[M+化]+ :332.3。
[0082] *N-(1-(1,1,1,3,5,5,5-heptamethyltrisiloxan-3-yl)-3-hydroxybutan-2-y I) -4-( (4-(morpho I inomethy I) pheny I) ethyny I) benzamide (19)的制备
[0083] 将154mg化合物18和160mg化合物9溶于2mL的DMF中加入380mg的HATU和216化的 DIEA，室溫反应化。加入20mL乙酸乙醋，依次用饱和碳酸氨钢、饱和氯化锭和饱和食盐水各 20mL洗涂，有机相用无水硫酸钢干燥浓缩。柱层析得产物261mg，收率为72.4% dESI-MS : [M+ 扣+:613.4。
[0084] *N-(l-(dihydroxy(methyl)silyl)-3-hydroxybutan-2-yl)-4-((4-(morphoIinom ethyl)phenyl)ethynyl)benzamide(20)的制备
[0085] 将6Omg的化合物19溶于2mI四氨巧喃中，加入0.4mL水和I Omg氨氧化钢，室溫揽拌 30分钟。6解^酸调节抑值为2-3，有固体析出抽滤得化合物1128111邑。651-15:曲+扣+ :469.3。
[0086] 《实施例4》含=氣乙酷基代表化合物23的制备
[0087] 化合物23的制备路线见图5,具体操作如W下所述。
[0088] * (5R)-5-methy；L-4-( 2,2,Iuoroacety Doxazol idin-2-〇ne( 21)的制备
[0089] 将200mg化合物I溶于4mL无水THF中，冷却到-78°C。加入LDA(0.75mL，2M)揽拌10分 钟后，室溫揽拌45分钟。将反应瓶重新冷却至-78°C，加入S氣乙酸乙醋（357mg)并揽拌2小 时。加入50mL乙酸乙醋，依次用饱和碳酸氨钢、饱和氯化锭和饱和食盐水各20mL洗涂，有机 相用无水硫酸钢干燥浓缩。柱层析（石油酸/乙酸乙醋= 10:1)，得产物199mg，收率为 80.2%〇ESI-MS：[M+H]":198.1〇
[0090] *(4R)-3-amin〇-l, 1, l-trif luoro-A-hydro巧pentan-2-〇ne(22)的制备
[0091] 将化合物21 (133mg)溶于2mg四氨巧喃，加入0.8mL水和54mg的KOH室溫揽拌化。蒸 除溶剂，柱层析（二氯甲烧/甲醇= 80:1)得产物589mg，收率为77.7%DESI-MS:[M+Hr: 192.1，[M+Na]+:214.1。
[0092] *4-((4-(morpholinomethy1)phenyl)ethyny1)-N-(1, I ,1-trifluor〇-4-hy 化 ox;y-2-〇xopentan-3-yl)benzamide(23)的制备
[0093] 将45mg化合物22和160mg化合物9溶于2mL的DMF中，加入380mg的HATU和216化的 DIEA，室溫反应化。加入20mL乙酸乙醋，依次用饱和碳酸氨钢、饱和氯化锭和饱和食盐水各 20mL洗涂，有机相用无水硫酸钢干燥浓缩。柱层析得产物ISlmg，收率为76.2 % dESI-MS : [M+ H] +: 475.3，[M+化]+ :497.3。
[0094]《实施例5》化合物11、15、20、23对革兰氏阴性菌的最低抑制浓度齡贿]测定 [00M]通过抑菌实验证明化合物11、15、20、23对于大肠杆菌、绿假单胞菌、鲍氏不动杆 菌、克氏肺炎菌和阴沟杆菌等革兰氏阴性菌都具有较好的抑菌活性，其最低抑制浓度MIC在 O. 1-4.0微克/毫升范围内（具体见表1)，活性和阳性对照CHIR-090相当。阳性对照CHIR-090 是按照文献(N.H.AndersonJ.Bowan,A.Erwin,e化 1. ,W02004/062601)方法制备的。
[0096] 表1.化合物11、15、20、23对革兰氏阴性菌的最低抑制浓度(11〇
[0097]
[0098] MIC值具体测试方法是：
[0099] 将新鲜的细菌过夜培养物再悬浮于无菌盐水中，调节浊度为0.5麦氏单位，随后用 阳离子调节的Muel Ier-化nton肉汤稀释200倍，得到每毫升SxlO5个菌落形成单位的最终接 种物。用100%的二甲基亚讽(DMSO)制备化合物的两倍系列稀释液，最高浓度是最低浓度的 100倍;将所得到的化合物稀释系列用10倍无菌水再稀释，得到含DMS010%的待测化合物溶 液。将90化的接种液和10化的待测化合物溶液加入到微量滴定孔中，37°C解育20小时。随后 用微量滴定板读数器在600nM检测，并结合视检确定最低抑制浓度MIC。
[0100] 实验所用菌种均通过北京中原公司购自美国ATCC生物制品中屯、。
[0101] 实施例6化合物11、15、20、23对LpxC酶抑制的ICso
[0102] 酶抑制试验表明化合物11、15、20、2 3在1-1 OOnM能够对E. COli LpxC和 P. aeruginosa LpxC酶的催化活性产生强烈的抑制作用，其IC日日见表2。
[0103] 表2化合物11、15、20、23对LpxC酶酶抑制作用
[0104]
[01化]IC日日的具体测试方法是：
[0106] 按照文献（Hyland S A,Eveland S S,Anderson M S Journal of bacteriology, 1997,179(6): 2029-2037)的方法转染表达并纯化E. COIiLpxC和P.aeruginosa LpxC酶。利 用P.aeruginosa LpxC酶将UDP-3-〇-(R-3-hydroxyacyl)-N_acetylglucosamine(购自 SigmaAl化ich Co.Ltd)水解为UDP-3-〇-(R-3-hy化oxyac}^)-glucosamine，并绘制成含量 标准曲线备用。
[0107] 测试过程：
[〇1〇引 向每孔包含50mM PH7.5的憐酸钢缓冲液和0.005%Trition X-IOO的总体积为50y L的36孔板中，加入不同浓度的待测化合物的DMSO溶液和等体积的LpxC酶，使待测化合物终 浓度为1碰、5〇1、10碰、25碰，酶终浓度为1碰，然后加入终浓度为2咖的底物师?-3-0-(1?-3-hy化oxya巧l)-N-acetylglucosamine，反应20min后向每孔中加入20%的醋酸中止反应。将 反应混合物离屯、，用液质联用分析得到产物的峰面积，通过标准曲线计算得出产物的含量。 将不加抑制剂(待测化合物)时的抑制率指定为〇%，反应开始前用醋酸中止反应的抑制率 定为100%。将测得的酶催化产物含量转化为百分抑制率，计算得到ICso值。
【主权项】
1. 一类新型锌离子螯合基团化合物，其结构如式1所示：其中： Ri为磷酸基、硼酸基、硅酸基和三氟乙酰基； R2为少于4个碳原子的烷基，少于4个碳原子的羟烷基； Χ = ΝΗ,0； Y=羰基，亚甲基； Α为炔基，^炔基； B为6个碳原子以下(含6个碳原子)的饱和、不饱和的烷烃，氢原子； 以上Ri、R2、X、A、B之间可以任意组合。2. 制备权利要求1所述化合物的方法，其步骤是，将式II和式III所示化合物通过缩合 反应得到，其中：1?1、办、乂、￥^、8的定义同权利要求1，且1?1、1?2、乂、￥^、8之间可以任意组合。3. 权利要求2所述的方法，其特征是，所使用的缩合剂为HATU、HBTU、EDC、DCC、DIC、 PyBOP和PyAOP;所使用的碱为TEA、DIEA和DMAP。4. 权利要求2所述的方法，其中式II所示化合物是通过金属催化的的偶联反应制得;式 III所示化合物是通过还原、溴代、消除和加成等反应制得。5. 权利要求1所述化合物在制备LpxC抑制剂和抗革兰氏阴性菌感染药物中的应用。6. 以权利要求1所述化合物为有效成分与药学上可接受的一种或多种载体组成的组合 物。7. 权利要求6所述组合物在制备LpxC抑制剂和抗革兰氏阴性菌感染药物中的应用。8. 权利要求5、7所述的应用，其抗革兰氏阴性菌的药物包括但不限于抗绿假单胞菌、耐 碳青霉烯类肠杆菌科细菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌的药物。
【专利摘要】本发明涉及含有新型锌离子螯合基团的化合物及其制备方法和在制备抗革兰氏阴性菌感染药物中的应用；试验研究表明，所述锌离子螯合基团化合物及其组合物有望用于制备抗革兰氏阴性敏感菌和耐药菌感染药物。
【IPC分类】A61K31/5375, A61K31/675, A61K31/69, C07F9/6533, C07D295/155, A61P31/04, C07F7/08, C07F5/02, A61K31/695
【公开号】CN105669750
【申请号】CN201610115005
【发明人】王玉成, 张国宁, 王菊仙, 李强, 白晓光, 游雪甫, 李子强, 周磊, 朱梅, 任金凤, 赵越
【申请人】中国医学科学院医药生物技术研究所
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年3月1日