用于治疗胰腺癌的生物碱化合物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物技术领域，具体涉及从牛蒡的干燥成熟果实中分离得到的一种生 物碱类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 牛蒡(Arctium IappaL.)又名白肌人参、蒡翁菜，属菊科牛蒡属二年生草本植物， 其果实牛蒡子被历版中国药典收载，为常用中药。牛蒡子性寒、味辛苦、归肺胃二经。具有疏 散风热、祛痰止咳、解毒透疹、利咽消肿等功效。牛蒡营养丰富，富含菊糖、纤维素、蛋白质、 钙、磷、铁等矿物质和多种维生素，具有很强的保健功能。另外牛蒡根、茎、叶均可入药。
[0003] 牛蒡子的化学成分有木脂素类、黄酮类、挥发油类、脂肪酸类、生物碱类、酚羟基化 合物等。牛蒡根除含有丰富的蛋白质、低聚糖等营养成份外，还含牛蒡酸、醛类、多炔类及挥 发油等多种小分子活性成份。牛蒡叶中含有挥发油、鞣质、粘液质、咖啡酸、绿原酸、异绿原 酸等物质。
[0004] 现代药理学研究表明其有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗病毒、抗菌、提高免疫 力和降血脂等作用，对糖尿病也有一定的治疗作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从牛蒡的干燥成熟果实中分离得到的一种生物碱类化 合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I):
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将牛蒡的干燥成熟果实粉 碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a) 中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个 柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓 缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1、50:1、25:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1、10:1 和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010] 进一步地，步骤(a)中，用75%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为DlOl型大孔吸附树脂。
[0012] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载 体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物(I)结构式；
[0019] 图2为化合物⑴计算ECD和实验ECD图。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021] 主要材料、试剂来源及仪器类型：
[0022]乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限 公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0024] (a)牛蒡的干燥成熟果实（IOkg)粉碎，用75%乙醇热回流提取(30LX3次），合并提 取液，浓缩至无醇味(6L)，依次用石油醚(6L X 3次）、乙酸乙酯(6L X 3次)和水饱和的正丁醇 (6LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(381g)和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中乙酸乙酯萃取物用DlOl大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇 洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物（131g); (c)步骤(b)中 70 %乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1 (8个柱体积）、50 :1 (8个柱体 积）、25:1 (8个柱体积）、10:1 (10个柱体积)和1:1 (8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得 到5个组分；（d)步骤(c)中组分4(27g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1(8个柱 体积）、10:1(8个柱体积)和5:1(6个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步 骤(d)中组分2(18g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇 水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I) (230mg)〇
[0025] 结构确证:浅黄色油状物;HR-ESMS显示[M+Na]+为m/z 363.1718，结合核磁特征 可得分子式为C2qH24N2O3，不饱和度为10。核磁共振氢谱数据δ Η(ppm，DMS〇-d6，400MHz):H-3 (3.86，m)，H-5(2.78，m)，H-5(3.01，m)，H-6(1.77，dd，J=13,7)，H-6(2.85，m)，H-9(7.11，d， J = 7.5)，H-10(6.82，t，J = 7.5)，H-ll(7.06，td，J = 7.5，l)，H-12(6.74，d，J = 7.5)，H-14 (1.29，m)，H-14(1.95，dt，J=13,3)，H-15(2.03，m)，H-16(2.78，m)，H-18(1.27，d，J = 6)，H-19(3.52，m)，H-20(1.75，m)，H-21(2.21，t，J=12)，H-21(3.15，dd，J=12,4.5)，16-C〇2Me (3 · 71，s);核磁共振碳谱数据δ。(ppm，DMSO-Cl6，I OOMHz ):171.4(C，2-C)，60.3(CH，3-C)，53.2 (CH2,5-C)，42.5(CH2,6-C)，56.1(C，7-C)，134.8(C，8-C)，119.4(CH，9-C)，120.9(CH，10-C)， 127.3(CH，n-C)，109.4(CH，12-C)，143.7(C，13-C)，31.6(CH2，14-C)，29.7(CH，15-C)，42.8 (CH，16-C)，21.7(CH 3，18-C)，69.3(CH，19-C)，44.6(CH，20-C)，46.9(CH2,21-C)，168.3(C， 16<0 21^)，51.1((：!13，16-〇)216);碳原子标记参见图1。11?光谱表明该化合物含有羟基 (3358cm-〇和酯羰基（1725cm-〇基团。 1H NMR谱显示四个芳族共振信号(δΗ6·74,6·82,7.06， 7 · 11)，一个甲基酯基（δΗ3 · 71)，以及一个CH3CHOH侧链(δΗΙ · 27，3 · 52) ,3C NMR谱显示了20 个共振碳信号，包括两个甲基，四个亚甲基，九个次甲基，三个季碳，以及与吲哚氮相连的两 个叔碳(C-2和C-13)。四个芳香族次甲基共振碳为吲哚部分的芳族碳(C-9，C-10，C-11，C- 12)，烯属季碳信号δ(：171.4归属于C-2。酯羰基碳的信号为δ(：168.3,侧链CH3CHOH的含氧次 甲基的信号为6〇69.30!13.52)。(：〇5￥谱显示该化合物存在叱!12(：!1(〇1〇!1〇13)〇1〇12〇1和 NCH2CH2 部分结构，后者对应于 C-5-C-6,前者对应 C-21-C-20-(C-19-C-18)-C-15-C-14-C-3。 综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物 如图1所示，立体构型进一步通过E⑶试验确定，理论值与实验值基本一致(图2)。
[0026]实施例2:化合物(I)药理作用试验 [0027] 一、材料和仪器
[0028]人胰腺癌MiaPaCa-2细胞由天津医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所惠赠。化合物 (I)自制，HPLC归一化纯度大于98% ABS、胰蛋白酶-EDTA消化液购于美国Hyclone公司。PBS 粉购于天津润泰科技发展有限公司。DMEM低糖培养液购于美国Gibco公司。MTT购于美国 Sigam公司。DMSO购于北京化工厂。注射用青霉素钠购于哈药集团制药总厂。注射