MHC II类分子提呈的存活蛋白（Survivin）的部分肽及其利用方法
【专利说明】MHCII类分子提呈的存活蛋白（Survivin)的部分肽及其 利用方法
[0001] 本发明是申请号为2009801117467(国际申请号为PCT/JP2009/056649)，申请日 为2009年3月31日、发明名称为"MHCII类分子提呈的存活蛋白（Survivin)的部分肽及 其利用方法"的发明申请的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明涉及能够用于癌免疫疗法的抗原性多肽、和含有该多肽的恶性肿瘤治疗 剂。
【背景技术】
[0003] 作为难以医治的疾病-癌症（恶性肿瘤）的治疗方法之一，可列举利用患者个体 所具有的免疫系统使癌细胞萎缩的、所谓癌免疫疗法。该方法的重点在于，如何使免疫系统 识别癌细胞并将其作为异物、诱导出对癌细胞具有攻击性的免疫细胞。
[0004] 参与抗肿瘤免疫的重要免疫细胞包括表达细胞表面蛋白CD8的细胞毒性性细胞 (⑶8阳性T细胞）、表达细胞表面蛋白⑶4的T细胞（CD4阳性T细胞）。⑶8阳性T细胞 被活化时，将提呈与HLAI类分子结合的抗原的细胞溶解。CD4阳性T细胞为分泌细胞因子 的Th细胞，被通过HLAII类分子提呈抗原的巨噬细胞和/或树突状细胞等活化，对诱导和 维持CD8阳性T细胞发挥辅助功能。
[0005] 此外，已知Th细胞根据所分泌的细胞因子的种类而分成Thl细胞（产生IFN-γ 等）、Th2细胞（产生IL-4等）和ThO细胞（产生细胞因子能力低或同时产生IFN-y、IL-4 等），各细胞的作用正不断地得到阐明。此外，CD4阳性T细胞通过针对MHCII类分子阴性 肿瘤（MHCII类-肿瘤）的间接机制、如介导巨噬细胞的活化，或者通过针对MHCII类阳 性肿瘤的直接机制，从而也能够具有效应功能。
[0006] 迄今为止，人的癌免疫治疗中的T细胞研究主要聚焦于CD8阳性HLAI类限制性 CTL应答（CD8+HLAclassIrestrictedCTLresponse)的鉴定和诱导（专利文献l)aCD4 阳性T细胞方面，报道了癌抗原之一的酪氨酸酶及其对CD4阳性T细胞的表位的鉴定以及 几个表位（专利文献2)，但其数量明显少于CD8阳性HLAI类限制性肽的报告例。
[0007] 此外，已经报道的酪氨酸酶在黑素细胞系列的正常细胞和肿瘤细胞中表达，是与 被视为CD4阳性黑素瘤反应性T细胞的特异性靶标的MHCII类分子结合的唯一黑素瘤缔 合性组织特异性抗原（非专利文献1)。然而，酪氨酸酶为仅在有限类型的肿瘤中表达的抗 原，很难称其为癌免疫治疗中有希望的癌抗原。
[0008] 最近，报道了一种基因，其编码被称为存活蛋白（Survivin)的、被⑶8阳性T细胞 识别的肿瘤特异性抗原（非专利文献2)。存活蛋白被鉴定为具有抑制凋亡作用的物质，是 共由142个氨基酸残基构成的蛋白质。据报道，其显著特征为，存活蛋白在正常组织中限于 胎儿组织、成人中的胸腺和精巢等组织表达，在肿瘤组织尤其是癌变的肺、结肠、乳腺、脾、 前列腺和淋巴瘤等中表达增加（非专利文献2)。
[0009] 还有报道指出，存活蛋白的表达增加与肿瘤性疾患的予后不良相关，认为该蛋白 质作为肿瘤抗原显示出非常重要的作用，存活蛋白中的MHC II类限制性肽的鉴定正在进行 (非专利文献3)。然而，非专利文献3中报告的肽所限制的HLA II类针对有限的HLA型， 为适应临床，需要使用适应多种HLA型的多种肽。
[0010]非专利文献1 :Topalian、S. L.等、1994年、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、第91卷、第 9461-9465页
[0011]非专利文献2 :Chiara Casati等、CANCER RESEARCH、2003年、第63号、第 4507-4515页
[0012]非专利文献3 :Matthias Piesche等、Human Immunology、2007年、第68卷、第 572-576页
[0013] 专利文献1 :W095/19783号公报
[0014] 专利文献2 :TO97/11669号公报
【发明内容】
[0015] 发明要解决的问题
[0016] 本发明提供新的肿瘤抗原、和在利用该肿瘤抗原治疗恶性肿瘤的方法中有用的新 的治疗剂以及能够用于该治疗剂的肿瘤抗原。
[0017] 解决问题的手段
[0018] 本发明人等通过实验发现，含有肿瘤抗原、和对该肿瘤抗原特异性的Th细胞的治 疗剂具有能够使表达该肿瘤抗原的恶性肿瘤显著萎缩的效果；进一步，确定了能够用作该 肿瘤抗原的新的抗原性肽，从而完成了下述各发明。
[0019] (1) -种多肽，其由下述的a)~g)中的任意一个氨基酸序列构成，且具有使对存 活蛋白特异性的Th细胞产生细胞因子的活性，
[0020]a)序列号17所示的氨基酸序列；
[0021] b)在序列号17所示的氨基酸序列的N末端和/或C末端添加1~数十个任意的 氨基酸而成的氨基酸序列；
[0022] c)序列号17所示的氨基酸序列的N末端的1~4个氨基酸缺失的氨基酸序列；
[0023] d)序列号17所示的氨基酸序列的C末端的1~5个氨基酸缺失的氨基酸序列；
[0024] e)序列号17所示的氨基酸序列中的1~数个氨基酸残基被置换和/或缺失的氨 基酸序列；
[0025] f)在序列号17所示的氨基酸序列中的1~数个氨基酸残基被置换和/或缺失的 氨基酸序列的N末端和/或C末端，添加1~数十个任意的氨基酸而成的氨基酸序列；
[0026] g)序列号17所示的氨基酸序列的N末端和/或C末端的1~5个氨基酸缺失的 氨基酸序列中进一步置换了1~数个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0027] (2)根据⑴所述的多肽，b)~g)的氨基酸序列构成的多肽具有由序列号17所 示的氨基酸序列构成的多肽所具有的表位，该表位由CD4阳性T细胞诱导对存活蛋白特异 性的Th细胞。
[0028] (3)编码⑴或⑵所述的多肽的核酸。
[0029] (4)含有（3)所述的核酸的载体。
[0030] (5)与⑴或⑵所述的多肽特异性结合的抗体。
[0031] (6) -种恶性肿瘤免疫治疗用疫苗，其含有（1)或（2)所述的多肽中的至少一种以 上作为有效成分。
[0032] (7) -种诱导对存活蛋白特异性的Th细胞的方法，所述方法包括在体外孵育（1) 或（2)所述的多肽中的至少一种以上、抗原提呈细胞和CD4阳性T细胞的工序。
[0033] (8) -种恶性肿瘤治疗剂，其含有（1)或（2)所述的多肽、以及对该多肽或存活蛋 白特异性的Th细胞。
[0034] 发明效果
[0035] 本发明的肽通过与抗原提呈细胞和CD4阳性T细胞一起孵育，诱导对存活蛋白特 异性的Th细胞（以下表示为Sur/Th细胞）；此外，具有使该Sur/Th细胞产生细胞因子的 活性。该Sur/Th细胞特异性攻击表达存活蛋白的恶性肿瘤，因而本发明的肽能够用作恶性 肿瘤治疗剂的成分。
[0036] 此外，本发明的多肽，其组成氨基酸残基数少，并不限于通过基因重组法制备，也 能通过有机合成的方法大量制造，因而在临床研究或临床应用中，能够稳定且廉价地供给。 [0037] 此外，含有本发明的多肽的恶性肿瘤治疗剂通过将肿瘤抗原与对该肿瘤抗原特异 性的Th细胞组合，能够更强烈地促进Th细胞产生细胞因子。所产生的细胞因子在生物体 内针对表达该肿瘤抗原的恶性肿瘤引发特异性的抗肿瘤免疫反应，使肿瘤萎缩。
【附图说明】
[0038] 图1是细胞内染色结果的图，其表示的是：对含有由HLA的基因型为 HLA-DRB1 *0101 /HLA-DRB1 *0901的人诱导出的Sur/Th细胞的细胞群，分别添加混合肽 MIX1~MIX5时，对Sur/Th细胞的IFN-γ的产生进行测定的结果。图中，纵轴表示⑶4的 表达强度，横轴表示IFN-γ的表达强度。
[0039] 图2是细胞内染色结果的图，其表示的是：对含有由HLA的基因型为 HLA-DRB1 *0101 /HLA-DRB1 *0901的人诱导出的Sur/Th细胞的细胞群，分别添加多肽SU16~ SU22时，对Sur/Th细胞的IFN-γ的产生进行测定的结果。图中，纵轴表示CD4的表达强 度，横轴表示IFN-γ的表达强度。
[0040] 图3表示的是：对含有由HLA的基因型为HLA-DRB1*0101/HLA-DRB1*0901的人 诱导出的Sur/Th细胞的细胞群，分别添加抗HLA-DP抗体、抗HLA-DQ抗体和抗HLA-DR 抗体时，通过ELISA对Sur/Th细胞的IFN-γ的产生进行测定的结果。图中，纵轴表示 IFN-γ(IFN-g)的产生量。
[0041] 图4表示的是：对含有由HLA的基因型为HLA-DRB1*0101/HLA-DRB1*0901的人诱 导出的Sur/Th细胞的细胞群、和对HLA的基因型分别为HLA-DRB1*1201/HLA-DRB1*1405、 HLA-DRB1*0410/HLA-DRB1*12