重组腺相关病毒及其在治疗和预防心功能不全和心力衰竭中的应用
【专利摘要】本发明公开了重组腺相关病毒及其在治疗和预防心功能不全和心力衰竭中的应用。本发明公开的重组腺相关病毒表达Junctophilin?2蛋白，Junctophilin?2蛋白为下述A1)或A2)或A3)的蛋白质：A1)氨基酸序列是序列1的蛋白质；A2)在序列1所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有相同功能的由A1)衍生的蛋白质；A3)在A1)或A2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。实验证明，本发明的重组腺相关病毒对动物心功能不全和心力衰竭具有治疗作用，可以提高动物的心脏射血分数，可以用来治疗动物心功能不全和心力衰竭。
【专利说明】
重组腺相关病毒及其在治疗和预防心功能不全和心力衰竭中 的应用
技术领域
[0001] 本发明设及生物技术领域中重组腺相关病毒及其在治疗和预防屯、功能不全和屯、 力衰竭中的应用。
【背景技术】
[0002] 屯、脏是人体最重要的器官之一，人们通常将它比作向全身输送新鲜有氧血液的 累。屯、肌细胞尤其是屯、室肌细胞持续不断地有规律的周期性收缩是累行使功能的源动力。
[0003] 屯、力衰竭化ead hi lure)简称屯、衰，是指由于屯、脏累功能障碍，W致屯、输出量减 少，不足W适应全身组织代谢需要的一种病理过程。屯、力衰竭亦称累衰竭(pump failure)。 屯、力衰竭包括两种情况:①屯、肌衰竭(myocardial failure):是指原发性屯、肌肌原纤维收 缩功能障碍所致的屯、力衰竭，此时累功能障碍是原发的。如屯、肌炎时，屯、肌的变质、渗出或 结缔组织增生可使屯、肌收缩性明显减弱。又如屯、肌梗死时可因部分屯、肌坏死而致屯、肌收缩 性减弱等等。②其他原因所致的屯、力衰竭:如屯、脏瓣膜病时，由于屯、肌负荷过重而发生屯、肌 肥大和屯、脏扩大，继则屯、肌收缩性相对不足而导致屯、力衰竭，此时累功能障碍是继发的，在 除去瓣膜障碍时较易逆转。
[0004] 屯、功能不全（cardiac insufficiency)是由于各种原因造成屯、肌的收缩功能下 降，使屯、脏前向性排血减少，造成血液渺滞在体循环或肺循环产生的症状。屯、功能不全可分 为无症状和有症状两个阶段，前者有屯、室功能障碍的客观证据(如左室射血分数降低），但 无典型充血性屯、力衰竭症状，屯、功能尚属纽约屯、脏病学会(NY-HA)分级的I级，属有症状屯、 力衰竭的前期，无症状屯、功能不全如不进行有效治疗，迟早会发展成有症状屯、功能不全。屯、 脏射血分数化F)，指的是每搏输出量占屯、室舒张末期容积量的百分比。正常的屯、脏射血分 数左室射血分数(LVE巧为>50%;右屯、室射血分数为>40%。若小于此值即为屯、功能不全。
[0005] 屯、功能不全与屯、力衰竭本质上是相同的，只是在程度上有所区别：屯、力衰竭一般 是指屯、功能不全的晚期，患者有明显的屯、力衰竭的临床症状，而屯、功能不全则指病情从轻 到重的全过程，包括没有屯、力衰竭症状的屯、功能不全代偿阶段。
[0006] Junctophilin-2蛋白是2000年由一位日本科学家首次报道发现，属于 Juncto地ilin家族。Junctophilin家族的Juncto地ilin-1主要存在于骨骼肌中，另两种亚 型化ncto地1 in-3 W及化ncto地il in-4主要分布于大脑中。通过序列比对和二级结构预测， 发现化ncto地ilin家族蛋白的氨基端有8个序列保守的模式结构组成，簇基端是一段跨膜 区域。
[0007] 腺相关病毒(adeno-associated vi;rus，AAV)属于微小病毒科，无外包膜单链线状 DNA病毒。天然的腺相关病毒基因组大小约4700bp，包括上下游两个开放读码框架，分别编 码复制依赖蛋白R邱W及组配衣壳蛋白化P，位于2个由145个核巧酸组成的反向末端重复序 列（ITR)之间。腺相关病毒为复制缺陷型病毒，其复制依赖于腺病毒的早期蛋白ΕΙΑ,ΕΙΒ， Ε2Α W 及Ε4，VARNA等因子。
[000引目前主流的腺相关病毒包装系统由Ξ个质粒组成，即pAAV-ITR，pAAV R/C和 pA加 eltaF6。其中pAAV-口R带有口R序列和多克隆酶切位点，可W插入外源编码基因 。pAAV R/C编码Rep蛋白和Cap蛋白，而pA邮eltaF6则提供腺相关病毒基因组复制所必须的腺病毒 辅助因子E4 W及VARNA。Ξ质粒腺相关病毒包装系统所使用的皿K293细胞系则可提供E1A， E1BW及E2A运Ξ种辅助因子。
【发明内容】
[0009] 本发明所要解决的技术问题是如何治疗和/或预防屯、功能不全或屯、力衰竭。
[0010] 为解决上述技术问题，本发明首先提供了 一种重组腺相关病毒，其名称为AAV- 肝 H-2，AAV-肝 H-2 表达化 ncto地 i 1 in-2 QPH-2)蛋白。
[0011] 上述重组腺相关病毒中，Junctophilin-2可为下述A1)或A2)或A3)的蛋白质：
[0012] A1)氨基酸序列是序列1的蛋白质；
[0013] A2)在序列1所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基 酸残基得到的具有相同功能的由A1)衍生的蛋白质；
[0014] A3)在A1)或A2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。
[001引其中，序列1由692个氨基酸组成。
[0016] 上述重组腺相关病毒中，AAV-肝H-2的基因组可包括下述1)、2)和3):
[0017] 1)腺相关病毒的R邱编码基因与化P编码基因；
[0018] 2)腺病毒的E4编码基因、VARNA编码基因、E1A编码基因、E1B编码基因与E2A编码基 因；
[0019] 3)Juncto 地 ilin-2 编码基因。
[0020] 上述重组腺相关病毒中，所述R邱编码基因与所述化P编码基因均可来源于PAAV2/ 9。所述E4编码基因和所述VARNA编码基因均可来源于pA邮e 1化F6。所述E1A编码基因、E1B编 码基因与E2A编码基因均可来源于HEK293T细胞。
[0021] 上述重组腺相关病毒中，所述AAV-肝H-2的基因组也可仅由所述1)、所述2)和所述 3)组成。
[0022] 上述重组腺相关病毒中，所述化ncto地ilin-2编码基因可为如下bl)或b2)或b3) 所示的核酸分子：
[0023] bl)编码序列是序列表中序列1的DNA分子；
[0024] b2)与bl)限定的核巧酸序列具有75%或75% W上同一性，且编码化ncto地ilin-2 的DM分子；
[0025] b3)在严格条件下与bl)限定的核巧酸序列杂交，且编码JunctopMlin-2的DNA分 子。
[00%]其中，序列2由2079个核巧酸组成，序列2所示的DNA分子QPH-2基因）编码序列1所 示的肝H-2。
[0027]为解决上述技术问题，本发明还提供了 AAV-肝H-2的构建方法，所述方法包括将含 有所述Rep编码基因的重组载体、含有所述Cap编码基因的重组载体、含有所述E4编码基因 的重组载体、含有所述VARNA编码基因的重组载体和含有所述化ncto地ilin-2编码基因的 重组载体导入包装细胞中，得到重组腺相关病毒;所述包装细胞含有所述E1A编码基因、所 述ElB编码基因与所述E2A编码基因。
[0028] 上述方法中，所述包装细胞能表达E1A、E1B和E2A。所述包装细胞具体可为皿K293 细胞，如HEK293T细胞。
[0029] 为解决上述技术问题，本发明还提供了下述任一产品：
[0030] P1、所述AAV-肝H-2的基因组；
[0031] P2、含有所述化ncto地i 1 in-2编码基因的重组载体；
[0032] P3、含有所述化ncto地i 1 in-2编码基因的表达盒。
[0033] 本领域普通技术人员可W很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方 法，对本发明的编码肝H-2的核巧酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明分 离得到的肝H-2的核巧酸序列75%或者更高同一性的核巧酸，只要编码肝H-2且具有JPH-2 功能，均是衍生于本发明的核巧酸序列并且等同于本发明的序列。
[0034] 运里使用的术语"同一性"指与天然核酸序列的序列相似性。"同一性"包括与本发 明的编码序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核巧酸序列具有75%或更高，或85%或 更高，或90%或更高，或95%或更高同一性的核巧酸序列。同一性可W用肉眼或计算机软件 进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可W用百分比（％)表示，其可W 用来评价相关序列之间的同一性。
[0035] 上述产品中，所述严格条件是在2 X SSC，0.1 %SDS的溶液中，在68°C下杂交并洗膜 2次，每次5min，又于0.5 X SSC，0.1 % SDS的溶液中，在68 °C下杂交并洗膜2次，每次15min; 或，0.1 X SS阳(或0.1 X SSC)、0.1 % SDS的溶液中，65°C条件下杂交并洗膜。
[0036] 上述75%或75%W上同一性，可为80%、85%、90%或95%^上的同一性。
[0037] 上述产品中，P3所述的含有JPH-2编码基因的表达盒QPH-2基因表达盒），是指能 够在宿主细胞中表达肝H-2的DNA，该DNA不但可包括启动肝H-2基因转录的启动子，还可包 括终止肝H-2基因转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。
[0038] 可用现有的载体构建含有所述肝H-2编码基因表达盒的重组载体。
[0039] 上述产品中，所述载体可为质粒、黏粒、隧菌体或病毒载体。所述质粒具体可为 pAAV-cTNT-EGFP-2A-MCS-3Flag 〇
[0040] P2所述重组载体可含有序列2所示的用于编码JPH-2的DM序列。在本发明的一个 实施例中，P2 所述重组载体为 PAAV-EGFP-2A-JPH-2，PAAV-EGFP-2A-肝 H-2 为将 pAAV-cTNT- EGFP-2A-MCS-3Flag的Spel和ΚρηΙ识别序列间的DNA片段替换为序列2所示的DNA分子得到 的重组载体。
[0041] 为解决上述技术问题，本发明还提供了与AAV-肝H-2相关的生物材料，所述生物材 料为下述E1)至E5)中的任一种：
[0042] E1)成套DNA分子，由所述R邱编码基因、所述化P编码基因、所述E4编码基因、所述 VARM编码基因、所述E1A编码基因、所述E1B编码基因、所述E2A编码基因与所述 Juncto地ilin-2编码基因组成；
[0043] E2)含有AAV-肝H-2的微生物；
[0044] E3)含有AAV-肝H-2的动物细胞系；
[0045] E4)含有AAV-肝H-2的动物组织；
[0046] E5)含有AAV-肝H-2的动物器官。
[0047]上述生物材料中，所述动物细胞系、所述动物组织和所述动物器官均不包括繁殖 材料。
[004引上述生物材料中，E2)所述微生物、E3)所述动物细胞系、E4)所述动物组织和E5)所 述动物器官均可为腺相关病毒的寄主。
[0049] 为解决上述技术问题，本发明还提供了治疗和/或预防屯、功能不全或屯、力衰竭药 物，所述药物包括AAV-肝H-2。
[0050] 上述药物可仅WAAV-JPH-2作为其活性成分，还可WAAV-JPH-2与其他具有治疗 和/或预防屯、功能不全或屯、力衰竭作用的物质一起作为其活性成分。
[0051] 为解决上述技术问题，本发明还提供了下述任一应用：
[0052] KAAV-JPH-2、所述产品、所述生物材料或所述治疗和/或预防肿瘤药物在制备治 疗和/或预防屯、功能不全或屯、力衰竭药物中的应用；
[0053] n、AAV-JPH-2、所述产品、所述生物材料或所述治疗和/或预防肿瘤药物在治疗 和/或预防屯、功能不全或屯、力衰竭中的应用；
[0054] m、AAV-肝H-2、所述产品、所述生物材料或所述治疗和/或预防肿瘤药物在制备提 高屯、脏射血分数药物中的应用；
[0055] IV、AAV-肝H-2、所述产品、所述生物材料或所述治疗和/或预防肿瘤药物在提高屯、 脏射血分数中的应用。
[0056] 为解决上述技术问题，本发明还提供了治疗和/或预防屯、功能不全或屯、力衰竭的 方法，所述方法包括对动物施用AAV-肝H-2或所述治疗和/或预防肿瘤药物，对所述动物进 行屯、功能不全或屯、力衰竭的治疗和/或预防。
[0057] 上述方法中，所述动物可为陆生动物，如哺乳动物。
[0058] 本发明中，所述治疗和/或预防屯、功能不全或屯、力衰竭具体可提现在提高屯、脏射 血分数上。
[0059] 实验证明，本发明的重组病毒--AAV-JPH-2对动物屯、功能不全和屯、力衰竭具有 治疗作用，可W提高动物的屯、脏射血分数:未施用的对照组动物的屯、脏射血分数为73.53± 2.84%，施用AAV-JPH-2的实验组动物的屯、脏射血分数为82.86 ± 4.65 %，实验组动物的屯、 脏射血分数比对照组增加了 12%，两组动物的屯、脏射血分数具有显著性差异，P值<0.05。表 明，AAV-肝H-2可W通过提高动物的屯、脏射血分数来治疗动物屯、功能不全和屯、力衰竭，可应 用于先天性屯、肌病的治疗，也可用于渐行性屯、肌收缩能力不足致屯、衰的预防和治疗。
【附图说明】
[0060] 图1为转染效率。
[0061 ] 图2为SDS-PAGE检测病毒纯度。
[0062] 图3为实验组和对照组大鼠的屯、脏射血分数。其中AAV-肝肥表示AAV-肝H-2。
【具体实施方式】
[0063] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
[0064] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0065] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0066] 实施例1、AAV-肝H-2可W提高SD大鼠的屯、脏射血分数化F)
[0067] 本发明提供了一种表达化ncto地ilin-2(JPH-2)的重组腺相关病毒，重组腺相关 病毒的名称为AAV-肝H-2,肝H-2的氨基酸序列如序列表中序列1所示。
[006引1、重组载体的构建
[0069] 将载体pAAV-cTNT-EGFP-2A-MCS-3Flag(和元生物技术有限公司）的Spe巧日ΚρηΙ识 别序列间的DNA片段替换为序列2所示的DNA分子，得到重组载体，将该重组载体命名为 pAAV-EGFP-2A-JPH-2〇
[0070] 其中，序列2由2079个核巧酸组成，序列2所示的DNA分子QPH-2基因）编码序列1所 示的肝H-2,序列2的第1位为5/端，最后一位为y端。PAAV-EGFP-2A-肝H-2中，Spel的识别序 列与序列2的5/端相连，ΚρηΙ的识别序列与序列2的y端相连。
[0071] 2、重组腺相关病毒的捶救 [007^ 转染；
[0073] 将步骤1的PAAV-EGFP-2A-JPH-2与pADeltaF6 (宾夕法尼亚大学病毒载体中屯、）、 pAAV2/9(宾夕法尼亚大学病毒载体中屯、）（pAAV2/9为pAAV R/C中的一种)Ξ质粒按照摩尔 tkl: 1:1等量混合后加入10化转染试剂(PEI ,polyscience公司）中室溫作用lOmin，共转染 到肥K293T细胞(clontedi公司K肥K293T可W提供E1A，E1BW及E2A运Ξ种辅助因子）中，于 37°C、5 % C〇2下培养48小时，监测转染效率，48小时的转染效率见图1，结果显示，转染效率 比较高。
[0074] 病毒的提取：
[0075] 转染120小时后收集细胞，将得到的细胞用缓冲液1(缓冲液1由溶质和溶剂组成， 溶剂为水，溶质及其浓度分别为50mM化is、150mM化Cl、2mM MgCl2,用盐酸调节pH至8.0) 重悬后，在液氮与37°C中反复冻融Ξ次后离屯、取上清液，向上清液中加入12.5U/ml的 Benzonase (货号为70746，Mi 11 ipore公司）37 °C消化1小时，得到反应液，向该反应液中加入 病毒沉淀剂(病毒沉淀剂由水、化C1和阳G 8000组成，其中，化C1的浓度为0.5mM，PEG 8000 的质量百分比浓度为8%)冰浴2小时，离屯、收集沉淀，将得到的沉淀用缓冲液1重悬，即得到 AAV-肝H-2粗提液。
[0076] 病毒纯化：
[0077] 将AAV-JPH-2粗提液进行纯化，密度梯度离屯、下层介质为1.5g/cm3、上层介质为 1.3邑八111化3(：1溶液，离屯、条件为104,000旨，20°(：，2祉。通过离屯、管壁侧面穿刺取出病毒条 带，随后进行第二步密度梯度离屯、，梯度离屯、介质为1.4g/cm3CsCl溶液，离屯、条件为182， OOOg，20°C离屯、2地，分层收集4条密度梯度条带，进行SDS-PAGE电泳银染检测，电泳结果见 图2,图2中的泳道1-4分别为4条密度梯度条带的结果，泳道Μ为蛋白分子量标准。结果显示， 纯化的病毒有且仅含有Ξ条条带，分别对应于AAV外壳蛋白￥?1，￥?2，￥?3。4条密度梯度条带 中均含有AAV-肝Η-2的Ξ种蛋白质。SDS-PAGE电泳银染检测运4条梯度条带纯度后合并，得 到AAV-肝Η-2精提液。
[0078] 透析除盐：
[0079] 对AAV-肝Η-2精提液进行透析除盐。透析袋的截留大小为3W)a，透析换液2次，每次 透析使用化PBS缓冲液，总共透析2地，透析后样品用lOOMa的超滤管进行浓缩，得到AAV- 肝 H-2。
[0080]病毒滴度测定：W腺相关病毒ITR序列为模板设计定量PCR引物口 R-F (GACCTTTGGTCGCCCG)和ITR-R(GAACCCCTAGTGATGGAGTTG)。
[00川将步骤1的重组载体PAAV-EGFP-2A-肝H-2用PBS缓冲液稀释至拷贝数在109~106拷 贝/μ1间的不同浓度的PAAV-EGFP-2A-肝H-2溶液，不同浓度的PAAV-EGFP-2A-肝H-2溶液中 的重组载体为模板用口 R-F和ITR-R进行定量PCR，绘制Ct和拷贝数之间的线性函数。将AAV- JPH-2用PBS缓冲液依次进行10倍梯度的稀释，配审Ij3个浓度梯度的AAV-肝H-2悬液，每个浓 度梯度20μ1。而后分别向不同浓度的AAV-肝H-2悬液中加入蛋白酶K (蛋白酶K在AAV-JPH-2 悬液中的浓度为5mg/ml)，55 °C解育30min，95 °C变性lOmin释放出AAV-肝Η-2基因组，共得到 Ξ个浓度的AAV-肝H-2基因组溶液，每个AAV-肝H-2基因组溶液取化1，作为模板，用口R-F和 ITR-R进行定量PCRdS个不同稀释比AAV-JPH-2悬液的滴度分别为1.5 XE12、1.5 XE11和 1.5XE10。
[0082] 按照上述方法，将 PAAV-EGFP-2A-肝 H-2 替换为 pAAV-cTNT-EGFP-2A-MCS-3Flag，其 他步骤均不变，得到作为对照的腺相关病毒，将其命名为AAV-EGFP。
[0083] 3、AAV-肝H-2可W提高SD大鼠的屯、脏射血分数化F)
[0084] 实验重复Ξ次，每次重复实验的具体步骤如下：
[0085] 将6只40克左右的雄性SD大鼠（北京维通利华实验动物技术有限公司）随机分为两 组，每组Ξ只，分别为实验组和对照组。
[0086] 对实验组每只大鼠的尾静脉注射步骤2的AAV-JPH-2 (滴度为1.5 X E13的AAV-肝H- 2悬液），对对照组每只大鼠的尾静脉注射步骤2的AAV-EGFP(滴度为7 X E12的AAV-EGFP悬 液），AAV-肝H-2和AAV-EGFP的注射剂量均为5 X 10 iiyg。将注射当天记为注射第1天，在注射 第30天将各组大鼠送超声屯、动检测屯、功能，M-mode模式下进行数据采集。结果（图3)显示， 对照组大鼠的屯、脏射血分数为73.53 ± 2.84 %，实验组大鼠的屯、脏射血分数为82.86 ± 4.65%，与对照组相比，实验组大鼠的屯、脏射血分数提高了12%，s化dent's t检验显示P值 <0.05,两组大鼠的屯、脏射血分数具有显著性差异。
【主权项】
1. 重组腺相关病毒，其特征在于:所述重组腺相关病毒表达Junctophi 1 in-2蛋白。2. 根据权利要求1所述的重组腺相关病毒，其特征在于:Junct〇philin-2为下述A1)或 A2)或A3)的蛋白质： A1)氨基酸序列是序列1的蛋白质； A2)在序列1所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残 基得到的具有相同功能的由A1)衍生的蛋白质； A3)在A1)或A2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。3. 根据权利要求1或2所述的重组腺相关病毒，其特征在于:所述重组腺相关病毒包括 下述1)、2)和3): 1) 腺相关病毒的Rep编码基因与Cap编码基因； 2) 腺病毒的E4编码基因、VARNA编码基因、E1A编码基因、E1B编码基因与E2A编码基因； 3. Junctophilin_2 编码基因。4. 根据权利要求3所述的重组腺相关病毒，其特征在于:所述Junctophi 1 in-2编码基因 为如下bl)或b2)或b3)所示的核酸分子： bl)编码序列是序列表中序列1的DNA分子； b2)与bl)限定的核苷酸序列具有75%或75%以上同一性，且编码Junctophilin-2的 DNA分子； b3)在严格条件下与bl)限定的核苷酸序列杂交，且编码Junctophi 1 in-2的DNA分子。5. 权利要求1-4中任一所述重组腺相关病毒的构建方法，其特征在于:所述方法包括将 含有权利要求1-4中任一所述重组腺相关病毒中所述Rep编码基因的重组载体、含有所述 Cap编码基因的重组载体、含有所述E4编码基因的重组载体、含有所述VARNA编码基因的重 组载体和含有所述Junctophi 1 in-2编码基因的重组载体导入包装细胞中，得到重组腺相关 病毒;所述包装细胞含有权利要求1-4中任一所述重组腺相关病毒中所述E1A编码基因、所 述E1B编码基因与所述E2A编码基因。6. 下述任一产品： P1、权利要求1-4中任一所述重组腺相关病毒的基因组； P2、含有权利要求1-4中任一所述Junctophilin-2编码基因的重组载体； P3、含有权利要求1-4中任一所述Junctophi 1 in-2编码基因的表达盒。7. 与权利要求1-4中任一所述重组腺相关病毒相关的生物材料，为下述E1)至E5)中的 任一种： E1)成套DNA分子，由权利要求1-4中任一所述Rep编码基因、所述Cap编码基因、所述E4 编码基因、所述VARNA编码基因、所述E1A编码基因、所述E1B编码基因、所述E2A编码基因与 所述Junctophilin-2编码基因组成； E2)含有权利要求1-4中任一所述重组腺相关病毒的微生物； E3)含有权利要求1-4中任一所述重组腺相关病毒的动物细胞系； E4)含有权利要求1-4中任一所述重组腺相关病毒的动物组织； E5)含有权利要求1-4中任一所述重组腺相关病毒的动物器官。8. 治疗和/或预防心功能不全或心力衰竭药物，包含权利要求1-4中任一所述重组腺相 关病毒。9. 下述任一应用： I、权利要求1-4中任一所述重组腺相关病毒、权利要求6所述产品、权利要求7所述生物 材料或权利要求8所述治疗和/或预防肿瘤药物在制备治疗和/或预防心功能不全或心力衰 竭药物中的应用； Π 、权利要求1-4中任一所述重组腺相关病毒、权利要求6所述产品、权利要求7所述生 物材料或权利要求8所述治疗和/或预防肿瘤药物在治疗和/或预防心功能不全或心力衰竭 中的应用； ΙΠ 、权利要求1-4中任一所述重组腺相关病毒、权利要求6所述产品、权利要求7所述生 物材料或权利要求8所述治疗和/或预防肿瘤药物在制备提高心脏射血分数药物中的应用； IV、权利要求1-4中任一所述重组腺相关病毒、权利要求6所述产品、权利要求7所述生 物材料或权利要求8所述治疗和/或预防肿瘤药物在提高心脏射血分数中的应用。10. 治疗和/或预防心功能不全或心力衰竭的方法，包括对动物施用权利要求1-4中任 一所述重组腺相关病毒或权利要求8所述治疗和/或预防肿瘤药物，对所述动物进行心功能 不全或心力衰竭的治疗和/或预防。
【文档编号】C12N15/864GK106011085SQ201610330603
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月18日
【发明人】项斌, 王世强
【申请人】北京大学