一种生物转化率高的杏鲍菇液体菌种及其发酵方法_3

文档序号:9270927阅读:来源:国知局
的水,得混合物料,控制温度80°C保持化,接着降温至45°C,用乳酸 调节抑值为4,在功率200W条件下进行微波提取12min,同时在功率250W,频率35KHZ条 件下进行超声波辅助提取;然后加入混合物料总重量1. 0 %的混合酶进行酶解,用乳酸调 节抑值为6. 2,酶解化,最后添加混合物料2倍重量己醇和丙醇的混合物,己醇和丙醇混合 的质量比为1:2,控制温度至70°C保持3.化,过滤,得第一滤液;添加滤渣2倍重量的水,控 制温度90°C保持化,然后降温至30°C,过滤,得第二滤液;将第一滤液和第二滤液按照质量 比3:2合并,滤液真空浓缩后冷冻干燥、粉碎即得中草药提取物;
[0054] 所述混合酶为葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比3:2:2:1均匀混 合。
[005引2.木屑粉的制备;
[0056] 所述木屑粉的制备方法,包括如下步骤:将无发霉、无病虫银木末或废木屑除去杂 物,置于装有质量百分比浓度0. 5%的碳酸氨钢溶液的超声波清洗机中于200W、30KHz清 洗lOmin,冲洗、渐干,放入蒸汽蓋中于0. 35MPa蒸煮25min,取出,渐干,与植物油按质量比 100:1均匀混合,然后将混合物置微波干燥机于2000W、120°C微波福照5min,其中微波福照 10s,停留10s,最后超微粉碎至粒径0.4mm,密封包装即得木屑粉。
[0057] 3.包被壳聚糖的制备;
[0058] 所述包被壳聚糖的制备方法,包括如下步骤;取壳聚糖加入其质量30%的质量百 分比浓度为14%的a-环状糊精水溶液中,制成软材,用20目筛制粒,得湿颗粒,置微波干 燥机中于功率2000W、70°C干燥5min,用20目筛快速整粒即得包被壳聚糖。
[0059] 下述实施例2-7中所使用的中草药提取物、木屑粉及包被壳聚糖均为实施例1制 备,杏鲍茹菌种为福建省潭州市龙海食用菌研究所提供的"龙海3号",其它原料均为市购。
[0060] 实施例2
[0061] 一种生物转化率高的杏鲍茹液体菌种的发酵方法,包括如下步骤:
[0062] 1)取保存好的杏鲍茹斜面菌种0.2cm2的菌种块2块接种于平板培养基进行活化, 25°C恒温培养10天,如此活化2次,得平板种子;
[0063] 2)将平板种子用直径为0. 5cm的打孔器截取0. 2cm2的菌种块3块接入250mLS角 瓶中,液体种子培养基装液量为lOOmU于25°C恒温培养2天,然后放入恒温摇床中,25°C、 10化/min振荡培养3天得液体种子;
[0064]如将液体种子W10 %的接种量接种于500血摇瓶中,摇瓶培养基装液量250mL,于 25°C、150r/min振荡恒温培养4天得摇瓶种子;
[006引 4)将摇瓶种子W10%的接种量接种于化种子罐中,种子罐培养基装液量3L,于 25°C、通气量化/min条件下恒温培养4天得种子罐种子;
[0066] 5)首先将种子罐种子W8%接种量接种于3化发酵罐,发酵培养基装液量15L于 31°C、通气量化/min恒温发酵1她,然后W0. 4°C/min速率降温至20°C,向发酵罐中加入 14g包被壳聚糖和900血种子罐种子,在通气量化/min条件下恒温发酵13h,最后W0. 3°C/ min速率升温至25°C,在通气量化/min条件下恒温发酵4她即得生物转化率高的杏鲍茹液 体菌种;
[0067] 所述平板培养基组成为;马铃馨200g/l,葡萄糖20g/l,蛋白腺5g/l,磯酸二氨钟 3g/L,硫酸儀 1. 5g/l,琼脂 20g/L,VBi〇. 02g/L,余量为水,抑值 6. 0 ;
[0068] 所述液体种子培养基组成为;葡萄糖30g/l,酵母浸出汁5g/l,蛋白腺2g/l,琼脂 2g/l,中草药提取物0. 4g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 2g/L,VBi〇.Olg/ L,余量为水,抑值6.0;
[0069] 所述摇瓶培养基组成为:黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药提取 物0. 7g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 4g/L,VBi〇.Olg/l,余量为水,抑值 6. 0 ;
[0070] 所述种子罐培养基组成为;黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药提 取物1.Og/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 4g/L,VBi〇.Olg/l,余量为水,pH 值 6. 0;
[0071] 所述发酵培养基的组成为;黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药提 取物1. 8g/l,木屑粉0. 8g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/L,VBi〇.Olg/l,余量为水,pH 值 6. 0;
[0072] 所述发酵培养基的制备方法为;按照培养基配方准确称量各原料,首先取黄豆饼 粉质量5倍的水,用乳酸调节抑值为5. 5,加入加/g黄豆饼粉的耐高温a-淀粉酶,边揽 拌边加入黄豆饼粉,升温至93°C,保温,液化12min,然后降温至55°C,保温,边揽拌边加入 40u/g黄豆饼粉的糖化酶和30u/g黄豆饼粉的蛋白酶水解25min,边揽拌边加入剩余水和其 它原料,均匀混合,调整抑值为6. 0,121°C灭菌40min即得发酵培养基。
[0073] 经上述方法制备的生物转化率高的杏鲍茹液体菌种菌丝球密度为5. 5X105个/ L菌丝球直径为0. 5mm,菌丝球干重为lOOg/l,胞外多糖为3. 5g/L。
[0074] 实施例3
[00巧]一种生物转化率高的杏鲍茹液体菌种的发酵方法,包括如下步骤:
[0076] 步骤1)至4)同实施例2;
[0077] 5)首先将种子罐种子W8%接种量接种于3化发酵罐,发酵培养基装液量15L于 30°C、通气量化/min恒温发酵12h,然后W0. 3°C/min的速率降温至18°C,向发酵罐中加入 13g包被壳聚糖和900血种子罐种子,在通气量化/min条件下恒温发酵lOh,最后W0. 2°C/ min的速率升温至24°C,在通气量化/min条件下恒温发酵4化即得生物转化率高的杏鲍茹 液体菌种;
[0078] 所述平板培养基组成同实施例2;
[0079] 所述液体种子培养基组成为;葡萄糖30g/l,酵母浸出汁5g/l,蛋白腺2g/l,琼脂 2g/l,中草药提取物0. 3g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0.Ig/L,VBi〇.Olg/L,余量为水,抑值6.0 ;
[0080] 所述摇瓶培养基组成为:黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药提取 物0. 6g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 3g/L,VBi〇.Olg/l,余量为水,抑值 6. 0 ;
[0081] 所述种子罐培养基组成为;黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药提 取物0. 8g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 3g/L,VBi〇.Olg/l,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0082] 所述发酵培养基的组成为;黄豆饼粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草药提 取物1. 5g/l,木屑粉0. 6g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/L,VBi〇.Olg/l,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0083] 所述发酵培养基的制备方法为;按照培养基配方准确称量各原料,首先取黄豆饼 粉质量4倍的水,用乳酸调节抑值为5,加入加/g黄豆饼粉的耐高温a-淀粉酶,边揽拌边 加入黄豆饼粉,升温至90°C,保温,液化lOmin,然后降温至50°C,保温,边揽拌边加入40u/ g黄豆饼粉的糖化酶和30u/g黄豆饼粉的蛋白酶水解20min,边揽拌边加入剩余水和其它原 料,均匀混合,调整抑值为6. 0,123°C灭菌30min即得发酵培养基。
[0084] 经上述方法制备的生物转化率高的杏鲍茹液体菌种菌丝球密度为5.0X105个/ L菌丝球直径为0. 6mm,菌丝球干重为96g/l,胞外多糖为3. 2g/L。
[00财实施例4
[0086] -种生物转化率高的杏鲍茹液体菌种的发酵方法,包括如下步骤:
[0087] 步骤1)至4)同实施例2 ;
[0088] 5)首先将种子罐种子W8%接种量接种于3化发酵罐,发酵培养基装液量15L于 32 °C、通气量化/min恒温发酵2化,然后W0. 5°C/min的速率降温至22 °C,向发酵罐中加入 15g包被壳聚糖和900血种子罐种子,在通气量化/min条件下恒温发酵16h,最后W0. 4°C/ min的速率升温至26°C,在通气量化/min条件下恒温发酵5化即得生物转化率高的杏鲍茹 液体菌种;
[0089] 所述平板培养基组成同实施例2 ;
[0090] 所述液体种子培养基组成为;葡萄糖30g/l,酵母浸出汁5g/l,蛋白腺2g/l,琼脂 2g/l,中草药提取物0. 5g/l,磯酸二氨钟0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 3g/L,VBi〇.Olg/ L,余量为水,抑值6.0 ;
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