温速率缓慢降温至26-30°C，搅拌 速度400-600r/m，通风量1:1-3,恒温培养8-10h ;继续以1-2°C /h降温速率缓慢降温至 23-25°C，搅拌速度500-700r/m，通风量1:2-4,培养时间22-31h，然后，将种子罐液体种 子以3%接种量追加接入发酵罐，最后以1-2°C /h升温速率缓慢升温至31-32°C，搅拌速 度200-400r/m，通风量1:1-2,恒温培养10-12h ;接着以1-2°C /h降温速率缓慢降温至 23-25°C，搅拌速度500-700r/m，通风量1:2-4,恒温培养22-31h ;发酵液经过滤、浓缩、调 配、精滤、干燥得固体酸性蛋白酶；
[0020] 所述斜面培养基组成为：葡萄糖20g，琼脂20g，中草药提取物5-10g，干酪素4g， 磷酸氢二钾2g，氯化镁0. 6g，氯化钾0. 8g，蒸馏水1000mL，pH值5. 8,121°C灭菌20min。
[0021] 所述一级、二级、三级种子培养基组成为：麸皮60_80g，玉米粉50_60g，豆饼粉 35-40g，海藻糖10-15g，鱼粉6-10g，氯化铵10-12g，氯化钙5-10g，干酪素 5-10g，中草药提 取物5-10g，硫酸镁2-4g，磷酸氢二钾l-3g，纯净水1000mL，pH值5-7,121°C灭菌20min ;
[0022] 所述种子罐培养基组成为：麸皮60_80g，玉米粉50_60g，豆饼粉35_40g，海藻糖 10-15g，中草药提取物10-15g，鱼粉6-10g，氯化铵10-12g，氯化钙5-10g，干酪素 5-10g，硫 酸镁2-4g，磷酸氢二钾l-3g，纯净水1000mL，pH值5-7,121°C灭菌20min ;
[0023] 所述种子罐发酵液菌体浓度为7. Ox 10s_8. Ox 10s个/ml ;
[0024] 所述发酵罐培养基组成为：麸皮60-80g，玉米粉50-60g，植物提取物40-60g，豆 饼粉35-40g，中草药提取物20-30g，海藻糖10-30g，鱼粉6-10g，氯化铵10-12g，氯化钙 5-10g，干酪素 3-5g，硫酸镁2-4g，磷酸氢二钾l-3g，硝酸钾l-2g，硫酸锌0. 1-0. 2g，纯净水 1000mL，pH 值 5-7,121°C 灭菌 20min ;
[0025] 所述中草药提取物的制备方法如下：
[0026] 按重量份数计，称取黄芪60-70份，当归50-60份，党参40-45份，甘草40-45份，鱼 腥草35-45份，神曲35-45份，柴胡10-15份，黄芩10-15份；将上述中草药粉碎至粒径为2 毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水，控制温度70°C -90°C保持2-4h， 然后降温至45-60°C，加入混合物料总重量5-10%的混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH 值为5. 5-6. 8,酶解2-4h，最后添加混合物料0. 5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙 醇混合的质量比为1:1. 5,控制温度至60°C -78°C保持3-4h，过滤，得第一滤液；添加滤渣 1-3倍重量的水，控制温度85°C -95°C保持l_3h，然后降温至25-35°C，过滤，得第二滤液； 将第一滤液和第二滤液按照质量比2-4:1-3合并，滤液真空浓缩后冷冻干燥、粉碎即得中 草药提取物；
[0027] 所述混合酶为葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比5:3:1:0. 5均匀混 合。
[0028] 所述淀粉酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：
[0029] 60%糖化酶，20%普鲁兰酶，10%真菌α-淀粉酶，5% β-淀粉酶，5%中温α-淀 粉酶；
[0030] 所述半纤维素酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：
[0031] 30%耐温β-葡聚糖复合酶，25% β-葡聚糖复合酶，15%甘露聚糖酶，15%的木 聚糖酶，15 %的戊聚糖酶。
[0032] 所述酯酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：
[0033] 70 %脂肪酶，25 %酸性磷酸酶，5 %磷酸酯酶。
[0034] 所述激活剂是由如下质量组份的无机盐均匀混合而成：
[0035] 氯化锌20-30份，氯化钙10-20份，硫酸钠10-20份，氯化镁5-10份。
[0036] 所述保护剂由以下重量份数的原料组成：
[0037] 灵芝多糖20-30份，海藻糖20-30份，NaCl 10-20份，（NH4) 2S0410-15份，半胱氨酸 10-15 份。
[0038] 所述抗氧化剂为葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏叶提取物中的任一一种或几 种组合；
[0039] 优选地，所述抗氧化剂为葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏叶提取物按质量比 2-4:1-3:1-2均匀混合；
[0040] 所述葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏叶提取物均为市购商品。
[0041] 上述含酸性蛋白酶的白酒酿造复合酶的制备方法，包括如下步骤：
[0042] 首先将所述保护剂、激活剂超微粉碎，随后立即依次加入淀粉酶、蛋白酶、半纤维 素酶、果胶酶、酯酶、植物提取物均匀混合，最后依次加入酯化红曲、生香活性干酵母及抗氧 化剂，混合均匀后密封包装即得白酒酿造复合酶。
[0043] 本发明另一个目的是含酸性蛋白酶的白酒酿造复合酶在白酒酿造中的应用。
[0044] 使用方法：
[0045] 1.复合酶作用条件：适应pH值2-6,最适pH值3. 5-5. 5 ;适应温度30-55°C，最适 反应温度45 °C。
[0046] 2.使用方法：1)使用时与酒曲粉混合均匀施曲发酵，也可在润料过程添加进行 原料预处理；2)将复合酶与45°C水按质量比1:10均匀混合，调整pH值为3. 5-5. 5,活化 30-50min,使用效果最佳。
[0047] 3.使用量：施曲发酵时为原粮干重的0. 05-0. 3% ;原料预处理时为原粮干重的 0· 01-0. 05%〇
[0048] 本发明提供的宇佐美曲霉801-2是由实验室保藏的一株产酸性蛋白酶的宇佐美 曲霉801依次经紫外线复合氯化锂诱变、亚硝基胍诱变、硫酸二乙酯诱变，并对突变株分 离、筛选，最后对优良菌株经发酵性能测试筛选得到产高活力酸性蛋白酶的宇佐美曲霉 801-2。
[0049] 本发明提供的产高活力酸性蛋白酶的菌株具体为宇佐美曲霉（Aspergillus usamil)801-2。该菌株已于2013年11月24日保藏于中国典型培养物保藏中心（简称 CCTCC，地址为：中国.武汉.武汉大学邮编：430072)，保藏号为CCTCC NO :M 2013601，分类 命名为宇佐美曲霉 801_2Aspergillus usamil 801-2。
[0050] 本发明宇佐美曲霉（Aspergillus usamil)801-2(CCTCC NO :M 2013601)具有以下 微生物学特征：
[0051] 1、形态学特征：
[0052] 宇佐美曲霉（Aspergillus usamil)801_2,生物学形态为包括分生孢子、胞梗、顶 囊、产胞结构等几部分。分生孢子头球形至辐射形，直径150-450 μ m，分生孢子梗发生于基 质。胞梗茎1000-3000 (长度）X 12-20 (直径）μ m，黄色或黄褐色，壁平滑；顶囊球形或近 似球形，直径35-50 μ m，表面全面可育；产胞结构双层，梗基15-20 (长度）X 3-4. 0 (直径） μ m，瓶梗6-8 (长度）X 2-4 (直径）μ m，分生孢子球形或近球形，较小，直径3. 5-5. 0 μ m，褐 色，壁粗糙。
[0053] 2、培养学特征：
[0054] 宇佐美曲霉（Aspergillus usamil)801-2菌株在麦芽汁琼脂培养基上生长迅速， 32°C 4天菌落直径82_ ;质地丝绒状或稍带絮状；分生孢子结构大量，褐黑色，有少量渗出 液；菌落反面略带黄色。
[0055] 3、生理生化特征：
[0056] 宇佐美曲霉（Aspergillus usamil)801_2可在马铃薯、玉米粉、可溶性淀粉，糖蜜 等上生长，最适PH值5-6,最适生长温度31-32°C，最适产酶温度23-25°C。
[0057] 本发明菌株宇佐美曲霉（Aspergillus usamil)801_2的筛选技术路线为：出发菌 株一斜面培养一孢子悬液的制备一诱变处理一平板分离一初筛一复筛一再复筛一扩大实 验（发酵性能测定）。
[0058] 按诱变筛选方案，对突变株逐级筛选淘汰，最后对优良菌株经发酵性能测试筛 选，得到一株高产酶性能菌株宇佐美曲霉801-2,发酵72-96小时后酸性蛋白酶酶活可达 14000U/mL，对酶的热稳定性进行了分析，将粗酶液分别置于40°C、45°C、50°C、55°C、60°C、 65°C、70°C下，每隔10分钟取样测定酶活。40°C、45°C、50°C下，60分钟酶活没有下降。55°C 与60°C下，30分钟降到原有酶活的95%，60分钟降到90%。65°C下，30分钟降到原有酶活 的85%，60分钟降到80%。70°C下，30分钟降到原有酶活的80%，60分钟降到原有酶活的 75%。酸性蛋白酶适应反应温度30-55°C，最适反应温度40-50°C，同样条件下达到同样酶 活耐受温度比出发菌平均提高了 8-12 °C，适应pH值范围2-6,最适pH值2. 5-3. 5。
[0059] 有益效果：
[0060] 本发明白酒酿造复合酶在科学复配食品级酶制剂的基础上，特别复配了高活力酸 性蛋白酶、含丰富植物酶及营养物质的植物提取物使复合酶酶系更全；同时又添加了使酶 活力完全释放的激活剂和使酶活性更稳定的保护剂及抗氧化剂，并且还科学复配了可使白 酒香味更足的酯化红曲和生香活性干酵母，可充分、有效水解原粮中的淀粉、蛋白质、脂肪、 纤维素、半纤维素、果胶等，崩解原粮间质细胞壁，释放内容物，获取更多的发酵糖和氨基