一种植物黄酮类化合物及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及一种植物黄酮类化合物及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 大蓟为菊科（Composite)管状花亚科菜蓟族（Cvnareae)蓟属（CirsiumMill.) 植物C.japonicumDC.的干燥地上部分或根。菊科蓟属植物是广泛分布于北温带的一个大 属，全世界约有300种蓟属植物，我国约有50种，全国各地都产，其中常用作药用植物的有 10余种。大蓟是凉性植物，其味甘、苦，归经于心、肝，常用作凉血止血药，并有祛疲痛，治吐 血、尿血、衄血、血淋、血崩、肠风、带下、肠痈、疔疮、痈疡肿毒、高血压等功效。
[0003] 肝脏是人体最大的实质性器官，担负消化、解毒、分泌和生物合成功能，其功能障 碍直接影响人体健康，甚至危及生命。我国是肝病发生率较高的国家之一，各种肝病严重 危害着人们的身体健康，寻找和开发治疗肝病的有效药物是目前国内外肝病领域研究中的 热点。引起肝病发生的因素很多，主要有病毒、酒精和化学物质三大因素，而肝细胞损伤是 各型肝病共同的病理基础。其中，在我国以肝炎病毒和化学物质导致的肝病居多。化学性肝 损伤是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。这些化学物质和药物包括四氯化碳（CC14)、 乙醇、半乳糖胺、扑热息痛及抗结核药物等。它们能通过生成氧自由基和前致炎因子，从诱 导氧化应激和炎症反应，造成细胞膜和酶类破坏，进而引起肝细胞功能障碍，导致肝细胞凋 亡或坏死，进一步引起整个肝脏功能的障碍。化学性肝损伤的起始靶部位都是质膜，质膜一 经破坏就引起连锁反应，形成恶性循环降。在各种化学性肝病中，〇：1 4所致的肝损伤是最 常见的。
[0004] 近年来研究发现，天然药物在肝病治疗方面有良好的效果和巨大潜力。天然药物 治疗肝损伤作用主要为改善肝功能，降低转氨酶活性、降低血清总胆红素；促进肝糖元合 成，保护肝细胞，防止急慢性肝损伤造成的糖元合成障碍；改善肝组织病理，对急性肝损伤 能减轻细胞肿胀，防止细胞坏死、减少炎性细胞浸润，对慢性肝损伤能减轻细胞肿胀，防止 脂肪变性；抑制肝胶原纤维、网状纤维增生，防止肝纤维化发生。天然药物抗肝损伤的作用 机制主要为两方面：①抗氧化和②减少炎症因子生成。多种天然药物被认为能清除自由基， 阻止肝细胞脂质过氧化，同时减少前炎症因子生成，抑制炎症反应，从而维持细胞膜的正常 结构，避免细胞的损害。
【发明内容】
[0005] 为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种植物黄酮类化 合物。
[0006] 本发明的另一目的在于提供上述植物黄酮类化合物的制备方法。
[0007] 本发明的再一目的在于提供上述植物黄酮类化合物的应用。
[0008] 本发明的目的通过下述方案实现：
[0009] -种植物黄酮类化合物，具有式I所示的结构，命名为 Apigenin_7-〇-0-glucoside:
[0010]
[0011] 所述的植物黄酮类化合物的制备方法，包含如下步骤：
[0012] (1)将大蓟根上部分粉碎过筛，然后用乙醇溶液加热回流提取，提取液过滤，然后 减压浓缩蒸干至膏状，得到大蓟乙醇粗提物；
[0013] (2)将步骤（1)制备得到的大蓟乙醇粗提物混悬于水中，依次用石油醚、乙酸乙 酯、正丁醇分级萃取，制备得到不同极性部位；
[0014] (3)取步骤（2)制备得到的正丁醇部位，用硅胶拌样，晾干后，经聚酰胺柱层析，以 氯仿-甲醇为洗脱剂，按照氯仿：甲醇（v:v) = 100:0、99:1、95:5、85:15、75:25、65:35、 50:50、40:60、0:100进行梯度洗脱，经TLC分析合并相似流份，得到组分1~9，其中组分7 由氯仿：甲醇（V:V) = 50:50洗脱得到；
[0015] (4)将步骤（3)制备得到的组分7过凝胶柱分离纯化，甲醇洗脱，制得 Apigenin-7-〇-0 -glucoside，即为植物黄酮类化合物；
[0016] 步骤（1)中所述的过筛的目数优选为10~100目；
[0017] 步骤（1)中所述的乙醇的体积分数优选为70%;
[0018] 步骤⑴中所述的加热回流提取的温度优选为90~100°C;所述的加热回流提取 次数优选为2~4次；所述的加热回流提取每次提取的时间优选为2~4h;
[0019] 步骤（1)中所述的加热回流提取的温度进一步优选为l〇〇°C微沸状态下；所述的 加热回流提取次数进一步优选为3次；所述的加热回流提取每次提取的时间进一步优选为 3h；
[0020] 步骤（1)中所述的减压浓缩的温度优选为40°C~45°C;
[0021] 步骤（2)中所述的分级萃取的条件为：在室温下，等体积萃取2~4h;所述的室温 的范围为20~40°C;所述的萃取时间优选为3h;
[0022] 步骤（3)中所述的硅胶的目数优选为100~200目；
[0023] 步骤（3)中所述的正丁醇部位与硅胶的质量比优选为1:1. 5;
[0024] 步骤（3)中所述的聚酰胺柱的规格为08X120cm;
[0025] 步骤⑷中所述的凝胶柱为葡聚糖凝胶柱；优选为SephadexLH-20 ;
[0026] 步骤⑷中所述的洗脱的流速优选为2BV/h ;
[0027]所述的植物黄酮类化合物具有抗肿瘤作用，可以应用于制备抗肿瘤药物；
[0028] 所述的植物黄酮类化合物具有护肝作用，可以应用于制备护肝药物；
[0029] -种抗肿瘤药物，含有上述植物黄酮类化合物；
[0030] -种护肝药物，含有上述植物黄酮类化合物；
[0031] 本发明的原理：植物来源的黄酮可以保护四氯化碳损伤的肝细胞，减少化学毒物 对肝细胞的生长。本发明发现和确证植物黄酮Apigenin-7-O-0 -glucoside具有显著的护 肝活性，且植物黄酮Apigenin-7-0-0 -glucoside的使用剂量低，在同样剂量下的毒副作 用也较低。
[0032] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0033] (1)本发明首次发现植物黄酮Apigenin-7-0-0 -glucoside在体外能够保护L02 细胞不受四氯化碳损伤。
[0034] (2)植物黄酮Apigenin-7-O-0-glucoside在体外能明显抑制肝癌细胞HepG2的 增殖，同阳性对照效果相当。
[0035] (3)植物黄酮Apigenin-7-0-0-glucoside的用药剂量比较低，而且在有效用药 剂量范围内毒性较低。
[0036] (4)Apigenin-7-O-0-glucoside-1为黄酮类的单一化合物。
[0037] (5)本发明所述的植物黄酮Apigenin-7-0-0-glucoside-1的结构特征描述为： Apigenin-7-〇-0-glucoside是一种黄酮苷，分子量为 432。
【附图说明】
[0038] 图1是Apigenin-7-〇-0 -glucoside的1H-NMR谱图。
[0039]图2是Apigenin-7-〇-0 -glucoside的13C_NMR谱图。
[0040] 图3是Apigenin-7-0-0 -glucoside对HepG2细胞增殖的抑制效果分析图，其中， Ap :Apigenin-7_〇-0-glucoside;5_F:五-氟尿啼啶。
[0041] 图4是Apigenin-7-0-0 -glucoside对四氯化碳诱导的L02细胞的保护作用分析 图，其中，Ap :Apigenin_7-〇- 0 -glucoside。
【具体实施方式】
[0042] 下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限 于此。
[0043] 实施例中，人正常肝细胞L02、人肝癌细胞IfepG2购自中科院上海生命科学研究院 细胞资源中心；大蓟根上部分采自河南。
[0044] Apigenin-7-〇-0-glucoside从大蓟根上部分中制备得到；
[0045] 实施例1从大蓟根上部分中制备得到Apigenin-7-〇-0-glucoside
[0046] (1)将购买的大蓟根上部分粉碎后过20目筛，称取1000g，用体积分数为70%的乙 醇在100°C微沸状态下加热回流提取3次，每次3h，合并提取液，用2层40目纱布过滤，然 后用旋转蒸发仪在40°C下减压浓缩蒸干至膏状，得到大蓟乙醇粗提物；
[0047] (2)在室温25°C下，将步骤（1)制备得到的大蓟乙醇粗提物混悬于水中，依次用石 油醚、乙酸乙酯、正丁醇等体积分级萃取3h，制备得到不同极性部位；
[0048] (3)取步骤（2)制备得到的正丁醇部位，用100~200目硅胶按照正丁醇部位与硅 胶的质量比1:1. 5拌样，晾干后，经聚酰胺柱层析（〇8X120cm)，以氯仿-甲醇为洗脱剂，按 照氯仿：甲醇（V:V) = 100:0、99:1、95:5、85:15、75:25、65:35、50:50、40:60、0:100进行梯 度洗脱，得到组分1~9,其中组分7由氯仿：甲醇（V:V) = 50:50洗脱得到，组分7经聚酰 胺薄层色谱检测，主要为黄酮类物质；
[0049] (4)将步骤（3)制备得到的组分7过S印hadexLH-20柱分离纯化，甲醇洗脱，洗脱 的流速为 2BV/h，即制得Apigenin-7-O-0-glucoside(8. 5mg)〇
[0050] 实施例2从大蓟根上部分中制备得到Apigenin-7-〇-0-glucoside
[0051] (1)将购买的大蓟根上部分粉碎后过40目筛，称取1000g，用体积分数为70%的乙 醇在100°C微沸状态下加热回流提取2次，每次2h，合并提取液，用2层40目纱布过滤，然 后用旋转蒸发仪在42°C下减压浓缩蒸干至膏状，得到大蓟乙醇粗提物；
[0052] (2)在室温30°C下，将步骤（1)制备得到的大蓟乙醇粗提物混悬于水中，依次用石 油醚、乙酸乙酯、正丁醇等体积分级萃取2h，制备得到不同极性部位；
[0053] (3)取步骤（2)制备得到的正丁醇部位，用100~200目硅胶按照正丁醇部位与硅 胶的质量比1:1. 5拌样，晾干后，经聚酰胺柱层析（〇8X120cm)，以氯仿-甲醇为洗脱剂，按 照氯