浓度配制米托蒽 醌和米托蒽醌衍生物（以其中所含米托蒽醌的浓度计）为受试物。在第2列和第11列的 8个孔中加入不含血清的新鲜培养液为对照。而在第3至10列各孔细胞中加入不同浓度 受试物，每浓度至少4孔。细胞继续在37°C、CO2培养箱中培养48小时。加20 μ L、5mg/mL 皿1'1'。37°0孵育4小时，再加1001^01^0，然后，然后用酶标仪检测各孔00值。计算各组半 数抑制浓度（IC5tl),实验数据以均数土标准差表示，其结果见下表：
[0096] 表4 :米托蒽醌及其衍生物的体外细胞毒性（IC5tl)(单位：μ M)
[0097]
[0098] 实施例34 :含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的替洛蒽醌衍生物细胞毒性
[0099] 96孔培养板孔中，按每孔5X IO3个细胞数分别加入MHCC97、MDAMB231或頂R-90 细胞，分替洛蒽醌衍生物实验组和替洛蒽醌对照组。在培养板的第3至10列各孔细胞中加 入不同浓度的替洛蒽醌或替洛蒽醌衍生物（以其中所含替洛蒽醌的浓度计），每浓度至少 4孔。细胞继续在37°0、〇)2培养箱中培养48小时。加2(^1^、511^/1111^1'1'。37°0孵育4小 时，再加100 μ L DMS0,然后，然后用酶标仪检测各孔OD值。计算各组半数抑制浓度（IC5tl)， 实验数据以均数土标准差表示，其结果见下表：
[0100] 表5 :替洛蒽醌及其衍生物的体外细胞毒性（IC5tl)(单位：μ Μ)
[0101]
[0102] 实施例35 :含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的阿霉素衍生物抗肿瘤活性
[0103] 取鼠肝癌H22细胞，用RPMI-1640培养液调整细胞数为I. 5X IO7个/mL，将0. 2mL 细胞悬液接种至BALB/c小鼠（体重18~22g)后肢皮下，2周后选择肿瘤生长良好且无坏 死的动物，颈椎脱臼处死，无菌条件下取出实体瘤，切成直径约2mm大小的瘤块，用穿刺针 移植至鼠后肢外侧皮下。肿瘤移植后1周，选择肿癌生长良好的小鼠为移植瘤动物模型， 随机分为待测化合物实验组、阿霉素阳性对照组和生理盐水溶媒阴性对照组。分别在肿瘤 移植后的第7、14和21天，经静脉注射给药。实验组给药剂量按化合物中的阿霉素含量为 15mg/kg，阳性对照组给lmg/kg阿霉素。
[0104] 实验期间每周测量并记录瘤体的长径（a)和短径（b)2~3次，根据公式：V = (aXb2)/2计算肿瘤体积（V)，然后计算出相对肿瘤体积RTV = VtZX(其中Vtl为初次给 药所测肿瘤体积，Vt为每次测得的肿瘤体积）。再计算相对肿瘤增殖率T/C(%) =Tktv/ CktvX 100% (Tktv:实验组或阳性对照组的相对肿瘤体积；Cktv:阴性对照组的相对肿瘤体 积），并以T/C作为抗肿瘤活性评价指标，即T/CM0 %为无效；T/C彡40 %。
[0105] 肿瘤移植后1周（第1次给药时）的初治疗肿瘤体积及肿瘤移植后5周（第35 天）经3次静脉给药治疗后各组动物的死亡情况、实验末肿瘤体积、相对肿瘤增殖率T/C等 的结果见下表。
[0106] 表6 :各组鼠肝癌移植瘤的疗效比较
[0107]
[0108] 实施例36 :含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的表阿霉素衍生物抗肿瘤活性
[0109] 用RPMI-1640培养液调整鼠肝癌H22细胞数为I. 5X IO7个/mL，取0. 2mL细胞悬 液接种至BALB/c小鼠（体重18~22g)后肢皮下，2周后动物颈椎脱臼处死取出实体瘤切 成小瘤块，用穿刺针将肿瘤移植至动物后肢皮下。1周后选择肿癌生长良好的小鼠为移植瘤 动物模型，随机分为待测化合物实验组、表阿霉素阳性对照组和生理盐水阴性对照组。分别 在肿瘤移植后的第7、14和21天，实验组动物按化合物中所含表阿霉素15mg/kg为剂量静 脉注射给药，而对照组静脉注射lmg/kg表阿霉素。
[0110] 肿瘤移植后1周（第1次给药时）的初治疗肿瘤体积及肿瘤移植后5周（第35 天）经3次静脉给药治疗后各组动物的死亡情况、实验末肿瘤体积、相对肿瘤增殖率T/C等 的结果见下表。
[0111] 表7 :各组鼠肝癌移植瘤的疗效比较
[0112]
[0114] 实施例37 :含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽的米托蒽醌衍生物抗肿瘤活性
[0115] 取鼠肝癌H22细胞，用RPMI-1640培养液调整细胞数为I. 5X IO7个/mL，将0. 2mL 细胞悬液接种至BALB/c小鼠（体重18~22g)后肢皮下，2周后选择肿瘤生长良好且无坏死 的动物，颈椎脱白处死，无菌条件下取出实体瘤，切成直径约2mm大小的瘤块，用穿刺针移 植至鼠后肢外侧皮下。肿瘤移植后1周，选择肿癌生长良好的小鼠为移植瘤动物模型，随机 分为待测化合物实验组、阿霉素阳性对照组和生理盐水溶媒阴性对照组。分别在肿瘤移植 后的第1、7和14天，经静脉注射给药。实验组给药剂量按化合物中的阿霉素含量为15mg/ kg，阳性对照组给lmg/kg阿霉素。
[0116] 实验期间每周测量并记录瘤体的长径（a)和短径（b)2~3次，根据公式：V = (aXb2)/2计算肿瘤体积（V)，然后计算出相对肿瘤体积RTV = VtZX(其中Vtl为初次给 药所测肿瘤体积，Vt为每次测得的肿瘤体积）。再计算相对肿瘤增殖率T/C(%) =Tktv/ CktvX 100% (Tktv:实验组或阳性对照组的相对肿瘤体积；Cktv:阴性对照组的相对肿瘤体 积），并以T/C作为抗肿瘤活性评价指标，即T/CM0 %为无效；T/C彡40 %。
[0117] 肿瘤移植后1周（第1次给药时）的初治疗肿瘤体积及肿瘤移植后5周（第35 天）经3次静脉给药治疗后各组动物的死亡情况、实验末肿瘤体积、相对肿瘤增殖率T/C等 的结果见下表。
[0118] 表9 :各组鼠肝癌移植瘤的疗效比较
[0119]
【主权项】
1. 一种多肽一蒽环类衍生物，其通式如下：Z ^Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-Z1-AN, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg表示酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸五肽序列，AN表 示蒽环类化合物，ZJP Z2分别选自甲苯璜酰基、三氟甲璜酚酯、三氟乙酸酯、一或二苄化氨 基、酰化氨基、三氟酰基、三氟酰化氨基、吗啉代、氰基取代的吗啉代、一、二、三或四一甲氧 基取代的吗啉代、一、二、二或四一酰氧基取代的吗啉代、C1 一C16酰基、Ci一C16芳基酰基、酰 基、C1 一C16酰氧基、酰氧基、酰胺基、Ci一 016烷基、Ci一 016烷氧基、烷氧基烷基、径烷基、芳烧 基、芳烷氧基烷基、C1-C16芳基氨基羰基、C:一C16芳基氨基硫代羰基、C3-C8环烷基、C3-C8 烷基二羧酸基团或羰基或硫代羰基、单糖或多聚糖。2. 根据权利要求1所述的多肽一蒽环类衍生物，其通式如下：Z^Aaa1-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-Aaa2-Z2-AN,其中，AN为蒽环类化合物；Tyr-IIe-Gly-Ser-Arg为酪氨酸-异亮氨 酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸五肽序列；Aaa1表示一个或者任意长度的氨基酸或其衍生物， Aaa2表示一个或者任意长度的氨基酸或其衍生物，AaaJPAaa2可以相同或不同。3. 根据权利要求1所述的多肽一蒽环类衍生物，其中所述的蒽环类化合物是阿霉素或 其衍生物，或者是表阿霉素或其衍生物，或者是柔红霉素或其衍生物，或者是吡柔比星或其 衍生物，或者是阿克拉霉素或其衍生物，或者是去甲氧柔红霉素或其衍生物，或者是米托蒽 醌或其衍生物。4. 根据权利要求1所述的多肽一蒽环类衍生物，其结构式如下：〇5. 根据权利要求1所述的多肽一蒽环类衍生物，其结构式如下：O9. 根据权利要求1所述的多肽一蒽环类衍生物，其结构式如下：10. -种含酪-异亮-甘-丝-精氨酸多肽序列的靶向性蒽环型衍生物的制备方法，它 是以戊4-(N-马来酰亚胺基甲基）环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯作为交联剂，将含酪-异 亮-甘-丝-精氨酸多肽的化合物与蒽环类化合物进行交联形成含酪-异亮-甘-丝-精 氨酸多肽的蒽环型衍生物。
【专利摘要】本发明属于生物与医药技术领域。更具体的说它涉及多肽与蒽环类药物共价连接所形成的偶联化合物及其制备方法。这些共价偶联化合物能主动靶向性定向于具有67kDa层粘连蛋白受体阳性表达的各种肿瘤。其通式如下：Z1-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-Z1-AN，Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg表示酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸五肽序列，AN表示蒽环类化合物。本发明能与细胞67kDa层粘连蛋白受体结合，选择性地输送蒽环类抗肿瘤药物到达体内的靶组织，以增加病灶局部药物浓度，提高疗效和降低毒副作用，达到靶向治疗的目的。
【IPC分类】A61K47/48, A61P35/00, C07K7/06, A61K31/704
【公开号】CN104961800
【申请号】CN201510387288
【发明人】艾时斌, 黄泽波, 刘鑫
【申请人】天津佳岭生物医药开发有限公司
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2015年7月3日