多肽--蒽环类衍生物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物与医药技术领域。更具体的说它涉及多肽与蒽环类药物共价连接 所形成的偶联化合物及其制备方法。这些共价偶联化合物能主动靶向性定向于具有67kDa 层粘连蛋白受体阳性表达的各种肿瘤。
【背景技术】
[0002] 阿霉素（doxorubicin)、表阿霉素（epirubicin)、吡喃阿霉素（pirarubicin)、米 托蒽醌（mitoxantrone)和替洛蒽醌（teloxantrone)等蒽环类抗生素，通过抑制细胞DNA 和RNA的合成，发挥抗肿瘤作用。现已成为多种癌症化疗方案中的核心药物，被全球广泛使 用。然而，由于蒽环类药物对肿瘤缺乏选择性，往往对正常组织造成非特异性损害，使人体 产生骨髓抑制、胃肠道反应、脱发等毒性副反应。其中最为显著和突出的毒性作用是不可逆 的剂量累积性心脏损害，使其在临床上的应用受到了严格地限制。
[0003] 为了提高药物的疗效并克服毒性副作用，利用肿瘤细胞比正常细胞中有更高表达 和/或异常表达的受体作为靶点，以配体的活性片段为载体，与蒽环类药物偶联产生新型 药物化合物，借助配体-受体的结合具有高特异性、高选择性和高亲和力等生物学特性，配 体活性片段携带药物，主动识别细胞中的靶标受体并与其结合，通过受体的介导进入细胞， 从而在肿瘤细胞内积聚高浓度的药物来发挥作用。与此同时，由于该受体在正常组织细胞 中没有表达或是低表达，与配体活性片段偶联的药物化合物不能或很少与受体结合，细胞 不摄取或仅摄取少量药物，从而改变了药物在体内的分布状态，完成药物在体内的重分布 和重分配。因此，利用上述原理，我们针对性地将特定的配体活性片段，引入到蒽环类药物 分子中进行修饰和改造，设计并合成出能使它们靶向性分布于癌细胞的新型药物分子，形 成了高效、低毒的高选择性抗肿瘤化合物。
[0004] 选择肿瘤细胞中高度表达或过度表达的受体分子为靶点，是肿瘤靶向治疗的基 础。经过近三十年的研宄，已证实67kDa层粘连蛋白受体（67kDa laminin receptor，67LR) 是细胞外基质层粘连蛋白的高亲和性细胞膜受体，介导了肿瘤细胞的粘附、侵袭和转移。 67LR在许多临床常见的恶性肿瘤细胞中都存在高度表达或过度表达，且其表达水平与肿瘤 的浸润转移倾向呈现明显的正相关，所以，67LR是一种非常理想的靶向性抗肿瘤药物特异 性识别和结合的靶点。
[0005] 酪氨酸（Try，Y)-异亮氨酸（lie，I)-甘氨酸（Gly，G)-丝氨酸（Ser，S)-精氨 酸（Arg，R)五肽（简称：HGSR)序列是层粘连蛋白与67LR结合的活性位点（层粘连蛋白929^3)，也是非常重要的抑制肿瘤浸润转移的生物活性肽。它与受体（即67LR)的结合具有 高特异性和高亲和力，无抗原性，是首选的靶向细胞67LR分子的配体活性片段。
[0006] 本发明基于配体-受体反应特异性的原理，通过特别设计，将含有HGSR序列的多 肽、蛋白质及其衍生物作为载体，与蒽环类药物分子偶联，合成出含YIGSR多肽序列的蒽环 类衍生物，能靶向性集聚蒽环类药物到67LR阳性表达的肿瘤细胞中发挥高效、低毒的抗肿 瘤药理效应。经体外和动物体内的系列试验，发现合成的衍生物具有：①.良好的肿瘤选 择性；②.专一的受体介导通路；③.高效的抗肿瘤活性；④.甚低的机体正常组织毒性； ⑤.高度的生物相容性等特点。可以解决蒽环类药物使用中遇到的缺乏肿瘤选择性等难 题。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是为了提高蒽环类化合物的抗肿瘤效果及克服毒性副作用，为恶性 肿瘤的治疗提供高效、低毒的方案。本发明涉及的衍生物可与细胞67LR结合，高选择性地 输送蒽环类药物至体内67LR阳性表达的靶组织，发挥靶向治疗的作用。
[0008] 本发明的技术方案是这样实现的：它是含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的化合 物，是由酪-异亮-甘-丝-精氨酸五肽及其衍生物与蒽环类化合物共价结合形成蒽环型 衍生物，它具有识别细胞细胞67kDa层粘连蛋白受体并与该受体结合的能力。其通式如下： Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-AN，Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg 表示酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨 酸-精氨酸五肽，AN表示蒽环类化合物。
[0009] 本发明的技术方案是通式如下的化合物J1-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-Z 1-AN, Tyr-IIe-Gly-Ser-Arg表示酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸五肽，AN表示蒽环 类化合物，ZJP Z 2分别选自氢、羟基、氨基、酯基、硫醚、硫醇、羧基、羰基、卤素、硝基、氰基、 芳烷基、芳基、饱和或不饱和的杂环基团。
[0010] 本发明涉及的含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的化合物，是在酪-异 亮-甘-丝-精氨酸五肽分子中增加了一个氨基酸或者任意长度氨基酸序列的多肽及其衍 生物。它们与蒽环类化合物共价结合形成蒽环型衍生物，具有识别细胞67kDa层粘连蛋白 受体并与该受体结合的能力。其通式如下=Z1-Aaa1-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-Aaa 2-Z2-AN,其 中，Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg为酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸五肽；Aaa1表示 一个或者任意长度的氨基酸多肽及其衍生物，Aaa2表示一个或者任意长度的氨基酸多肽及 其衍生物，AaaJP Aaa 2可以相同或不同；AN为蒽环类化合物。
[0011] 本发明涉及的蒽环类化合物是阿霉素（英文名称：doxorubicin，adriamycin)或 者是阿霉素的衍生物，与含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的化合物共价结合所形成的蒽 环型衍生物，具有识别细胞67kDa层粘连蛋白受体并与该受体结合的能力。其通式如下：Z ^aa1-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-Aaa2-Z2-DOX 0
[0012] 本发明涉及的蒽环类化合物是表阿霉素（英文名称：印irubicin)或者是表阿霉 素的衍生物，与含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的化合物共价结合所形成的蒽环型衍生 物，具有识别细胞67kDa层粘连蛋白受体并与该受体结合的能力。其通式如下=Z1-Aaa1-Ty r_IIe-Gly-Ser-Arg-Aaa2-Z2-EPI〇
[0013] 本发明涉及的蒽环类化合物是吡柔比星（英文名称：pirarubicin)或者是吡柔比 星的衍生物，其通式如下=Z1-Aaa1-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-Aaa 2-Z2-PIR0
[0014] 本发明涉及的蒽环类化合物是米托蒽醌（英文名称：mitoxantrone)或者是米托 蒽醌的衍生物，其通式如下=Z1-Aaa1-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-Aaa 2-Z2-MIT0
[0015] 本发明涉及的蒽环类化合物是替洛蒽醌（英文名称：moxantrazole)或者是替洛 蒽醌的衍生物，其通式如下=Z1-Aaa1-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-Aaa 2-Z2-MOX0
[0016] 本发明提供的含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的蒽环型衍生物能与细胞67kDa 层粘连蛋白受体结合，选择性地输送蒽环类化合物到达体内细胞67kDa层粘连蛋白受体高 度或过度表达的靶组织，以增加病灶局部药物浓度，提高疗效和降低毒副作用，达到靶向治 疗的目的。
【附图说明】
[0017] 图1 :含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的阿霉素衍生物对荷瘤小鼠体内肿瘤生 长的抑制作用。
[0018] 图2 :含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的表阿霉素衍生物对荷瘤小鼠体内肿瘤 生长的抑制作用。
[0019] 图3 :含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的米托蒽醌衍生物对荷瘤小鼠体内肿瘤 生长的抑制作用。 具体实施例
[0020] 以下结合实施例对本发明做进一步描述：
[0021] 实施例1 :酪-异亮-甘-丝-精-表阿霉素（YAN-121)的合成
[0022] 80mg 盐酸表阿霉素溶入 2mL DMF 中，加 50mg Fmoc-〇Su，溶于 50 μ L DIPEA 中， 室温下搅拌反应3小时，减压去除溶剂，0. 1 % TFA水溶液洗涤，过滤，干燥后加 ImL DMF、 25 μ LDIPEA和12mg戊二酸酐，室温下搅拌过夜，柱色谱分离纯化，得固体物。再用2mL DMF溶解后，加85mg YIGSR、50mg BOP和60 μ L DIPEA，室温下搅拌1小时，减压去溶剂， 加300uL TFA和700uL吡啶，乙酸乙酯萃取，制备型高效液相色谱分离纯化，得酪-异 亮-甘-丝-精-表阿霉素化合物。
[0023] 实施例2:酪-异亮-甘-丝-精-吡喃阿霉素（YAN-131)的合成
[0024] 80mg 盐酸吡喃阿霉素溶入 2mL DMF 中，加 50mg Fmoc-OSu，溶于 50 μ L DIPEA， 室温下搅拌反应3小时，减压去除溶剂，0.1 % TFA水溶液洗涤，过滤，干燥后加 ImL DMF、 25 μ LDIPEA和12mg戊二酸酐，室温下搅拌过夜，柱色谱分离纯化，得固体物。将固体物用 2mLDMF溶解后，加85mgYIGSR、50mgB0P和60μLDIPEA