具有肠内腐败物质的减少作用的双歧杆菌的制作方法_2

文档序号:9904722阅读:来源:国知局
体)给予至活体内,也认 为在到达肠内之前其大部分有可能死亡、或在到达肠内之后其有可能不能稳定维持(保 持)。因此,本申请发明中,在将微生物给予至活体内后,期待有助于其存活性、稳定性等的 提高而试着将低聚果糖(F0S)添加至饲料中时,可确认到血清中的硫酸吗I噪酪的减少效果。
[0026] 另外,动物实验中通常所使用的小鼠是幼龄的健康个体,因而活体内的腐败物质 会被抑制到极少量,多数情况会低于检测限。因此,本申请发明中,在使用小鼠的动物实验 中,将在活体内作为吗I噪前体的色氨酸化-色氨酸)添加至饲料(粉饲料)中,W尝试提高在 活体内生成的吗I噪的基线时,对于吗I噪的基线,确认到了显著性上升。即,变得可W稳定作 为腐败物质的指标(标志物)的血清中的硫酸吗I噪酪的浓度而确切地进行评价。并且,对于 特定的菌株,变得能够W与对照组比较的显著性差异的形式来评价、确认腐败物质的减少 效果。
[0027] 更具体地,可W将低聚果糖(F0S)和/或低聚半乳糖(GOS)W及色氨酸α-色氨酸) W规定的浓度添加至饲料(粉饲料)中来喂养通常的小鼠(动物实验用),评价血清中的硫酸 吗I噪酪的浓度。此时,作为低聚果糖(F0S)和/或低聚半乳糖化0S)的总量的浓度,设定为0.5 ~20(w/v)%,优选设定为0.5~15(w/v)%,更优选设定为0.5~10(w/v)%。应予说明,具体的 实验结果省略,但作为低聚果糖(F0S)的浓度设定为0.5(w/v)%时,作为粪便中的活菌数,确 认到了B. breve 0LB6129的存活性显著提高。另外,作为色氨酸的浓度,设定为1~4(w/ V)%,优选设定为1.5~3.5(w/v)%,更优选设定为2~3(w/v)%。由此,可W在体内挑选和/或 评价、或确认使血清中的硫酸吗I噪酪的产生降低的微生物(乳酸菌、双歧杆菌等),特别是双 歧杆菌(双歧杆菌属的微生物)。
[00%] 3.使肠内腐败物质减少的微生物 作为使肠内腐败物质减少的微生物,为了挑选能够有效减少腐败物质的微生物(菌 株),本申请发明人W通常在人的活体内(肠内)占优势的乳酸菌、双歧杆菌、特别是双歧杆 菌为对象进行了研究。并且,作为双歧杆菌,对于B. breve的32菌株、B. longum的92菌株、 B. adolescentis的72菌株的总计196菌株实施筛选,在体外进行了评价。作为其结果,?兆选 出了Β. breve的6菌株与Β. long皿的3菌株的总计9菌株。
[0029] 进而,为了验证在活体内减少腐败物质的作用、效果,对上述挑选的9菌株实施动 物实验,在体内进行了评价。作为其结果,挑选出了发挥肠内的吗I噪的减少效果的菌株。
[0030] 应予说明,筛选得到的短双歧杆菌0LB6129(B. breve化B6129)在2010年5月26 日保藏于独立行政法人产业技术综合研究所特许生物寄托中屯、(联系地址:邮编305- 8566日本国茨城县〇<巧市东1-1-1 〇<巧中屯、中央第6),本微生物W保藏编号FERM BP- 11257进行保藏。
[0031] 4.含有减少肠内腐败物质的微生物的食品或药品 4-1.含有减少肠内腐败物质的微生物的食品 本申请发明的减少肠内腐败物质的微生物(乳酸菌、双歧杆菌等,优选为B. breve 化B6129)可W添加至食品中。即,作为本申请发明的食品,可举出添加有减少肠内腐败物质 的微生物的任意食品,优选可W举出添加有减少肠内腐败物质的微生物的发酵乳制品或发 酵乳饮料,进一步优选可举出添加有减少肠内腐败物质的微生物(B. breve 0LB6129XW 及低聚果糖(FOS)和/或低聚半乳糖(GOS)的发酵乳制品或发酵乳饮料。应予说明,已知GOS 可 W与FOS相同地进行利用化ttp: //www. nyusankin. or.化/scientif ic/hosono_3. html)。 另外,对于低聚果糖(FOS)和/或低聚半乳糖(GOS)的添加量,W总量的浓度计,可W设定为 0.5~20(w/v)%,优选设定为0.5~15(w/v)%,更优选设定为0.5~10(w/v)%。
[0032] 另外,含有本申请发明的减少肠内腐败物质的微生物(乳酸菌、双歧杆菌等,优选 为B. breve 0LB6129)的食品可W作为肾脏透析患者用的用于预防或改善透析合并症的健 康保健食品(功能性食品)适用。
[0033] 4-2. 含有本申请发明的减少肠内腐败物质的微生物(乳酸菌、双歧杆菌等,优选为B. breve 化B6129)的药品可W作为肠内腐败物质的减少剂、或肾脏透析患者用的透析合并症的预防 剂或改善剂适用。进而,本申请发明的药品还可作为腹涨的改善剂适用。
[0034] 本申请发明的药品可W制为散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、溶液剂等适宜的剂型。本 申请发明的药品中可W含有低聚果糖(F0S)和/或低聚半乳糖(G0S)。应予说明,W总量的浓 度计,低聚果糖(F0S)和/或低聚半乳糖(G0S)的含量可W设定为0.5~20(w/v)%,优选设定 为0.5~15(w/v)%,更优选设定为0.5~10(w/v)%。制剂化中,可W添加赋形剂、粘合剂、崩解 剂、润滑剂等为了制剂化而常用的辅助剂。作为赋形剂,例如有淀粉、乳糖、白糖、甲基纤维 素、簇甲基纤维素、藻酸钢、憐酸氨巧、合成娃酸侣、微晶纤维素、聚乙締基化咯烧酬(PVP)、 径丙基淀粉化PS)等。另外,作为粘合剂,例如有淀粉、微晶纤维素、簇甲基纤维素钢、聚乙締 基化咯烧酬(PVP)、阿拉伯树胶粉末、明胶、葡萄糖、白糖等的水溶液、或它们的水·乙醇溶液 等。并且,作为崩解剂,例如有淀粉、簇甲基纤维素、簇甲基纤维素巧、微晶纤维素、径丙基淀 粉、憐酸巧等。进而,作为润滑剂,例如有己西栋桐蜡、轻质无水娃酸、合成娃酸侣、天然娃酸 侣、合成娃酸儀、氨化油、氨化植物油衍生物(Sterotex丽)、芝麻油、蜂蜡、氧化铁、干燥氨 氧化侣·凝胶硬脂酸、硬脂酸巧、硬脂酸儀、滑石、憐酸氨巧、和十二烷基硫酸钢等。
[0035] 本申请发明的药品理想的是口服给予,对于双歧杆菌,由于安全性得到确定,因而 可W给予任意的量,例如,其给予量可W设为每1天给予双歧杆菌10亿个~5000亿个,优选 为100亿个~5000亿个。 实施例
[0036] [参考例1]具有腐败物质的减少作用的微生物的挑选方法"体外试验"的条件设定 首先,对于反应溶液的组成,W双歧杆菌基本不增殖、发挥吗I噪(肠内腐败物质的指标) 的减少效果、并可明确地评价该效果的方式来决定反应溶液的组成。
[0037] 本次实验中使用的反应溶液中,例如,将葡萄糖设定为1.0(w/v)%时,双歧杆菌会 过量增殖,不能充分再现肠内的环境。即,由于双歧杆菌等微生物(菌体)在肠内基本不增 殖,因而为了在接近肠内环境的状态下评价双歧杆菌等实现的腐败物质的减少效果,应当 设定双歧杆菌基本不增殖的条件,W再现上述环境。因此,将葡萄糖设定为例如0.7(w/v)% W下,优选设定为0.6( w/v)% W下,更优选设定为0.55( w/v)% W下。
[0038] 另外,对于本次实验中使用的反应溶液,应当设定双歧杆菌基本不增殖而提供腐 败物质的减少所需的最低限能量的条件,因而认为原来将培养基成分作为底物配合是不合 适的。
[0039] 另一方面,对于本次实验中使用的反应溶液,例如,将葡萄糖设定为0.1(w/v)%时, 双歧杆菌的活动(活性)降低,难W发挥吗I噪的减少效果。运样,虽然原本双歧杆菌的每个菌 种对吗I噪的减少效果等变现出差异,但该差异变得难W体现,难W明确地评价其效果。因 此,将葡萄糖设定为,例如,〇.3(w/v)%W上,优选0.4(w/v)%W上,更优选0.45(w/v)%W上。 另外,对于其它成分也相同地决定反应溶液的组成。
[0040] 作为反应溶液的组成,可W按照苯酪·对甲酪·吗I噪·粪臭素各20 yg、Bis-Tris 〇.謹、硫酸儀(]\%5〇4)0.751111、葡萄糖0.5(*八)%来使用,9出%6.5左右。
[0041] [实施例1]具有腐败物质的减少作用的微生物的挑选"体外试验" 对于B. breve的34菌株、B. longum的93菌株、B. adolescentis的72菌株的总计199菌 株,进行静置培养时,B. breve的2菌株、B. longum的1菌株中,生长极其迟缓。因此,W上述 3菌株作为实验对象,最终对于B. breve的32菌株、B. longum的92菌株、B. adolescentis 的72菌株的合计196菌株进行了筛选(评价·挑选)。
[0042] 将上述菌株(活菌)各1 mg混悬于参考例1中决定的反应溶液(pH:6.5、苯酪·对甲 酪·吗I噪·粪臭素:各20yg、Bis-Tris: 0.1M、硫酸儀(MgS〇4) :0.75mM、葡萄糖:0.5(w/v)%)2ml 中。并且,将该悬浊液(反应溶液)在37°C静置24h进行反应后,离屯、分离,除去双歧杆菌(菌 体),将其上清的抑调整至7。
[0043] 接着,将该上清用二乙酸分2次提取,将该提取液补足至5ml后,通过气象色谱法 化C)对该溶液测定(检测)吗隙、苯酪、对甲酪、粪臭素的浓度。
[0044] 应予说明,气象色谱法(GC)的分析条件如下所述。即,装备有火焰离子化探测器的 检测器:GC-2014 (Shimadzu),柱(尺寸):TC-1 (GL Sciences Inc.),1.0.=0.25 mm, L =30 m, dF=0.25 mm、柱溫:60-170°C (W5°C/min升高),170-250°C (W20°C/min升高)、 载气:氮、流速:71.3 ml/min、注射器溫度:240°C、检测器溫度:250°C、注射体积:1 μ 1〇
[0045] 该结果示于
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