔中各加入100 μ L二甲基亚砜（DMSO)。 酶标仪检测各孔OD值（检测波长570nm)。第2列和第11列各孔中得出的平均吸光值作 为对照吸光值，对照组吸光值减少一半时的药物浓度为半数抑制浓度（IC5tl)。本发明以IC5tl来判断各受试物的对不同类型肿瘤细胞的杀伤敏感性，实验数据以均数土标准差（X 土s) 表不的结果见下表：
[0081] 表1 :阿霉素及阿霉素衍生物的体外细胞毒性（IC5tl)(单位：μ M)
[0082]
[0083] 从上表可见，阿霉素衍生物的细胞毒性在67LR高表达细胞（MHCC97、和MDAMB231) 中较阿霉素高（IC5tl值低），而在67LR低表达的MR-90中，阿霉素衍生物的细胞毒性比阿 霉素低（IC5tl值高）。
[0084] 实施例31 :含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的表阿霉素衍生物细胞毒性
[0085] 取MHCC97细胞、MDAMB231细胞和MR-90细胞胰酶消化，用含血清的培养液收集细 胞，离心、重悬、计数。96孔培养板中间十列的各孔中加入200 μ L细胞悬液，每孔细胞数为 5X IO3个细胞。将200 μ L培养液加入第1列和第12列的8个孔中。第1列为不含细胞的 空白对照。细胞在37°C CO2培养箱中培养24小时后分待测化合物实验组和表阿霉素阳性 对照组。实验组以待测化合物中表阿霉素的浓度计，也用不含血清的细胞培养液5倍系列 稀释，共形成8个浓度梯度。阳性对照用不含血清的细胞培养液将阿霉素进行5倍系列稀 释，形成8个浓度，做好标记。小心移去第2至11列各孔培养液。在第2列和第11列的8 个孔中加入200 μ L不含血清的新鲜培养液，这些细胞作为对照。而在第3至10列各孔细 胞中加入200 μ L含不同浓度受试物的培养液，每个浓度至少4孔。细胞继续在37°C、CO2培养箱中培养48小时。加200 μ L新鲜培养液，在第1-11列所以孔中各加入20 μ L、5mg/ mL MTT。37°C孵育4小时后，弃去孔中培养液和MTT，在第1-11列所有孔中各加入100 yL DMS0。酶标仪检测各孔OD值（检测波长570nm)。第2列和第11列各孔中得出的平均吸 光值作为对照吸光值，对照组吸光值减少一半时的药物浓度为半数抑制浓度（IC5tl)。本发 明以IC5tl来判断各受试物的对不同类型肿瘤细胞的细胞毒性，实验数据以均数土标准差 (X 土s)表不的结果见下表：
[0086] 表2 :表阿霉素及表阿霉素衍生物的体外细胞毒性（IC5tl)(单位：μ M)
[0087]
[0088] 表阿霉素在高、低不同67LR表达的细胞中的毒性无明显差异。与表阿霉素不同， 在67LR高表达细胞（MHCC97和MDAMB231)中，表阿霉素衍生物的毒性比表阿霉素高（IC5tl值低），在67LR低表达的MR-90中，衍生物的细胞毒性比表阿霉素低（IC5tl值高）。
[0089] 实施例32 :含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的吡喃阿霉素衍生物细胞毒性
[0090] 取MHCC97、MDAMB231和頂R-90细胞胰酶消化，用含血清的培养液收集细胞，离心、 重悬、计数。96孔培养板中间十列的各孔中加入200 μ L细胞悬液，每孔细胞数为5 X IO3个 细胞。将200 yL培养液加入第1列和第12列的8个孔中。第1列为不含细胞的空白对 照。细胞在37°C、C02培养箱中培养24小时后分待测化合物实验组和吡喃阿霉素阳性对照 组。实验组以待测化合物中吡喃阿霉素的浓度计，也用不含血清的细胞培养液5倍系列稀 释，共形成8个浓度梯度。阳性对照用不含血清的细胞培养液将阿霉素进行5倍系列稀释， 形成8个浓度，做好标记。小心移去第2至11列各孔培养液。在第2列和第11列的8个孔 中加入200 μ L不含血清的新鲜培养液，这些细胞作为对照。而在第3至10列各孔细胞中 加入200 μ L含不同浓度受试物的培养液，每个浓度至少4孔。细胞继续在37°C CO2培养箱 中培养48小时。加200 μ L新鲜培养液，在第1-11列所以孔中各加入20 μ L、5mg/mL MTT。 37°C孵育4小时后，弃去孔中培养液和MTT，在第1-11列所有孔中各加入100 μ L DMS0。酶 标仪检测各孔OD值（检测波长570nm)。第2列和第11列各孔中得出的平均吸光值作为对 照吸光值，对照组吸光值减少一半时的药物浓度为半数抑制浓度（IC5tl)。
[0091] 在体外培养的高、低不同67LR表达的人癌细胞系中加入合成的化合物作用48小 时，采用MTT还原法进行检测，计算各化合物的半数抑制浓度（IC5tl)，并与吡喃阿霉素阳性 对照组比较，以判断衍生物对不同类型肿瘤细胞的杀伤敏感性。实验数据以均数土标准差 (X 土s)表不的结果见下表：
[0092] 表3 :啦喃阿霉素及其衍生物的体外细胞毒性（IC5tl)(单位：μ M)
[0093]
[0094] 实施例33 :含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的托蒽醌衍生物细胞毒性
[0095] 96孔培养板孔中，按每孔5X IO3个细胞数分别加入MHCC97、MDAMB231或頂R-90 细胞，24小时后分米托蒽醌衍生物实验组和米托蒽醌阳性对照组，按不同