酵母属物种、有孢圆酵母属物种、假丝酵母属物 种、耶氏酵母属物种和克鲁维酵母属物种。
[0070] 59.条款45-55中任一项的方法，其中所述宿主细胞选自汉逊酵母属物种、毕赤 酵母属物种、酵母菌属物种、裂殖酵母属物种、耶氏酵母属物种、有孢圆酵母属物种、假丝酵 母属物种和克鲁维酵母属物种。
[0071] 60.条款12或13中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞为甲醇营养型酵母。
[0072] 61.条款60的宿主细胞，其中所述宿主细胞选自汉逊酵母属物种、毕赤酵母属物 种和假丝酵母属物种。
[0073] 62.包含条款16的DNA构建体的宿主细胞，其中所述宿主细胞为甲醇营养型酵 母。
[0074] 63.条款62的宿主细胞，选自汉逊酵母属物种、毕赤酵母属物种和假丝酵母属物 种。
[0075] 64.条款17-27中任一项的方法，其中所述宿主细胞为甲醇营养型酵母。
[0076] 65.条款64的方法，其中所述宿主细胞选自汉逊酵母属物种、毕赤酵母属物种和 假丝酵母属物种。
[0077] 66.条款25或53中任一项的方法，其中所述第三个表达盒包含编码蛋白质的异 源编码序列与具有包含SEQIDN0:15或SEQIDN0:16的序列或任何其它A0X1或A0X2启 动子序列的序列的分离核酸操作性连接，其中SEQIDN0:15和SEQIDN0:16具有启动子 活性。
[0078] 67.生产一种或多种蛋白质的方法，所述方法包括在培养基中培养包含第一个表 达盒、第二个表达盒以及一个或多个额外表达盒的宿主细胞的步骤，其中所述一个或多个 额外表达盒的每个包含条款1-4中任一项的分离核酸与编码一种或多种蛋白质的异源编 码序列操作性连接，其中所述培养在允许该一种或多种蛋白质表达的条件下进行。
[0079] 68.生产一种或多种蛋白质的方法，所述方法包括步骤 在培养基中培养包含第一个表达盒、第二个表达盒以及一个或多个额外表达盒的宿主 细胞，其中所述一个或多个额外表达盒的每个包含条款29-38中任一项的分离核酸与编码 一种或多种蛋白质的异源编码序列操作性连接，其中所述培养在允许该一种或多种蛋白质 表达的条件下进行。
[0080] 69.条款17或45中任一项的方法，进一步包括从所培养的宿主细胞的培养基中 纯化蛋白质的步骤。
[0081] 70.条款67或68中任一项的方法，进一步包括从所培养的宿主细胞的培养基中 纯化所述一种或多种蛋白质的一种或多种的步骤。
[0082] 71.条款1-70中任一项的分离核酸、宿主细胞、表达载体、分离蛋白质、DNA构建 体或方法，其中所述分离核酸由SEQIDN0. 1-14中的任一或其片段组成。
[0083] 72.由SEQIDN0. 1-14中的任一或其片段组成的分离核酸。
[0084] 73.条款5的分离核酸，其中所述异源编码序列编码选自毒素、抗体、激素、酶、生 长因子、细胞因子、结构蛋白、免疫原性蛋白和细胞信号传导蛋白的蛋白质或多肽。
[0085] 74.条款29的分离核酸，其中所述异源编码序列编码选自毒素、抗体、激素、酶、 生长因子、细胞因子、结构蛋白、免疫原性蛋白和细胞信号传导蛋白的蛋白质或多肽。
[0086] 75.生产蛋白质或多肽的方法，所述方法包括步骤 在培养基中培养含有包含条款1-4中任一项的分离核酸与编码蛋白质或多肽的异源 编码序列操作性连接的第一个表达盒的宿主细胞，其中所述培养在允许该蛋白质或多肽表 达的条件下进行。
[0087] 76.生产蛋白质或多肽的方法，所述方法包括在培养基中培养含有包含条款 29-38中任一项的分离核酸与编码蛋白质或多肽的异源编码序列操作性连接的第一个表达 盒的宿主细胞的步骤，其中所述培养在允许该蛋白质或多肽表达的条件下进行。
[0088] 附图简述 图1显示甲醇-诱导性启动子的核苷酸序列，CAM1_(FR839630_178837..180488)_selection(SEQIDN0:1)〇
[0089] 图2显示甲醇-诱导性启动子的核苷酸序列，PP7435_Chrl-1351_selection(SEQ IDNO:2)〇
[0090] 图3显示甲醇-诱导性启动子的核苷酸序列，THI4_selection(SEQIDN0:3)。
[0091] 图4显示甲醇-诱导性启动子的核苷酸序列，GPM2_selection(SEQIDN0:4)。
[0092] 图5显示甲醇-诱导性启动子的核苷酸序列，PP7435_Chr2-0790_selection(SEQ IDNO:5)〇
[0093] 图6显示甲醇-诱导性启动子的核苷酸序列，PP7435_Chr3-0842_selection(SEQ IDNO:6)〇
[0094] 图7显示组成型启动子的核苷酸序列，PP7435_Chrl-0269_selection(SEQID NO:7)〇
[0095] 图8显示组成型启动子的核苷酸序列，PP7435_Chr2-0207_selection(SEQID NO:8)〇
[0096] 图9显示组成型启动子的核苷酸序列，PP7435_Chr2-0208_selection(SEQID NO:9)〇
[0097] 图10显示组成型启动子的核苷酸序列，PP7435_Chr2-0809_selection(SEQID NO:10)〇
[0098] 图11显示组成型启动子的核苷酸序列，PP7435_Chr4-0069_selection(SEQID NO:11)〇
[0099]图12显示组成型启动子的核苷酸序列，PP7435_Chr4-0800_selection(SEQID NO:12)〇
[0100] 图13显示组成型启动子的核苷酸序列，TEF2_selection巴斯德毕赤酵母CBS 7435染色体1，完整的复制子序列（SEQIDNO: 13)。
[0101] 图14显示组成型启动子的核苷酸序列，PP7435_Chr3-0476_selection巴斯德毕 赤酵母CBS7435染色体3,完整的复制子序列（SEQIDN0:14)。
[0102] 图15显示A0X1启动子序列的核苷酸序列（SEQIDNO: 15)。
[0103] 图16显示A0X1启动子ATG起始密码子上游1000bp的基因组序列（SEQID NO:16)〇
[0104] 图17显示用于检验用启动子表达α-半乳糖苷酶（A-gal)的报告质粒。
[0105] 图18 (子图a-c)显示含报告质粒和不同启动子的毕赤酵母克隆中的A-gal表达 的图。
[0106] 说明性实施方案的详述 在本发明一个说明性实施方案中，提供一种分离核酸，其中所述分离核酸的序列包含， 例如，与选自如本文所述的SEQIDN0:1、SEQIDN0:2、SEQIDN0:3、SEQIDN0:4、SEQID NO: 5和SEQIDNO:6的序列具有至少90%、95%或98%同一性，或与其片段具有至少90%、 95%或98%同一性的序列，其中所述核酸包含甲醇-诱导性巴斯德毕赤酵母启动子序列。在 另一个实施方案中，所述分离核酸的序列为选自SEQIDNO: 1、SEQIDN0:2、SEQIDN0:3、 SEQIDN0:4、SEQIDN0:5和SEQIDN0:6的序列，或其片段。在其它实施方案中，提供包 含这些启动子序列的表达载体、宿主细胞和DNA构建体。
[0107] 在另一个实施方案中，提供使用这些启动子序列生产蛋白质的方法。所述方法包 括在培养基中培养含有包含任何上述启动子序列与编码蛋白质的异源编码序列操作性连 接的第一个表达盒的宿主细胞的步骤，其中所述培养在允许该蛋白质表达的条件下进行。 在另一个说明性实施方案中，提供根据该方法生产的分离蛋白质。
[0108] 在本发明一个说明性实施方案中，提供一种分离核酸，其中所述分离核酸的序列 包含例如，与选自如本文所述的SEQIDN0:7、SEQIDN0:8、SEQIDN0:9、SEQIDN0:10、SEQ IDNO: 11、SEQIDNO: 12、SEQIDNO: 13 和SEQIDNO: 14 的序列具有至少 90%、95% 或 98% 同一性，或与其片段具有至少90%、95%或98%同一性的序列，其中所述核酸包含组成型巴斯 德毕赤酵母启动子的序列。在另一个实施方案中，所述分离核酸序列为选自SEQIDN0:7、 SEQIDN0:8、SEQIDN0:9、SEQIDN0:10、SEQIDN0:11、SEQIDN0:12、SEQIDN0:13和 SEQIDN0:14的序列，或其片段。在其它实施方案中，提供包含这些启动子序列的表达载 体、宿主细胞和DNA构建体。上述启动子已经从目前被归类为巴斯德毕赤酵母酵母菌株的 酵母菌株（即，NRRLY11430)中分离出。然而，该分类在某一时刻可能更改为 吻傲{執如，Komagataellaphaffii)。
[0109] 在另一个实施方案中，提供使用任何前段中的启动子序列生产蛋白质的方法。所 述方法包括在培养基中培养含有包含任何前述启动子序列与编码蛋白质的异源编码序列 操作性连接的第一个表达盒的宿主细胞的步骤，其中所述培养在允许该蛋白质表达的条件 下进行。在另一个说明性实施方案中，提供根据该方法生产的分离蛋白质。
[0110] 下列条款清单中描述的所有实施方案均考虑为按照本发明使用。对于下列条款中 所述的所有实施方案，认为实施方案的任何可应用的组合均与本发明一致。下列条款清单 中描述的任何实施方案还考虑为与本申请的发明概述部分或本申请的说明性实施方案的 详述部分所描述的任何实施方案一起使用。
[0111] 1. 一种分离核酸，其中所述分离核酸的序列包含与选自SEQIDN0:1、SEQID N0:2、SEQIDN0:3、SEQIDN0:4、SEQIDN0:5 和SEQIDN0:6 的序列具有至少 90% 同一 性，或与其片段具有至少90%同一性的序列，其中所述分离核酸包含甲醇-诱导性巴斯德毕 赤酵母启动子序列。
[0112] 2.条款1的分离核酸，其中所述分离核酸的序列与选自SEQIDN0:1、SEQID N0:2、SEQIDN0:3、SEQIDN0:4、SEQIDN0:5 和SEQIDN0:6 的序列具有至少 95% 同一 性，或与其片段具有至少95%同一性。
[0113] 3.条款1的分离核酸，其中所述分离核酸的序列与选自SEQIDN0:1、SEQID N0:2、SEQIDN0:3、SEQIDN0:4、SEQIDN0:5 和SEQIDN0:6 的序列具有至少 98% 同一 性，或与其片段具有至少98%同一性。
[0114] 4.条款1的分离核酸序列，其中所述分离核酸的序列为选自SEQIDN0:1、SEQID N0:2、SEQIDN0:3、SEQIDN0:4、SEQIDN0:5 和SEQIDN0:6 的序列，或其片段。
[0115] 5.条款1-4中任一项的分离核酸，与异源编码序列操作性连接。
[0116] 6.条款5的分离核酸，其中所述异源编码序列编码选自毒素、抗体、激素、酶、生 长因子、细胞因子、结构蛋白、免疫原性蛋白和细胞信号传导蛋白的蛋白质。
[0117] 7.条款6的分离核酸，其中所述蛋白质为用于动物饲料的酶。
[0118] 8.条款7的分离核酸，其中所述蛋白质选自植酸酶、甘露聚糖酶、半乳糖苷酶、淀 粉酶、葡聚糖酶、蛋白酶、纤维素酶和木聚糖酶。
[0119] 9.条款8的分离核酸，其中所述蛋白质为植酸酶。
[0120] 10.条款8的分离核酸，其中所述蛋白质为半乳糖苷酶。
[0121] 11.包含条款1-10中任一项的分离核酸的表达载体。
[0122] 12.包含条款11的表达载体的宿主细胞。
[0123] 13.包含条款1-10中任一项的分离核酸的宿主细胞。
[0124] 14.条款12或13中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞为毕赤酵母属物种。
[0125] 15.条款14的宿主细胞，其中所述毕赤酵母属物种为巴斯德毕赤酵母。
[0126] 16.包含条款1-10中任一项的分离核酸的DNA构建体。
[0127] 17.生产蛋白质的方法，所述方法包括步骤 在培养基中培养含有包含条款1-4中任一项的分离核酸与编码蛋白质的异源编码序 列操作性连接的第一个表达盒的宿主细胞，其中所述培养在允许该蛋白质表达的条件下进 行。
[0128] 18.条款17的方法，其中所述蛋白质选自毒素、抗体、激素、酶、生长因子、细胞因 子、结构蛋白、免疫原性蛋白和细胞信号传导蛋白。
[0129] 19.条款18的方法，其中所述蛋白质为用于动物饲料的酶。
[0130] 20.条款19的方法，其中所述蛋白质选自植酸酶、甘露聚糖酶、半乳糖苷酶、淀粉 酶、葡聚糖酶、纤维素酶、蛋白酶和木聚糖酶。
[0131] 21.条款20的方法，其中所述蛋白质为植酸酶。
[0132] 22.条款20的方法，其中所述蛋白质为半乳糖苷酶。
[0133] 23.条款17-22中任一项的方法，其中所述蛋白质使用第一个表达盒与第二个表 达盒组合表达。
[0134] 24.条款23的方法，其中所述第二个表达盒包含编码蛋白质的异源编码序列与 具有包含SEQIDN0:15或SEQIDN0:16的序列或任何其它A0X1或A0X2启动子序列的序 列的分离核酸操作性连接，其中SEQIDN0:15和SEQIDN0:16具有启动子活性。
[0135] 25.条款24的方法，其中所述蛋白质使用第一个表达盒、第二个表达盒和第三个 表达盒表达。
[0136] 26.条款25的方法，其中所述第三个表达盒包含编码蛋白质的异源编码序列与 具有与选自SEQIDN0:1、SEQIDN0:2、SEQIDN0:3、SEQIDN0:4、SEQIDN0:5 和SEQ IDNO: 6的序列具有至少90%同一"性，或与其片段具有至少90%同一"性的序列的分离核酸操 作性连接。
[0137] 27.条款23的方法，其中所述第二个表达盒包含编码蛋白质的异源编码序列与 具有与选自SEQIDN0:1、SEQIDN0:2、SEQIDN0:3、SEQIDN0:4、SEQIDN0:5 和SEQ IDNO: 6的序列具有至少90%同一"性，或与其片段具有至少90%同一"性的序列的分离核酸操 作性连接。
[0138] 28.根据条款17-27中任一项的方法生产的分离蛋白质。
[0139] 29. -种分离核酸，其中所述分离核酸的序列包含与选自SEQIDN0:7、SEQID N0:8、SEQIDN0:9、SEQIDN0:10、SEQIDN0:11、SEQIDN0:12、SEQIDN0:13和SEQID NO: 14的序列具有至少90%同一性，或与其片段具有至少90%同一性的序列，其中所述核酸 包含组成型巴斯德毕赤酵母启动子序列。
[0140] 30.条款29的分离核酸，其中所述分离核酸的序列