一种含酸性蛋白酶的白酒酿造复合酶及其制备方法_4

文档序号:9762797阅读:来源:国知局
草药粉 碎至粒径为2毫米以下,然后于容器中均匀混合并添加5倍重量的水,控制温度80°C保持 3h,然后降温至52 °C,加入混合物料总重量8 %的混合酶制剂进行酶解,用乳酸调节pH值 为6. 2,酶解3h,最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物,乙醇和丙醇混合的质量 比为1:1. 5,控制温度至70°C保持4h,过滤,得第一滤液;添加滤渣2倍重量的水,控制温度 90°C保持2h,然后降温至30°C,过滤,得第二滤液;将第一滤液和第二滤液按照质量比3:2 合并,滤液真空浓缩后冷冻干燥、粉碎即得中草药提取物;
[0089] 所述混合酶为葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比5:3:1:0. 5均匀混 合。
[0090] 酶活力单位定义:lmL粗酶液,于40°C、pH 3. 0条件下,lmin水解酪蛋白产生1 μ g 酪氨酸的酶量为1个酶活力单位,以U/mL表示。
[0091] 实施例2
[0092] -种含酸性蛋白酶的白酒酿造复合酶,由以下重量份数的原料组成:
[0093] 淀粉酶15份,蛋白酶12份,植物提取物12份,半纤维素酶11份,酯化红曲11份, 生香活性干酵母9份,果胶酶7份,酯酶6份,保护剂5份,激活剂5份,抗氧化剂0. 4份;
[0094] 所述蛋白酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成:酸性蛋白酶75%, 中性蛋白酶15%,10%脯氨酸蛋白酶;
[0095] 所述淀粉酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成:60%糖化酶,20% 普鲁兰酶,10%真菌Ct -淀粉酶,5% β -淀粉酶,5%中温α -淀粉酶;
[0096] 所述半纤维素酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成:30%耐温 β -葡聚糖复合酶,25% β -葡聚糖复合酶,15%甘露聚糖酶,15%的木聚糖酶,15%的戊聚 糖酶;
[0097] 所述酯酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成:70%脂肪酶,25%酸 性磷酸酶,5 %磷酸酯酶;
[0098] 所述激活剂是由如下质量组份的无机盐均匀混合而成:氯化锌25份,氯化钙15 份,硫酸钠15份,氯化镁8份;
[0099] 所述保护剂由以下重量份数的原料组成:灵芝多糖25份,海藻糖25份,NaCl 15 份,(NH4) 2S0412份,半胱氨酸12份;
[0100] 所述抗氧化剂为葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏叶提取物按质量比3:2:1. 5 均匀混合;
[0101] 所述植物提取物、酸性蛋白酶均为实施例1制备;
[0102] 上述含酸性蛋白酶的白酒酿造复合酶的制备方法:
[0103] 首先将保护剂、激活剂超微粉碎,随后立即依次加入淀粉酶、蛋白酶、半纤维素酶、 果胶酶、酯酶、植物提取物均匀混合,最后依次加入酯化红曲、生香活性干酵母及抗氧化剂, 混合均匀后密封包装即得白酒酿造复合酶。
[0104] 实施例3
[0105] -种含酸性蛋白酶的白酒酿造复合酶,由以下重量份数的原料组成:
[0106] 淀粉酶10份,蛋白酶10份,植物提取物10份,半纤维素酶10份,酯化红曲10份, 生香活性干酵母8份,果胶酶5份,酯酶5份,保护剂4份,激活剂4份,抗氧化剂0. 2份;
[0107] 所述激活剂是由如下质量组份的无机盐均匀混合而成:氯化锌20份,氯化钙10 份,硫酸钠10份,氯化镁5份;
[0108] 所述保护剂由以下重量份数的原料组成:灵芝多糖20份,海藻糖20份,NaCl 10 份,(NH4) 2S0410份,半胱氨酸10份;
[0109] 所述抗氧化剂为葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏叶提取物按质量比2:1:1均 匀混合;
[0110] 所述蛋白酶、淀粉酶、半纤维素酶、酯酶质量百分比组成同实施例2 ;
[0111] 所述植物提取物、酸性蛋白酶均为实施例1制备;
[0112] 含酸性蛋白酶的白酒酿造复合酶的制备方法同实施例2。
[0113] 实施例4
[0114] -种含酸性蛋白酶的白酒酿造复合酶,由以下重量份数的原料组成:
[0115] 淀粉酶20份,蛋白酶15份,植物提取物15份,半纤维素酶12份,酯化红曲12份, 生香活性干酵母10份,果胶酶8份,酯酶8份,保护剂6份,激活剂6份,抗氧化剂0. 5份;
[0116] 所述激活剂是由如下质量组份的无机盐均匀混合而成:氯化锌30份,氯化钙20 份,硫酸钠20份,氯化镁10份;
[0117] 所述保护剂由以下重量份数的原料组成:灵芝多糖30份,海藻糖30份,NaCl 20 份,(NH4) 2S0415份,半胱氨酸15份;
[0118] 所述抗氧化剂为葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏叶提取物按质量比4:3:2均 匀混合;
[0119] 所述蛋白酶、淀粉酶、半纤维素酶、酯酶质量百分比组成同实施例2 ;
[0120] 所述植物提取物、酸性蛋白酶均为实施例1制备;
[0121] 含酸性蛋白酶的白酒酿造复合酶的制备方法同实施例2。
[0122] 实施例5
[0123] -种含酸性蛋白酶的白酒酿造复合酶,由以下重量份数的原料组成:
[0124] 淀粉酶15份,蛋白酶12份,植物提取物12份,半纤维素酶11份,酯化红曲11份, 生香活性干酵母9份,果胶酶7份,酯酶6份,保护剂5份,激活剂5份,葡萄籽原花青素0. 4 份;
[0125] 所述激活剂是由如下质量组份的无机盐均匀混合而成:氯化锌20份,氯化钙10 份,硫酸钠10份,氯化镁5份;
[0126] 所述保护剂由以下重量份数的原料组成:灵芝多糖20份,海藻糖20份,NaCl 10 份,(NH4) 2S0410份,半胱氨酸10份;
[0127] 所述蛋白酶、淀粉酶、半纤维素酶、酯酶质量百分比组成同实施例2 ;
[0128] 所述植物提取物、酸性蛋白酶均为实施例1制备;
[0129] 含酸性蛋白酶的白酒酿造复合酶的制备方法同实施例2。
[0130] 实施例6酸性蛋白酶的热稳定性分析
[0131] 将实施例1酸性蛋白酶发酵粗酶液分别置于40°C、45°C、5(TC、55°C、6(rC、65°C、 70°C下,每隔10分钟取样测定酶活。40°C、45°C、50°C下,60分钟酶活没有下降。55°C与60°C 下,30分钟降到原有酶活的95%,60分钟降到90%。65 °C下,30分钟降到原有酶活的85%, 60分钟降到80%。70°C下,30分钟降到原有酶活的80%,60分钟降到原有酶活的75%。说 明酸性蛋白酶热稳定性较强。
[0132] 实施例7酸性蛋白酶的pH稳定性分析
[0133] 将实施例1酸性蛋白酶发酵粗酶液分别置于pH值2. 0、2. 5、3. 5、4. 5、5. 5、6. 0下, 每隔10分钟取样测定酶活。粗酶液pH值2. 0、2. 5、3. 5下,60分钟酶活没有下降。pH值4. 5 下,30分钟降到原有酶活的95%,60分钟降到90%。pH值5. 5下,30分钟降到原有酶活的 90%,60分钟降到85%。pH值6. 0下,30分钟降到原有酶活的85%,60分钟降到80%,说 明酸性蛋白酶耐pH范围较宽泛。
[0134] 实施例8植物提取物对酸性蛋白酶酶活力的影响
[0135] 采用本发明实施例1中酸性蛋白酶的制备方法,其它工艺条件、工艺参数、培养基 等发酵条件完全相同,唯一区别是发酵培养基不加植物提取物,形成对比例,发酵完毕,采 用同一检测方法测定发酵液酸性蛋白酶活力,检测结果如表1 :
[0136] 表1发酵液酸性蛋白酶活力
[0137]
[0138] 以上结果表明:本发明制备的植物提取物含有较高的酸性蛋白酶活力,发酵培养 基中添加植物提取物,发酵液酸性蛋白酶活力可从14000U/mL提高至22000U/mL,酸性蛋白 酶酶活力提高42. 86%,同时也表明:本发明白酒酿造复合酶中科学复配植物提取物,可提 供丰富、全面的植物酶系。
[0139] 实施例9抗氧化剂对白酒酿造复合酶酶活力的影响
[0140] 采用本发明实施例2制备的含酸性蛋白酶的白酒酿造复合酶,其它原料、原料 组分、制备方法完全相同,唯一区别是原料组分不含抗氧化剂,形成对比例,分别于〇°c和 40°C条件下储存12个月,采用《GB8726-2006食品添加剂糖化酶制剂》中检测方法测定糖化 酶的酶活力,计算酶活损失率,酶活损失率是指实际检测的酶活力与产品标注酶活力的差 值占标注酶活力的百分率,结果如表2
[0141] 表2储存期复合酶中糖化酶酶活力损失率
[0142]
[0143] 以上结果表明,在0°C和40°C条件下储存12个月,实施例2中的糖化酶比对比例 中的糖化酶酶活损失分别降低7. 41%和60%,说明抗氧化剂的科学复配,显著提高了复合 酶中各组分酶的活力,酶活损失大幅降低,尤其在高温条件下效果更加显著。
[0144] 实施例10复合酶对酿造白酒产量和质量的影响
[0145] 一、试验地点:湖南某一白酒厂酿造车间。
[0146] 二、试验时间:2013年12月8日-2014年6月8日,历时180天。
[0147] 三、试验方案设计:1.试验为单因子设计,设置试验组和对照组,对照组和试验组 的原料、工艺、设备、操作人员、环境及管理方式均相同,区别是:试验组在施曲过程添加本 发明实施例2-5制备的白酒酿造复合酶,对照组不添加。2.按原料干重0.05-0.3%准确称 取本发明实施例(2-5)制备的白酒酿造复合酶,将其与45°C水按质量比1:10均匀混合,调 整pH值为4,活化40min,均匀喷涂至酒曲粉表面,搅拌均匀后施曲发酵。3.对不同类型的 酿造白酒的基酒产量和成品白酒中香味成分进行检测。4.试验组和对照组中每种复合酶 (实施例2-5)各投料10批次,计算平均值。
[0148] 四、检测结果
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