表1(Β. breve的32菌株）、表2(Β. longum的92菌株）、表3(Β. adolescent is 的72 菌株）。
[0046] 应予说明，整理编号W"JCM"开始的菌株保藏于下述的保藏机构。
[0047] 保藏机构名：独立行政法人理化学研究所八斗才Uッ一 乂电シ夕一微生物材料开 发室(联系地址:邮编351-0198日本国埼玉县和光市広沢2-1、电话号码048-467-9560)。
[004引[表1]
[0049][表 2]
....................................................................................... ι,、、、%?>V%VS、>、、、、、、、、、、、、一
[0化0][表3]
[0051] 上述结果中，对相对于微生物(菌体）lg的吗I噪的减少浓度为13mg/g-细胞W上的 菌株进行了挑选，结果符合的是B. breve的6菌株、与B. longum的3菌株的总计9菌株。应予 说明，吗I噪的减少浓度为13mg/g-细胞W上是指吗I噪的减少率为65%W上。
[0052] [实施例2]具有腐败物质的减少作用的微生物的挑选"体内试验(动物实验)" 将上述实施例1中挑选的9菌株通过动物实验(体内试验)进行筛选(评价·挑选）。
[0化3] 购入Ba化/c小鼠后，使之自由摄取饲料(粉末CRF-1/F0S(和光纯药工业(株））：10 (w/v)%a-色氨酸：2.5(w/v)%)l周，进行驯化。该驯化期间结束后，将规定的菌株(活菌）悬 浮于生理盐水，按照1天1次的频率在午前连续给予2周。此时，生理盐水的给予容量、各菌株 的给予容量、各菌株的给予浓度分别为l〇Wcfu/ml、0.2ml/只/天、2xl09cfu/只/天。在该给 予期间（2周)结束时进行采全血，测定血清中的硫酸吗I噪酪的浓度。
[0054] 应予说明，给予小鼠的菌株(活菌)是在体外试验中挑选(筛选)的。具体地，挑选了 B. breve的6菌株（MEP22023004、0LB6129、MEP22023007、MEP22023012、MEP22023015、 MEP22023016)、与B. longum的3菌株（MEP22023039、MEP22023061、MEP22023078)。并且，使 用等容量的生理盐水作为对照组，与规定菌株(活菌)的给予组对腐败物质的减少效果进行 了比较。其结果示于图UB. breve的6菌株）、图2(B. long皿的3菌株）。
[0055] 上述结果中，将B. breve的6菌株（图1)、与B. longum的3菌株（图2)W活菌给予小 鼠，在该给予期间结束时测定小鼠的血清中的硫酸吗I噪酪的浓度，结果在B. breve 0LB6129的给予组中，确认到其浓度与对照组相比显著减少。即，对于B. breve 0LB6129 (阳RM BP-11257)的给予组，与对照组相比，在血清中的硫酸吗I噪酪的浓度中确认到了显著 的减少。由该结果，暗示了B. breve 0LB6129在活体内可W减少腐败物质。
[0056] [实施例3]对活体给予的B. breve 0LB6129的浓度对腐败物质的减少效果的影 响
[实验步骤] 将Ba化/c小鼠（SLC,罕，6周龄)驯化一周后，如表4所示，基于体重分为4组，对各组， 将生理盐水与生理盐水的B. breve化B6129(活菌)悬浊液连续在午前口服给予2周。驯化 期间使全部组自由摄取饲料(粉末CRF-1/F0S(和光纯药工业(株））：10(w/v)%、レ色氨酸： 2.5(w/v)%)〇 [0化7][表 4]
[0化引 （OB. breve 0LB6129的给予期间的2周后，由尾静脈采血，测定血清中硫酸吗I噪 酪的浓度。将血清用超纯水(Milli-Q)稀释至100倍后，用SYRINGELESS FILTER DEVICE 0.2 皿（Whatman)过滤，根据现有报道（Takayama et al., Am J Kidney Dis. 2003 Mar;" (3 Suppl l):S142-5)，通过高效液相色谱(HPLC)进行测定。
[0059] (2)在B. breve 0LB6129的给予期间结束时采集便，在解剖时采集盲肠内容物，测 定各自所含的B. breve 0LB6129(投与菌）的菌数。
[0060] [实验结果] 在B. breve 0LB6129的给予期间结束时，确认血清中硫酸吗I噪酪的浓度，对于硫酸吗I 噪酪的浓度的减少效果，2 X 108 cfu/只/天的给予组(III)和2 X 109 cfu/只/天的给予组 (IV)中，与生理盐水的给予组(对照）（1)相比具有显著差异，但2 X 107 cfu/只/天的给予 组（Il)cfu/只与生理盐水的给予组(对照XI)相比，不具有显著差异（图3)。
[0061 ]另外，便中与盲肠内容物中的B. breve 0LB6129(投与菌）w用量依存性的方式检 ii到（图4)。
[0062] [实施例4]对活体给予F0S的有无对腐败物质的减少效果的影响 [实验步骤] 将Ba化/c小鼠（SLC,罕，6周龄)驯化一周后，如表5所示，基于体重分为4组，对于各 组，将未添加 F0S的生理盐水和生理盐水的B. breve化B6129(活菌）的悬浊液、添加了F0S 的生理盐水和生理盐水的B. breve化B6129(活菌）的悬浊液连续在午前口服给予2周。哥U 化期间是全部组自由摄取饲料（粉末CRF-lA-色氨酸：2.5(w/v)%)。应予说明，对于B. breve化B6129(活菌)的浓度，在实施例3中设定为关于腐败物质的减少效果显示必要性的 最低限用量即，2 X 108 cfu/只/天。
[0063] [表 5]
[0064] (l)FOS的给予期间的2周后，由尾静脈采血，测定血清中硫酸吗I噪酪的浓度。将血 清用超纯水(Milli-Q)稀释至 100倍后，用SYRINGELESS FILTER DEVICE 0.2 皿（Whatman) 过滤，根据现有报道（Takayama et al., Am J Kidney Dis. 2003 Mar;" (3 Suppl 1): S142-5)，通过高效液相色谱(HPLC)进行测定。
[0065] (2)F0S的给予期间结束时，采集B. breve 0LB6129给予组的便，测定通过活体内 的B. breve 0LB6129(投与菌）的菌数。
[0066] [实验结果] F0S的给予期间结束时，确认血清中硫酸吗I噪酪的浓度，仅B. breve 0LB6129的给予组 中，硫酸吗I噪酪的浓度的减少效果小（图5)。另外，对于硫酸吗I噪酪的浓度的减少效果，对于 仅F0S的给予组，与生理盐水的给予组（I)相比，没有显著差异（图5)。另一方面，对于硫酸吗I 噪酪的浓度的减少效果，在B. breve 0LB6129和F0S的给予组中，与生理盐水的给予组（I) 等相比，具有显著差异（图5)。应予说明，对于仅B. breve 0LB6129的给予组、和B. breve 0LB6129与F0S的给予组的2组(0LB6129 +)，测定便中的B. breve 0LB6129(投与菌）的菌 数，结果在F0S的给予组中观察到活菌数显著增高（图6)。
[0067] [保藏编号] 阳RM BP-11257 本说明书中引用的全部发行刊物、专利和专利申请作为参考全部引入本说明书中。
【主权项】
1. 低聚果糖(FOS)和/或低聚半乳糖(GOS)、以及色氨酸(L-色氨酸)在制备含有减少肠 内腐败物质的微生物的药品或食品中的应用， 所述应用包含筛选方法，所述方法的特征在于，将低聚果糖（F0S)和/或低聚半乳糖 (G0S)、以及色氨酸(L-色氨酸)添加至小鼠的饲料中，饲养小鼠，评价血清中的硫酸吲哚酚 的浓度。2. 权利要求1所述的应用，其中，使低聚果糖(F0S)的浓度和/或低聚半乳糖(G0S)的浓 度为0.5~20(w/v)%，以及使色氨酸的浓度为1~4(w/v)%。3. 权利要求1或2所述的应用，其特征在于，预先实施减少肠内腐败物质的微生物的体 外筛选方法，所述筛选方法由包含下列的方法组成：向反应液添加在微生物基本不增殖的 条件下为肠内腐败物质的减少所需的最低限的能量的葡萄糖的浓度，并且评价向所述反应 液添加的肠内腐败物质的减少效果。4. 权利要求3所述的应用，其中，使葡萄糖的浓度为0.3~0.7(w/v)%。5. 权利要求3所述的应用，其中，使微生物为乳酸菌和/或双歧杆菌。
【专利摘要】本发明的第1课题在于有效利用安全性高的有用微生物来有效减少肠内腐败物质。本申请发明人着眼于通常在人的活体内（肠内）占优势的双歧杆菌而进行筛选，对吲哚的减少作用强、并确认到血清中的硫酸吲哚酚的减少作用的菌株进行挑选，从而完成了本申请发明。FERM BP-1125720100526
【IPC分类】A61P7/00, A61P37/08, A61P37/02, A23L33/135, A61P1/00, A23C9/127, A61K35/74, A61P13/12, A61P1/12, A61P17/00, C12Q1/04
【公开号】CN105671120
【申请号】CN201610085654
【发明人】天藤公子
【申请人】株式会社明治
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2011年7月5日
【公告号】CN102959075A, CN102959075B, WO2012005240A1