一种新的三萜类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种从中药灵芝中分离出的具有抗肿瘤作用的新化合物。
[0002] 本发明还涉及该化合物的制备方法。
[0003] 本发明还涉及以该化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
【背景技术】
[0004] 恶性肿瘤常称癌症，是严重威胁人类健康的常见病、多发病。目前治疗恶性肿瘤的 三大主要方法包括化学治疗、外科手术和放射治疗。化疗是当今治疗肿瘤的主要手段，在肿 瘤治疗中有明显的疗效，但对肿瘤细胞的特异性仍不理想，在杀伤肿瘤的同时也影响正常 细胞如肝细胞、肠胃道和骨髓细胞等，具有较大的毒副作用（如导致免疫功能低下、骨髓抑 制和急性肾功能衰竭等）；此外临床上许多肿瘤对化疗不敏感，或是在最初的敏感后表现 为群体抗性，这成为化疗来治疗肿瘤的一大障碍。由于化学合成药物具有很大的毒副作用， 从传统中药中寻找毒性低、疗效高的抗癌新药成为肿瘤治疗研究领域的重要课题。在我国， 采用中药防治恶性肿瘤历史悠久。很多中药已被证实具有抗肿瘤作用，如斑盂对肝癌、胃 癌、乳腺癌等有效；长春花碱对恶性淋巴瘤、白血病等肿瘤有效；喜树碱对白血病有效等。 由于植物所含的天然化合物具有来源广泛、价格低廉、毒性低等优点，因此从中草药中寻找 高效低毒，作用专一的抗肿瘤药物有广阔的发展前景。
[0005] 中药灵芝是多孔菌科灵芝属真菌植物赤芝[Ganodermalucidum(Leyss.exFr.) Karst]或紫芝[Ganodermajaponicum(Fr.)Lloyd]的干燥子实体。性温、味甘，具有补 中益气、滋补强壮、扶正固本的功效，临床上常用于肿瘤的治疗或辅助治疗。对于灵芝抗 肿瘤有效成分的研究，主要针对灵芝多糖和灵芝三萜类成分。抗肿瘤研究结果表明，灵芝 三萜对多种肿瘤细胞的生长和转移都有抑制作用。对灵芝三萜类成分的研究在20世纪 八十年代达到了高潮，目前已经有150多种灵芝三萜类成分被分离鉴定，我们在针对灵 芝抗肿瘤作用的有效成分研究中，分离鉴定了一个新的三萜类化合物，命名为24(S)-24， 25-dihydroxylanost-8-en_3，7，11-trione。药理学实验表明，该化合物具有抗肿瘤活 性。针对该化合物经过试验，确定了合理的制备方法。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种从灵芝中分离出的具有抗肿瘤作用的新的三萜类化合 物[24(S)_24， 25-dihydroxylanost-8-en-3, 7，ll_trione]〇
[0007] 本发明的另一个目的在于提供制备该化合物方法。
[0008] 本发明的再一目的在于提供该化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
[0009] 根据本发明的一方面，提供具有下列化学结构式（I)的化合物：
[0010] 本发明所述的化合物（I)的制备方法，包括以下步骤： A) 将灵芝用醇或醇溶液提取一次或2次以上，过滤，收集滤液，再减压浓缩干燥，获得 醇提取物； B)将醇提取物加水，以石油醚萃取脱脂后，再以乙酸乙酯萃取，获得的乙酸乙酯萃取液 再以pH8-12碱性水溶液萃取，取乙酸乙酯相蒸干，获得粗品； C)将获得的粗品进行色谱分离纯化，得到纯的式（I)化合物。
[0011] 上述步骤C)的粗品进行色谱分离纯化的步骤包括如下：1)将粗品在硅胶上进行 柱层析，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，获得石油醚-乙酸乙酯的体积比为1:2的洗脱物； 2)取此部位的洗脱物经制备型高效液相色谱分离，甲醇-水梯度洗脱，从甲醇-水的体积 比为85:15的洗脱部位得到纯的式（I)化合物。
[0012] 上述pH8-12碱性水溶液采用饱和NaHCCVK溶液。
[0013] 上述的结构式（I)的化合物或其衍生物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
[0014] 所述的肿瘤为人慢性粒细胞白血病细胞株K562、人髓系白血病细胞株HL60、人口 腔表皮样癌细胞株KB、人食管癌细胞株0E-19或人结肠癌细胞株SW620。
[0015] 含有治疗有效量的上述的结构式（I)的化合物或其衍生物的药物组合物。
[0016] 上述结构式（I)的化合物和/或其衍生物的含量大于50%以上，尤其90%以上。
[0017] 含有治疗有效量的上述的结构式（I)的化合物或其衍生物的药物组合物在制备 治疗肿瘤药物中的应用。
[0018] 具体地说，本发明上述化合物（I)的制备方法，本发明的化合物可以人工合成，但 优选的是从天然植物中分离提取，以获得天然存在的、低毒性的天然化合物。在本发明的 一个优选实施方案中，从中国传统中药灵芝中分离纯化了本发明的化合物，其制备步骤包 括： A)将灵芝用醇或醇溶液提取一次或多次，过滤，收集滤液，再减压浓缩干燥，获得醇提 取物； B)将醇提取物加水，以石油醚萃取脱脂后，再以乙酸乙酯萃取，获得的乙酸乙酯萃取液 再以饱和NaHC03水溶液萃取，取乙酸乙酯相蒸干，获得粗品。
[0019] C)将获得的粗品进行色谱分离纯化，得到纯的式（I)化合物。
[0020] 上述步骤C)的粗品进行色谱分离纯化的步骤包括如下：1)将粗品在硅胶上进行 柱层析，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，获得石油醚-乙酸乙酯(体积比1:2)洗脱物；2)取 此部位经制备型高效液相色谱分离，甲醇-水梯度洗脱，从甲醇-水(体积比85:15)洗脱部 位得到纯的式（I)化合物。
[0021] 根据本发明的再一方面，提供含有本发明化合物的药物组合物，可以通过将本发 明化合物添加药学上可接受的载体或附形剂或可选的其他成分而制成适于临床使用的药 物组合物。
[0022] 根据本发明的再一方面，提供本发明化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用，具有 杀伤肿瘤细胞的作用。
[0023] 所述的肿瘤优选为人髓系白血病细胞株HL60和人食管癌细胞株0E-19。
[0024] 实验表明在含有结构式（I)的化合物和/或其衍生物的药物组合物中，其中结构 式（I)的化合物和/或其衍生物的含量大于50%以上，尤其90%以上，治疗效果较佳。
[0025] 本发明的有益效果是：肿瘤细胞增殖的抑制作用，本发明的24⑶-24， 25-dihydroxylanost-8-en_3，7，11-trione对0E-19细胞增殖有显著的抑制作用，表现 出明显的量效关系（见图1)。药物作用于0E-19细胞48h的IC5。值是11. 03yg/ml。作用 于HL60细胞48h的IC5。值是43. 21yg/ml。实验结果表明，本发明的化合物具有抗肿瘤 活性。由上可知，本发明的式（I)化合物--24(S)_24, 25-dihydroxylanost-8-en_3，7， 11-trione制备方法简便，工艺条件温和，式（I)化合物为白色晶体，实验证明采用本发明 工艺步骤，获得的产品纯度可达98%，明显高于现有技术的步骤。本发明的化合物能作为治 疗肿瘤的药物，其具有杀伤肿瘤细胞的作用，尤其对人食管癌具有较好的疗效。
【附图说明】
[0026] 图1为本发明式（I)化合物(作用48h)对0E-19细胞增殖抑制作用的量效关系曲 线图。
【具体实施方式】
[0027] 下面通过对本发明实施例的描述，详细说明但不限制本发明。 实施例
[0028] 实施例1式（I)化合物的制备 材料来源灵芝Ji/ciote??(Leys.exFr. )Karst)购自中国福建仙芝楼生物 科技有限公司，该灵芝的标本样本保藏在福建医科大学药学院。
[0029] 提取和分离将干的和粉碎的灵芝用无水乙醇回流提取3次，每次2h，提取液用2 号滤纸过滤，用旋转蒸发器去除乙醇获得醇提浸膏。醇提浸膏加适量水后，依次用石油醚、 乙酸乙酯萃取，获得的乙酸乙酯萃取液再用饱和碳酸氢钠水溶液萃取，取出乙酸乙酯相减 压浓缩蒸干得粗品，将粗品在硅