一种新的乌苏烷型二萜类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从石见穿的干燥地上部分中分离得到的一种 乌苏烷型二萜类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 石见穿系唇形科鼠尾草属华鼠尾草Salvia chinensis benth的干燥地上部分，亦 名紫参、五凤花、小丹参、月下红、乌沙草、墨面风、大发汗、石大川、山缝拿、紫丹花、红根参、 田芹菜、活血草，广泛分布于江苏、安徽、江西、湖北、湖南、广东、广西、四川、云南等地。其性 凉，味微苦、辛、平，归胃、肝、肺经，有清热解毒、活血理气止痛等功能，民间主治噎嗝、痰喘、 肝炎、赤白带、痈肿、瘰疬等症。历代典籍均对其功效有记载，认为其"主骨痛，大风痈肿" (《本草纲目》），"治瘰疬"（《江苏药材志》），"治噎嗝，痰饮气喘"（《苏州本产药材》），"活血化 瘀、止血、解毒、消肿"（《浙江民间常用草药》），"活血止血，清热解毒"（《安徽中医药》），"治 黄疸型肝炎，湿热带下，痛经，菌痢，外治面神经麻痹，乳腺炎，疖肿，跌打损伤等"（《浙江药 用植物志》）。
[0003] 到目前为止，从石见穿中分离出的化学成分已达30多种，主要包括多糖类、萜类、 甾醇类、多酚类等。
[0004] 石见穿具有抗炎、抗氧化和抗肿瘤等作用。《中药大辞典》、《全国中草药汇编》均记 载了石见穿、糯稻根等合用为方，用于治疗急、慢性肝炎均取得了显著疗效。石见穿作为常 用的"抗癌中药"被广泛应用于临床。石见穿在妇科疾病治疗中也得到了广泛应用，除清热 利湿外，还具有活血化瘀、软坚散结之功效。因其药性平和，不燥不寒，故被广泛应用于因血 热、湿热所致崩漏、月经先期盆腔炎、子宫内膜异位症、子宫肌瘤、卵巢囊肿、痛经等病，疗效 显著。此外，《浙江民间常见草药》记载紫参根9~12g，羊乳块根30g，用于治疗淋巴结结核， 疗效显著。《浙江药用植物学》将本品用于治疗面神经麻痹、乳腺炎、疮肿等。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从石见穿的干燥地上部分中分离得到的一种乌苏烷型 二萜类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I):
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将石见穿的干燥地上部分 粉碎，用80~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用5 %乙醇洗脱6个柱体积，再用75 %乙醇洗脱8个柱 体积，收集75 %洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中75 %乙醇洗脱浓缩 物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1、30:1、15:1和8:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到 4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1、8:1和5:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶 分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液 减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010] 进一步地，步骤(a)中，用85%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011]进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] 药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物(I)和药学上可接受的载体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备治疗急性T淋巴细胞白血病的药物中的应用。
[0014]所述的药物组合物在制备治疗急性T淋巴细胞白血病的药物中的应用。
[0015]本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016]该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017]所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物(I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)计算E⑶和实验E⑶图。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021 ] 主要材料、试剂来源及仪器类型：
[0022]乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限 公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0024] (a)将石见穿的干燥地上部分(8kg)粉碎，用85%乙醇热回流提取(30LX3次），合 并提取液，浓缩至无醇味(6L)，依次用石油醚(6LX3次）、乙酸乙酯(6LX3次)和水饱和的正 丁醇(6LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(375g)和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8大孔树脂除杂，先用5%乙醇洗脱6个柱体积，再用75%乙 醇洗脱8个柱体积，收集75%洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱浓缩物（129g);(c)步骤(b) 中75 %乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1 (8个柱体积）、30:1 (8个柱体 积）、15:1(8个柱体积)和8:1(10个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步 骤(c)中组分4(27g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1(8个柱体积）、8:1(10个 柱体积)和5:1(8个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2 (15g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗 脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I) (40mg)。
[0025] 结构确证：白色结晶（甲醇），熔点326°C;HR-ESMS显示[M+Na]+为m/z399.2120， 结合核磁特征可得分子式为C22H32O5，不饱和度为7。核磁共振氢谱数据5H(ppm，DMS0_d6， 400MHz):H-l(2.41，d)，H-l(2.17，d)，H-3(4.15，s)，H-5(1.23，m)，H-6(1.24，m)，H-6(1.42， m)，H-7(1.53，m)，H-7(1.37，m)，Η-9(2·14，br，s)，H-11(5.71，dd，J=10.2，2·0)，H-12 (6.08，dd，J=10.2,3.0)，H-15(1.30，m)，H-15(l. 19，m)，H-16(2.25，ddd，J=14.2,5.2， 2.2)，H-19(4.64，s)，H-21(1.53，m)，H-21(1.32，m)，H-22(1.55，m)，H-22(1.74，m)，H-23 (0.97，s)，H-24(0.83，s)，H-25(0.95，s)，H-26(0.73，s)，H-27(0.98，s)，H-29(1.01，s)，H-30 (0 · 91，s);核磁共振碳谱数据δ。(ppm，DMS〇-d6，100MHz): 51 · 6 (CH2，1 -C)，210 · 7 (C，2-C)， 82.8(CH，3-C)，45.1(C，4-C)，47.3(CH，5-C)，17.6(CH2,6-C)，32.5(CH2,7-C)，40.4(C，8-C)， 52.4(CH，9-C)，37.8(C，10-C)，129.1(CH，n-C)，122.9(CH，12-C)，134.5(C，13-C)，40.8(C， 14-C)，25.2(CH2，15-C)，23.9(CH2，16-C)，43.7(C，17-C)，132.6(C，18-C)，84.7(CH，19-C)， 35.4(C,20-C), 32.3(CH2,21-C), 34.2(CH2,22-C), 27.8(CH3,23-C), 21.1(CH3,24-0,19.0 (CH3,25-C)，17.1(CH3,26-C)，19.2(CH3,27-C)，177.7(C，28-C)，27.6(CH3,29-C)，22.8(CH3， 30-C);碳原子标记参见图1。红外光谱表明该化合物含有羟基（3358CHT1)和y-内酯羰基 (1778cm-Oc/H-NMR谱数据显示七个甲基信号[δΗ0·73(Μθ-26)，0.83(Me-24)，0· 91 (Me-30)， 0.95(]\^-25)，0.97(]\^-23)，0.98(]\^-27)和1.01(]\^-29)]，两个含氧次甲基信号[5!14.15 (8，!1-3)，4.64(8，!1-19)]和两个烯属质子[3!15.71((1(1，了=10.2,2.0!^，!1-11)和6.08((1(1，了 =10.2，3.OHz，H-l2)]。13CNMR和DEPT谱显示30个共振碳信号，其中包括两个含氧次甲基[δ C82.8(C-3)和84.7(019)]，四个烯属碳[δ122·9(012)，129·l(C-ll)，132.6(C-18)和 134.5(013)]和两个羰基碳[5(：177.7((：-28)和210.7((：-2)]。一个酯羰基信号[5(：177.7((：-28)]和两个碳信号[SC43.7(C-17)和84.7(C-19)]说明该化合物存在一个γ内酯结构。HMBC 谱中出-22与(：-28，!1-19与(：-18，以及16-29与(：-19的相关性验证了28，19-这个官能团的连 接。此外，C-3的化学位移(SC82.8)表明存在一个羟基。上述数据表明该化合物为乌苏烷型 二萜化合物。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和N0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本 确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致（图 2)〇
[0026]实施例2:化合物（I)药理作用试验[0027] 一、材料和仪器
[0028]急性T淋巴细胞白血病Molt4细胞由暨南大学血液病研究所惠赠;慢性粒细胞白血 病细胞K562细胞由暨南大学由生物化学与分子生物学教研室惠赠。化合物（I)为自制，HPLC 归一化纯度大于98%，用DMS0分析纯溶解配制成5.5yg/mL溶液备用。DMEM/F12培养基粉、羟 乙基哌嗪乙磺酸（HEPES)、四苯基氮哇蓝试剂（MTT)购于美国Gibeo公司。新生牛血清 (NewbornCalfSerum)购于中国杭州四季青公司。青霉素（Peni