金银合金纳米材料溶液。
[0044]实施例2
谷胱甘肽-金银合金纳米材料的制备方法如图1所示，包括以下步骤:
步骤一，2.64mL，10mM的硝酸银溶液和2.64mL，10mM的柠檬酸三钠溶液加入到41.25mL的去离子水中，均匀搅拌。
[0045]步骤二，将7.93mL，50mM新鲜配制的硼氢化钠溶液加入到步骤一中的混合溶液当中，不停搅拌12h。搅拌过夜后，得到银纳米粒子溶液。
[0046]步骤三，307.3mg的谷胱甘肽粉末加入到步骤二所得银纳米粒子溶液当中，随后对混合物在65° C下，油浴反应40h，得到浅橙色的溶液，即用谷胱甘肽稳定的银纳米粒子溶液。
[0047]步骤四，将4mL步骤三的谷胱甘肽稳定的银纳米粒子溶液加入到10.SmL的去离子水中，均匀搅拌；然后在室温下缓慢逐滴加入1.2mL，1mM的氯金酸溶液(HAuC14*4H20)，继续不停搅拌20min，然后在HOOOrpm下，离心20min，得到沉淀物(AgCl)和上清液。
[0048]步骤五，将步骤四所得上清液与过量的甲醇溶液进行彻底的混合反应，再在14000rpm下离心25min得到沉淀物。甲醇溶液中去离子水与甲醇的体积比为1:4。
[0049]步骤六，将步骤五所得沉淀物用适量的pH7.40，1mM并含有0.9%的NaCl的PBS缓冲溶液重新溶解，最后保存在4° C下，即可以得到谷胱甘肽-金银合金纳米材料溶液。
[0050]实施例3
将按照实施例1和实施例2的方法制备得到的谷胱甘肽-金银合金纳米材料进行进行TEM,荧光，红外，紫外以及XRD和SEM的相关表征。
[0051]如图2所示的谷胱甘肽-金银合金纳米材料的三维荧光图谱。从图中可以看出，本发明制备的金银合金荧光纳米材料具有相对较强的荧光特性。
[0052]如图3和图4所示的谷胱甘肽-金银合金纳米材料的??Μ图和粒径分布图，在谷胱甘肽作为稳定剂和表面保护剂的情况下，金银合金纳米材料均匀稳定的分布，并且粒径分布均匀，大小约为28.5nm。
[0053]如图5 所示不同的加入量氯金酸(40(^1^、60(^1^、80(^1^、100(^1^、120(^1^1400 μ L、1600 μ L、1800 μ L和2000 μ L)对谷胱甘肽-金银合金纳米材料的荧光强度优化关系图。从图中可以看出，选择1.2mL，1mM的氣金酸洛液是制备谷I光甘妝稳定的金银合金纳米材料的最佳用量。
[0054]如图6所示时间对谷胱甘肽-金银合金纳米材料的稳定性测试示意图。从图中可以看出，本发明的谷胱甘肽稳定的金银合金纳米材料具备相当的稳定性，能长时间放置而对其荧光特性没有太大的影响。
[0055]如图7所示谷胱甘肽-金银合金纳米材料的EDS测试示意图。从图中可以看出，金和银的含量相对较高。
[0056]图8为谷胱甘肽(GSH)，谷胱甘肽-银纳米粒子(GSH-AgNPs)和谷胱甘肽-金银合金纳米材料(GSH-AgAuNAs)红外对比图。可以看出，在波数为2530cm 1的峰位置，出现明显的对比，说明在GSH-AgAuNAs的制备过程中，GSH已经成功地覆盖在其表面。
[0057]图9为银纳米粒子(AgNPs )，谷胱甘肽-银纳米粒子(GSH-AgNPs)和谷胱甘肽-金银合金纳米材料(GSH-AgAuNAs)紫外对比图。可以看出AgNPs在390nm处出现一明显的吸收特征峰，说明在制备过程中的确生成了 AgNPs。
[0058]图10和图11分别为AgCl的XRD图谱和SEM图。XRD的图谱特征与文献报道的标准图谱一致，说明加入的氯金酸已经成功地用于谷胱甘肽稳定的金银合金纳米材料的制备中。
[0059]具体实施例4
将按照实施例1和实施例2的方法制备得到的谷胱甘肽-金银合金纳米材料进行组氨酸的检测，包括以下步骤:
1)将100μ L的用PBS缓冲液(ρΗ7.40，1mM)配制的谷胱甘肽稳定的金银合金纳米材料(GSH-AgAuNAs)溶液与300 μ L，1mM的铜离子溶液充分混合；
2)然后在加入不同体积的，ImM的组氨酸溶液，最终反应体积为lmL，室温下培育20-30
min ；
3)最后在荧光分光光度计上进行扫描测试。激发光波长为390nm，扫描范围为500~700nm，激发光和发射光狭缝宽度均为10nm，扫描速率为1200nm/min，光电倍增管电压为 700V。
[0060]检测结果如图12和图13所示，随着组氨酸的浓度从2 μ M到150 μ M依次增加，荧光强也对应变强。说明谷胱甘肽-金银合金纳米材料可以对组氨酸进行定量检测。
[0061]具体实施例5
将按照实施例1和实施例2的方法制备得到的谷胱甘肽-金银合金纳米材料与磁性纳米粒子进行对目标物人绒毛膜促性腺激素(HCG)的免疫分析。具体操作如下:
1)先分别对谷胱甘肽稳定的金银合金纳米材料(GSH-AgAuNAs)和磁性纳米粒子完成表面修饰后；
2)将1.5mL的已经功能化的谷胱甘肽稳定的金银合金纳米材料(GSH-AgAuNAs)与ImL加有不同标准浓度的HCG抗体溶液进行均匀混合反应，该混合物在25-37° C下培育
1.5-2.5h，直至反应达到平衡；
3)然后，将0.5mL的已经修饰完成的磁性纳米粒子与上述的混合物进行培育反应25-30min，随后，一个“三明治”式的连接物形成，并带有磁性；
4)最后对混合物进行磁性分离，得到的上清液用于进行荧光分析检测。该荧光分析参数设置为:激发光波长为390nm，扫描范围为500~700nm，激发光和发射光狭缝宽度均为10nm，扫描速率为1200nm/min，光电倍增管电压为700V。
[0062]检测结果如图14和15所示，随着HCG的浓度a_i从O到600ng*mL 1依次增强，荧光强度也对应增强。说明谷胱甘肽-金银合金纳米材料可以对目标物人绒毛膜促性腺激素进行免疫分析。
[0063]以上所揭露的仅为本发明一种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。
【主权项】
1.一种谷胱甘肽-金银合金纳米材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤一，制备银纳米粒子溶液； 步骤二，将谷胱甘肽加入步骤一所得银纳米粒子溶液中，然后在65-70° C下油浴反应40-50h后加去离子水搅拌均匀； 步骤三，再加氯金酸溶液搅拌均匀；接着离心处理，得到沉淀物AgCl和上清液； 步骤四，将步骤三所得上清液与过量的甲醇溶液混合反应后再次离心处理，得到的沉淀物； 步骤五，将步骤四所得沉淀物用适量的PBS缓冲溶液重新溶解。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤一所述银纳米粒子溶液的制备方法包括以下步骤:首先将硝酸银溶液和柠檬酸三钠溶液加入去离子水中混合搅拌均匀；再加入新鲜配制的硼氢化钠溶液混合搅拌至反应完全。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述谷胱甘肽、银纳米粒子和氯金酸的物质的量之比为1:5.2:10-1:5.5:10。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤五所述PBS缓冲溶液pH值为7.40，浓度为 5-10 禮，含有 0.6-0.9%NaCl。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述硝酸银溶液、柠檬酸三钠溶液和硼氢化钠溶液的物质的量之比为1:1: 1.2-1:1:1.5。6.一种根据权利要求1-5任一项所述制备方法制备的谷胱甘肽-金银合金纳米材料。7.根据权利要求6所述谷胱甘肽-金银合金纳米材料的应用，其特征在于，用于对组氨酸的定量检测和对人绒毛膜促性腺激素的免疫分析。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述对组氨酸的定量检测包括以下步骤: 步骤一，将用PBS缓冲液配制的谷胱甘肽-金银合金纳米材料与铜离子溶液充分混合； 步骤二，再加入不同体积的组氨酸溶液，室温下培育； 步骤三，最后进行荧光光谱表征测试。9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述对人绒毛膜促性腺激素的免疫分析包括以下步骤: 步骤一，分别对谷胱甘肽-金银合金纳米材料和磁性纳米粒子进行表面修饰； 步骤二，将表面修饰过的谷胱甘肽-金银合金纳米材料与不同浓度的人绒毛膜促性腺激素抗体溶液在25-37° C下培育； 步骤三，将表面修饰过的磁性纳米粒子与步骤二所得混合物进行培育； 步骤四，对步骤三所得混合物进行磁性分离，将得到的上清液进行荧光分析检测。
【专利摘要】本发明涉及一种谷胱甘肽-金银合金纳米材料及其制备方法与应用，制备方法包括以下步骤：先制备银纳米粒子溶液；然后添加谷胱甘肽在65-70°C下油浴反应40-50h后加去离子水搅拌均匀；再加入氯金酸溶液搅拌、离心处理后上清液与过量的甲醇溶液混合反应，再次离心处理得到的沉淀物用PBS缓冲溶液重新溶解，即得到谷胱甘肽-金银合金纳米材料溶液；可用于对组氨酸的定量检测和对人绒毛膜促性腺激素的免疫分析。本发明的制备方法简单方便，采用了谷胱甘肽作为还原剂和稳定剂，避免了毒性试剂的使用，具备环境友好性。本发明制备的谷胱甘肽-金银合金纳米材料结构稳定均匀，分散性好和具有强烈的荧光特性，可用于各种生物样品的分析检测及其他相关功能材料检测。
【IPC分类】C09K11/58, G01N21/64, G01N33/68, B22F9/24, B82Y30/00, G01N33/76
【公开号】CN105038771
【申请号】CN201510250664
【发明人】高文华, 黄晓鹏, 陈耀文, 陈汉佳, 张歆, 谢晓娜, 梁一丹
【申请人】汕头大学
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年5月18日