18. 1, 1. 8Hz, 1H),4. 96 (d,J= 1. 5Hz, 1H),4. 85 (dd,J =18. 1, 1. 8Hz, 1H),3. 96 (q,J= 6. 5Hz, 1H)3. 89(brs, 1H), 3. 66 - 3. 58 (m, 1H),3. 38 (s, 3H),3. 19 (d,J= 8. 6Hz, 1H),3. 04 (s, 1H),2. 73 (dd,J =15. 5, 9. 6Hz, 1H), 1. 97(s, 3H), 1. 91 - 1. 13(m, 21H), 1. 26(d,J= 6. 3Hz, 3H), 0. 94 (s, 3H), 0. 93 (s, 3H) ；ESI-MS(m/z) 576 [M+l]+.
[0057] 实施例3:化合物A03和ACM的合成
[0058]
[0059] 将化合物0R(518mg，lmmol)溶于吡啶（3mL)中，于冰浴搅拌下缓慢滴加对甲苯磺 酰氯（381mg，2mmol)，滴加完毕后，升温至60°C搅拌反应过夜。TLC检测原料消失后，向反 应液中加入叠氮化钠（130mg，2mm〇l)，继续搅拌反应3h。反应结束后，反应液用二氯甲烷 (20mL)稀释，水洗涤两次，饱和食盐水洗涤，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后经 柱层析（4:1，石油醚/丙酮）得中间体Dl(326mg，60% )。
[0060] 将中间体D1 (326mg，0. 6mmol)溶于四氢咲喃/水（8mL，8:1)中，加入三苯基膦 (1. 69g，6mmol)，升温至100°C回流反应6h。反应结束后，减压浓缩除去四氢呋喃，残余物用 二氯甲烷（20mL)稀释，水洗涤两次，饱和食盐水洗涤，二氯甲烷层用无水硫酸钠干燥，减压 浓缩后经柱层析（60:1: 0? 5 %，二氯甲烷/甲醇/三乙胺）得目标产物A03 (133mg，43 % ) 和A04(62mg，20% )。
[0061] A03NMR(CDC13, 400MHz) 8 5. 87 (t,J= 1. 5Hz, 1H), 4. 98 (dd,J= 18. 1, 1. 4Hz, 1H),4. 80 (dd,J= 18. 1, 1. 4Hz, 1H),4. 48 (d,J= 10. 0Hz, 1H),4. 05 (brs, 1H), 3. 38 (s, 3H), 3. 20 - 3. 02 (m, 2H), 2. 77 (t,J= 7. 4Hz, 1H), 2. 46 (t,J= 9. 6Hz, 1H),L91 -1. 13 (m, 23H), 1. 27 (d,J= 6. 1Hz, 3H), 0. 93 (s, 3H), 0. 87 (s, 3H) ；ESI-MS(m/z) 518 [M+l]+.
[0062]A04：1HNMR(CDC13, 400MHz)8 5. 88 (t,J= 1. 5Hz, 1H), 4. 82 (dd,J= 18. 1, 1. 4Hz, 1H), 4. 71dd,J= 18. 1, 1. 4Hz, 1H), 4. 49 (dd,J= 9. 9, 1. 7Hz, 1H), 4. 05 (brs, 1H),3. 38 (s, 3H), 3. 12 (m, 3H), 2. 46 (t,J= 9. 2Hz, 1H), 2. 26 (dd,J= 12. 0, 4. 8Hz, 1H),L91 -1. 13 (m, 23H), 1. 28 (d,J= 6. 1Hz, 3H), 1. 03 (s, 3H), 0. 94 (s, 3H)；ESI-MS(m/z) 518[M+l]+.
[0063] 试验实施例：体外抗肿瘤活性试验
[0064] (1)试验材料
[0065]HeLa人宫颈癌细胞株、HL60人白血病细胞株、NCI-H460人大细胞肺癌细胞、U-87 人胶质瘤细胞、U-87MG人脑星型胶质母细胞瘤细胞、U251神经胶质瘤、Jurkat人外周血白 血病T细胞、PC-3人前列腺癌细胞株，以上细胞均购自中国科学院上海生命科学研究院细 胞资源中心。
[0066] 阳性对照为欧夹竹桃苷（按常规方法配制）；纯度由HPLC-UV检测98%以上，结构 由NMR确证。待测化合物（化合物AO1、化合物A02、化合物A03、化合物A04)和阳性对照物 (化合物0L、化合物0R)以生理盐水稀释，浓度梯度为10 4M、10 5M、10 6M、10 7M、10SM。
[0067] (2)试验方法
[0068] SRB还原法：
[0069] 根据细胞生长速率，将处于对数生长期的肿瘤细胞以100yL/孔接种于96孔培养 板，贴壁生长24h再加待测化合物或阳性对照物10yL/孔。每个浓度设三复孔。并设相 应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞调零孔。肿瘤细胞在37°C、5%C02条件下培养72h， 然后倾去培养液（RPMI-1640)，用10%预冷的三氯乙酸固定细胞，4°C放置lh后用蒸馏水 洗涤5次，空气中自然干燥。然后加入由1%冰醋酸配制的磺酰罗丹明B(Sigma)4mg/mL溶 液100yL/孔，室温中染色15分钟，去上清液，用1 %醋酸洗涤5次，空气干燥。最后加入 150yL/孔的Tris溶液，酶标仪515nm波长下测定A值。按以下列公式计算肿瘤细胞生长 的抑制率：
[0070] 抑制率％=[(阴性对照吸光值-空白吸光值）_ (样品吸光值-空白吸光值）]/ (阴性对照吸光值-空白吸光值）X100%
[0071]药物作用浓度：10yM、1yM、0. 1yM、10nM、lnM、0.InM。用GraphPadPrism4 拟合 出IC5。。
[0072]表1、欧夹竹桃苷和夹竹苷A衍生物对人源HeLa肿瘤细胞株的细胞增殖抑制活性
[0073]
[0074] 通过对欧夹竹桃苷和夹竹苷A衍生物对人源HeLa肿瘤细胞株的细胞增殖抑制活 性研究发现，4' -氨基取代的4' -去羟基欧夹竹桃苷和4' -去羟基夹竹苷A的抗肿瘤活性比 欧夹竹桃苷和夹竹苷的抗肿瘤活性显著提高，其中，化合物A01、A02和A03的细胞毒活性具 有显著地提高。但是A04的抗肿瘤活性则较弱，这也说明夹竹桃苷和夹竹苷A的衍生物的 抗肿瘤活性并不能通过简单地判断，得出其结构和抗肿瘤活性之间的关系，因此，我们的工 作具有较强的创新性。
[0075] 此外，我们用化合物0L和化合物0R为对照，选取了活性较强的化合物A01、A02和 A03对多种人源肿瘤细胞株的细胞增殖抑制活性进行了实验，结果见表2。实验结果表明化 合物A01、A02和A03对多个肿瘤细胞株的IC5。较他们的母体化合物0L和0R有显著地提 尚。
[0076] 表2、0L、OR、A01、A02和A03对人源肿瘤细胞株的细胞增殖抑制活性
[0077]
【主权项】
1. 一种具有下面通式I所示结构的化合物或其药学上可接受的盐：2. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述具有通式I所示结 构的化合物选自下列化合物中：3. -种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1或2所述的具有通式I所示结构 的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。4. 根据权利要求3所述的药物组合物，其进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂、佐 剂、辅料和/或稀释剂。5. -种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1或2所述的具有通式I所示结构 的化合物或其药学上可接受的盐以及其他药学上可接受的治疗剂（优选为抗肿瘤药物）作 为活性成分。6. 根据权利要求5所述的药物组合物，其中，所述其他药学上可接受的治疗剂为选自 以下药物的一种或多种：作用于DNA化学结构的抗肿瘤药物，如顺铂；影响核酸合成的抗肿 瘤药物，如甲氨蝶呤（MTX)、5_氟尿嘧啶（5FU);影响核酸转录的抗肿瘤药物，如阿霉素、表 阿霉素、阿克拉霉素、光辉霉素；作用于微管蛋白合成的抗肿瘤药物，如紫杉醇、长春瑞滨； 芳香化酶抑制剂，如氨鲁米特、兰特隆、来曲唑、瑞宁德；细胞信号通路抑制剂，如表皮生长 因子受体抑制剂伊马替尼、吉非替尼、埃罗替尼、拉帕替尼。7. 根据权利要求5或6所述的药物组合物，其进一步包含药学上可接受的辅料。8. 权利要求1或2所述的具有通式I所示结构的化合物或其药学上可接受的盐在制备 用于抗肿瘤的药物中的用途。9. 根据权利要求8所述的用途，其中，所述肿瘤为恶性肿瘤。10. 根据权利要求9所述的用途，其中，所述恶性肿瘤选自肝癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、食 道癌、直肠癌、血癌。
【专利摘要】4′-氨基-4′-去羟基-欧夹竹桃苷和4′-氨基-4′-去羟基-夹竹苷A及其用途。本发明提供一种以下通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、其制备方法、包含以下通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物以及它们的用途。所述化合物对人源肿瘤细胞株增殖具有抑制活性，可用作治疗恶性肿瘤的药物。
【IPC分类】A61K31/7048, C07J19/00, A61P35/02, A61P35/00
【公开号】CN105037474
【申请号】CN201510408260
【发明人】胡立宏, 刘璇, 雷敏, 果德安, 刘军华
【申请人】中国科学院上海药物研究所
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年7月13日