神经营养因子模拟化合物及其盐的结晶形式的制作方法
【专利说明】神经营养因子模拟化合物及其盐的结晶形式
[0001] 相关申请案的交叉引用
[0002] 本申请要求2012年9月27日提交的第61/706, 273号美国临时申请和2013年3 月14日提交的第61/785, 469号美国临时申请的优先权，该两个临时申请均通过引用整体 并入本文。 发明领域
[0003] 本发明设及神经营养因子模拟化合物的结晶形式和神经营养因子模拟化合物的 盐和/或溶剂化物的结晶形式、制备所述结晶形式的方法W及使用它们的方法。
[0004] 发明背景
[0005] 神经营养因子是在包括神经元、少突胶质细胞、许旺细胞（Schwanncell)、毛囊细 胞和其它细胞的某些细胞的发育、功能发挥和/或存活中起作用的多肤。神经元和其它细 胞类型的死亡或功能异常已直接牵设到许多神经变性病症。已表明，神经营养因子定位、神 经营养因子的表达水平和/或结合神经营养因子的受体的表达水平的改变因此与神经元 变性有关。变性发生于神经变性病症、尤其阿尔茨海默氏病（Alzheimer'S)、帕金森氏病 (Parkinson'S)和ALS中。少突胶质细胞变性可W发生在中枢神经系统损伤、多发性硬化 和其它病理学状态中。
[0006] 已鉴定出多种神经营养因子，包括神经生长因子（NGF)、神经营养因子-3(NT-3)、 神经营养因子-4/5(NT-4/5)、神经营养因子6(NT-6)和脑源性神经营养因子炬DNF)。神经 营养因子W前体形式（称为前神经营养因子）W及成熟形式存在。成熟形式是约120个氨 基酸长度的蛋白，其在生理学状态下作为稳定、非共价大约25kDa的同型二聚体存在。各神 经营养因子单体包括=种溶剂暴露的0 -发夹环，称为环1、2和4,它们在神经营养因子家 族中展示相对高度的氨基酸保守。
[0007] 成熟的神经营养因子优先地结合至受体Trk和p75?(p75神经营养因子受体，也 称为低亲和力神经生长因子受体或LNGFR)，而前神经营养因子（其含有成熟形式中经蛋白 水解除去的N-末端结构域）将主要与p75?相互作用且通过其N-末端结构域与分选受体 选蛋白kortilin)相互作用（F址nestock，M.等（2001)M〇1CellNeurosci18,210-220; Harrington,A.W.等（2004)Proc化tlAcadSciUSA101,6226-6230 ;Nykiaer.A.等， (2004)化化re427,843-848)。p75?与Trk相互作用且调节Trk信号传导，但也独立地 偶联至数个信号传导系统，包括促存活信号IRAK/TRAF6/NF.K.B、PI3/AKT，和促调亡信号 NRAGE/JNK(Mamidipudi，V.等（2002)JBiolChem277,28010-28018;Roux，P.P.等（2001) JBiolChem276,23097-23104;Salehi，A.H.等（2000)Neuron27,279-288)。
[0008] 在施用W用于治疗用途时，神经营养因子展示欠佳的药理学特性，包括较差的稳 定性与低血清半衰期、可能较差的口服生物利用率和受限的中枢神经系统渗透（化化Iso， J.F.，Curran,G.L. (1996)E5rainResMolE5rainRes36,280-286 ;Saltzman，W.M.等 (1999)化armRes16,232-240 ;Partridge，W.M. (2002)AdvExpMedBio513,397-430)。 另外，通过双重受体信号传导网络作用实现的神经营养因子的高度多效效应增加不良作用 的机会。
[0009] 已表明，p75?的未经配合形式是促调亡的，并且神经营养因子结合诱导的同型二 聚体化消除该效应师3叫，11等（2000)1爬脚〇3別1?日3 60,587-593)，该与研究相符，所 述研究显示对单体p75?配体包括单价F油(Maliartcho址，S.等（2000)JBiolQiem275， 9946-9956)和单体环状肤（Longo，F.M.，.（1997)JNeurosciRes48,1-17)的存活没有影 响，而相关二价形式在各研究中促进细胞存活。然而，该些单体配体可WW不同于天然配 体的方式衔接受体。尽管活性NGF是含有2个潜在p75?结合位点的同型二聚体，但最近 的结构证据表明它仅衔接一个p75?分子，不允许结合另一分子化e，X.L.，（2004)Science 304,870-875)。
[0010] 遗憾的是，技术与道德考量大大阻碍了基于神经营养因子的治疗剂的开发。例 如，在技术上难W使用重组DNA技术来产生足够数量的纯神经营养因子。另外，尽管能够 利用人胎儿细胞来产生神经营养因子，但使用该种细胞（通常得自流产胎儿）带来的道德 分歧几乎阻止了利用该种途径。因此，本领域对开发基于神经营养因子的具有有利类药 特征的小分子试剂即神经营养因子模拟物的需要并未得到满足，所述小分子试剂能够祀 向特定神经营养因子受体，用于治疗病症或疾病。美国专利申请公开号2006/024072和 2007/0060526描述了某些神经营养因子模拟物，并且该两个公开的内容出于所有目的通过 引用整体并入本文。
[0011] 药学领域的技术人员将理解活性药物成分的结晶提供控制重要物理化学品质 (诸如稳定性、溶解度、生物利用率、粒度、堆密度、流动特性、多晶型含量和其它特性）的最 佳方法。因此，需要神经营养因子模拟物的结晶形式和产生所述形式的方法。该些结晶形 式应适于药物用途。 发明概要
[0012] 在一个实施方案中，本发明提供2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺 二硫酸盐的结晶形式。在另一实施方案中，本发明提供2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己 基）-戊酷胺单硫酸盐的结晶形式，诸如单硫酸盐-1和单硫酸盐-2。
[0013] 在一个实施方案中，本发明提供包含本发明结晶形式中任一种的组合物。
[0014] 在一个实施方案中，本发明提供治疗设及表达p75的细胞变性或功能异常的病症 的方法，所述方法包括向需要此种治疗的患者施用包含本发明结晶形式的组合物。
[0015] 附图简述
[0016] 图1为2-氨基-3-甲基-N- (2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的X-射线 粉末衍射狂RD)图谱的图形。
[0017] 图2A为2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的差示扫 描量热法值SC)热谱图。
[001引图2B为2-氨基-3-甲基-N- (2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的热重分 析（TGA)热谱图。
[0019] 图3A为2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的动态蒸 气吸附值V巧动力学曲线图。
[0020] 图3B为2-氨基-3-甲基-N- (2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的DVS等 温曲线图。
[0021] 图4为2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的iH-NMR 光谱。
[0022] 图5为2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的FT-IR(傅 立叶变换红外）光谱的图形。
[0023] 图6为2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的拉曼光 谱的图形。
[0024] 图7为2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶单硫酸盐（单硫酸 盐-1)的X畑图谱的图形。
[0025] 图8A为2-氨基-3-甲基-N- (2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶单硫酸盐（单硫酸 盐-1)的DSC热谱图。
[0026] 图8B为2-氨基-3-甲基-N- (2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶单硫酸盐（单硫酸 盐-1)的TGA热谱图。
[0027] 图9为2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶单硫酸盐（单硫酸 盐-1)的iH-NMR光谱。
[002引图10为2-氨基-3-甲基-N- (2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶单硫酸盐（单硫酸 盐-1)的FT-IR光谱的图形。
[0029] 图11为2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶单硫酸盐（单硫酸 盐-1)的拉曼光谱的图形。
[0030] 图12为2-氨基-3-甲基-N- (2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶单硫酸盐（单硫酸 盐-2)的X畑图谱的图形。
[003。图13为2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶单硫酸盐（单硫酸 盐-2)的DSC热谱图。
[0032]图14为2-氨基-3-甲基-N- (2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶单硫酸盐（单硫酸 盐-2)的FT-IR光谱的图形。
[003引图15为（i) 2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的X畑 图谱与（ii)在43 %相对湿度（RH)下储存约40天的2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己 基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的XRD图谱的叠加。
[0034] 图16A为在43%相对湿度（RH)下储存约40天的2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代 己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的差示扫描量热法值SC)热谱图。
[0035] 图1她为在43%RH下储存约40天的2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊 酷胺的结晶二硫酸盐的热重分析（TGA)热谱图。
[003引图17为（i) 2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的X畑 图谱与（ii)在53 %相对湿度（畑）下储存约40天的2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己 基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的XRD图谱的叠加。
[0037] 图18A为在43%相对湿度（RH)下储存约40天的2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代 己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的差示扫描量热法值SC)热谱图。
[0038] 图18B为在43%RH下储存约40天的2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊 酷胺的结晶二硫酸盐的热重分析（TGA)热谱图。
[003引图19为（i) 2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的X畑 图谱与（ii)在60%相对湿度（RH)下储存约40天然后在45°C下真空干燥15天的2-氨 基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的XRD图谱的叠加。
[0040] 图20A为在60%相对湿度（RH)下储存约40天然后在45°C下真空干燥15天的 2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的差示扫描量热法值SC)热 谱图。
[0041] 图20B为在60%相对湿度（RH)下储存约40天然后在45°C下真空干燥15天的 2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的热重分析（TGA)热谱图。 [004引图21为（i) 2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的X畑 图谱与（ii)在60%相对湿度（RH)下储存约3小时的2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己 基）-戊酷胺的结晶二硫酸盐的XRD图谱的叠加。
[004引发明详述
[0044] 在患有与表达p75的细胞变性或功能异常相关的病症（诸如神经变性病症）的患 者中，可W发生神经营养因子定位、神经营养因子的表达水平、结合神经营养因子的受体的 表达水平和/或受体信号传导和功能结果的改变。因此，通过向罹患此类病症的患者提供 调节p75?功能或proNGF/NGF结合的相应神经营养因子或其模拟物W预防细胞变性或功 能异常，此种神经变性能够得W减轻或预防。
[0045] 本发明设及神经营养因子模拟化合物的结晶形式W及神经营养因子模拟化合物 的盐和/或溶剂化物的结晶形式。该些结晶物质能配制成药物组合物且用于治疗设及表达 p75的细胞变性或功能异常的病症。
[0046] 定交
[0047] 应理解，本文所用的术语仅出于描述具体实施方案的目的且并非意在进行限制。
[0048] 除非另有定义，否则本文所用的全部技术和科学术语具有与本申请所属领域的普 通技术人员通常所理解的含义相同的含义。尽管与本文描述的那些类似或等同的任何方法 和物质都能够用于本申请的实践或测试，但代表性方法和物质是本文所描述的。
[0049] 根据长期W来的专利法公约，在本申请中（包括权利要求）使用时，术语"一个/ 种（a/an)"和"所述"是指"一个/种或多个/种"。因此，例如，提及"一种载体"包括一种 或多种载体的混合物、两种或更多种载体等。
[0050] 除非另外指出，否则说明书和权利要求中所用的表达成分数量、反应条件等的全 部数字应理解为在所有情况下皆由术语"约"修饰。因此，除非指出相反情形，否则本申请 说明书和所附权利要求中所述的数值参数是近似值，其能够取决于本申请致力于获得的所 希望特性而变化。通常，如本文在提及可测量值诸如重量、时间、剂量等的量时所用的术语 "约"意在涵盖自指定量的在一个实施例中±20%或±10%的变化，在另一实施例中±5% 的变化，在另一实施例中±1%的变化和在又一实施例中±0.1%的变化，该样的变化适于 施行所公开的方法。
[005。 术语"本发明化合物"、"本文化合物"或"2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊 酷胺"是指本申请通篇描述的2-氨基-3-甲基-N-(2-吗咐代己基）-戊酷胺盐W及其水合 物和/或溶剂化物的结晶形式，包括W下各项的结晶形式；2-氨基-3-