专利名称：：双丙戊酸钠中有关物质的测定方法
技术领域：
：本发明涉及一种药品的检测方法，特别是涉及一种双丙戊酸钠中有关物质的测定方法，该方法为我国制定双丙戊酸钠的测定标准提供依据。
背景技术：
：双丙戊酸钠是在美国上市的一种精神病类用药，是应用于治疗癫痫、成人偏头疼及双相情感型障碍的一线药物。目前，国内外已上市的双丙戊酸钠，在质量标准中均未规定有关物质检査项及限度，这对临床用药的安全性构成了潜在的威胁。因此，为了严格控制药品质量，保证其临床用药的安全有效，应对双丙戊酸钠进行有关物质检査，提高现有的双丙戊酸钠的质量标准。
发明内容本发明的目的在于，提供一种双丙戊酸钠中有关物质的测定方法，该方法采用气相色谱法，以对照物质对双丙戊酸钠中可能残留的丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸、(R，S)-2-异丙基戊酸、丙戊酸以及其他未知杂质进行检测。为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案一种双丙戊酸钠中有关物质的测定方法，其特征在于，该方法将固态双丙戊酸钠转化成液态的丙戊酸，制备双丙戊酸钠样品，然后以气相色谱仪根据对照物质丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸、(R，S)_2-异丙基戊酸对双丙戊酸钠样品中的有关物质的进行检测，具体包括下列步骤1)选择对照物质对照物质选择丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸、(R,S)-2-异丙基戊酸、丙戊酸；42)样品制备取双丙戊酸钠原料适量，加水溶解，加酸适量使双丙戊酸钠全部酸化，再加有机溶剂适量进行萃取，挥干有机溶剂，余残留液；3)色谱条件气相色谱仪所用毛细管色谱柱选择固定相为强极性的聚乙二醇或者聚乙二醇改良毛细色谱柱，进样口温度为220°C300°C;柱温100°C200°C，载气为氦气、氮气或氢气；4)测定精密量取残留液0.10.2ul，注入气相色谱仪中，记录色谱图，图谱中若显杂质峰，其各杂质峰面积的和不得超过总面积的3%。在上述样品的制备中，所述酸包括但不局限于磷酸、盐酸、硫酸、醋酸等有机酸和无机酸。在上述样品制备中，所述有机溶剂包括但不局限于乙醚、石油醚、戊垸、己垸、环己烷、辛垸、乙酸乙酯、二氯甲垸、三氯甲烷等低沸点易挥发的有机溶剂。进样口优选温度为245°C275°C柱温优选温度为130°C160°C。所述的聚乙二醇或者聚乙二醇改良毛细色谱柱，包括但不局限于这样几种型号DB-WAX毛细管色谱柱(固定相为聚乙二醇)、AE'PEG-20M毛细管色谱柱(固定相为聚乙二醇)、FFAP通用毛细管柱(固定相为硝基对苯二酸(TPA)改性的聚乙二醇)。本发明的方法检测精确、灵敏度较高，专属性强，能够对存在于缓释型、控释型及普通型的片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、针剂、膜剂、气雾剂或注射剂的各类剂型中的双丙戊酸钠进行有关物质检査，提高现有的双丙戊酸钠的质量标准，为今后制定双丙戊酸钠的有关物质测定标准提供依据。图l是丁酸气相色谱图2是戊酸气相色谱图3是二烯丙基乙酸气相色谱图4是丙戊酸气相色谱图5是溶剂色谱图6是酸破坏样品气相色谱图7是碱破坏样品气相色谱图8是氧化破坏样品气相色谱图9是高温破坏样品气相色谱图10是最低检出量确定气相色谱图。下面通过附图和具体实验对本发明作进一步说明。具体实施方式一、双丙戊酸钠中有关物质薄层色谱法考察实验为了保证检测结果的准确性，申请人首先进行了双丙戊酸钠中有关物质薄层色谱法考察实验，目的是将固态双丙戊酸钠完全转化成液态的丙戊酸，具体方法是1.样品制备样l:取双丙戊酸钠原料适量，加乙醇溶解；样2:取双丙戊酸钠适量，加入适量硫酸，以水做溶剂，配制成同样1等摩尔浓度的溶液(以丙戊酸计)；样3:取适量合成用前体丙戊酸，加乙醇溶解，配制成同样l等摩尔浓度的溶液(以丙戊酸计)；混合样等量吸取上述样2、样3溶液，混匀。2.薄层板及展开剂的选择取上述4个样品在不同薄层色谱条件下点样，进行分离试验，见表l。表l有关物质薄层色谱法考察<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>3、结论:通过采用不同薄层板和溶剂极性的实验研究发现双丙戊酸钠在乙醇中只有部分转化为丙戊酸，而在酸性溶液中能够全部转化为丙戊酸。因此确定所提供的样品处理方法中务须采用"酸化"步骤，将固态双丙戊酸钠完全转化成液态的丙戊酸。二、双丙戊酸钠有关物质测定方法其它条件的研究1、进样口温度及柱温的确定以丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸、丙戊酸做对照，混合配制，通过混合样品中有关物质的分离情况来确定合理的进样口温度和柱温。仪器气相色谱仪。对照物质丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸、丙戊酸。样品的配制分别取丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸适量溶于乙醚为对照溶液，另取各对照溶液与双丙戊酸钠制成混合溶液。选用DB-WAX毛细管色谱柱30m*0.25mm*0.25um，载气为氦气，分流比及进样量等条件相同下分别进样对照溶液和混合样品各3针，对比计算有关物质的出峰时间平均值，考察进样口温度及柱温，见表2。表2检测温度的考察(平均值，n=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>10(TC200。C范围内的检测温度下丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸、(R，S)-2-异丙基戊酸、以及丙戊酸能达到有效分离，符合测定要求。2、载气的确定以丁酸、戊酸、(R，S)-2-异丙基戊酸、丙戊酸做对照，通过混合样品中有关物质的分离情况确定理想的载气。仪器气相色谱仪。对照物质丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸和丙戊酸。样品的配制分别取丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸适量溶于乙醚为对照溶液，另取各对照溶液及双丙戊酸钠制成混合溶液。色谱条件DB-WAX毛细管色谱柱30m*0.25mm*0.25um;进样口温度26(TC;柱温145°C。分别以氦气、氢气、氮气为载气，分别进样对照溶液和混合样品各3针。结果三者不同载气条件下对照物质出峰时间基本一致，均能有效分离。结论氦气、氢气、氮气作为本色谱检测条件的载气均较为理想的，但优选载气为氦气。三、测定双丙戊酸钠有关物质的毛细色谱柱的研究1、方法以丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸、丙戊酸做对照，通过混合样品中有关物质的分离情况来确定检测温度。2、配制对照物质丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸和丙戊酸。样品的配制分别取丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸适量溶于乙醚为对照溶液，另取各对照溶液及双丙戊酸钠制成混合溶液。3、不同毛细色谱柱分离情况的考察分别进样对照溶液和混合样品各3针，对比计算有关物质出峰时间平均值，考察毛细色谱柱对有关物质的分离情况，结果见表3。<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>结论以表3结果可见DB-WAX毛细管色谱柱、FFAP通用毛细管柱、AEPEG-20M毛细管色谱柱等固定相为强极性的聚乙二醇或者聚乙二醇改良毛细色谱柱，对丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸、以及丙戊酸完全达到分离，符合测定要求。四、样品制备过程的酸和有机溶剂的筛选研究双丙戊酸钠样品的制备方法中主要包括两个物质的筛选酸化样品的酸，萃取丙戊酸的有机溶剂。以双丙戊酸钠的含量、有关物质的测定量以及有关物质测定过程中的分离情况为考察指标，对酸和有机溶剂进行筛选研究，见表4:色谱柱DB-WAX毛细管色谱柱30m*0.25mm*0.25um;进样口温度260。C;柱温145。C;载气氦气。样品制备取双丙戊酸钠约2g，加水50ml，加热溶解，放凉后加酸1ml,再加有机溶剂15ml，振摇，放置使分层。取有机溶剂层，挥干，余残留液，测二烯丙基乙酸。表4样品制备方法的酸和有机溶剂确定<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>结论以表4结果可见在样品制备中应选用磷酸、盐酸、硫酸或醋酸酸化样品，选用乙醚、石油醚、戊垸、己烷、环己烷、辛烷、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲等或低熔点有机溶剂提取、萃取样品。五、双丙戊酸钠有关物质测定标准的研究1、色谱条件DB-WAX毛细管色谱柱30m*0.25mm*0.25um。进样口温度260°C;柱温145°C;载气氦气。2、方法学研究2.1破坏试验2.1.1酸破坏样品溶液的制备取本品约2g，加水50ml，加稀硫酸5ml，放置30分钟，再加乙醚15ml，振摇，放置使分层，取乙醚层挥干，残留液0.2ul进样，记录色谱图。2.1.2碱破坏样品溶液的制备取本品约2g，加水50ml，加O.lmol氢氧化钠5ml，放置30分钟，用稀硫酸调PH值至中性，加稀硫酸5ml，再加乙醚15ml，振摇，放置使分层，取乙醚层挥干，残留液0.2yl进样，记录色谱图。2.1.3氧化破坏样品溶液的制备取本品约2g，加水50ml，加1%过氧化氢溶液2滴，放置30分钟，加稀硫酸5ml，再加乙醚15ml，振摇，放置使分层，取乙醚层挥干，残留液0.2ul进样，记录色谱图。2.1.4高温破坏样品溶液的制备取本品约2g，加水50ml，加热煮沸30分钟，放凉加稀硫酸5ml，再加乙醚15ml，振摇，放置使分层，取乙醚层挥干，残留液0.2ul进样，记录色谱图。将以上四种溶液及破坏前样品溶液按上述色谱条件分别注入气相色谱仪，记录色谱图，结果各杂质峰与主峰的分离度均符合要求，见附图1、2、3、4、5、6、7、8、9。2.2最小检出量精密称取双丙戊酸钠0.05890g，加乙醇溶解并稀释成0.5890mg/ml、0.05890mg/ml、0.02945mg/ml、0.008835mg/ml的溶液，取0.2u1注入气相色谱仪，以图谱得知，当浓度为0.008835mg/ml时测得主峰峰高约为基线噪音的3倍，故最小检出量为1.767ng(见附图10)。3、双丙戊酸钠有关物质测定标准研究(1)色谱条件DB-WAX毛细管色谱柱30m*0.25mm*0.25um。进样口温度260°C;柱温145°C;载气氦气。(2)样品制备取双丙戊酸钠约2g，加水50ml，加热溶解，放凉加稀硫酸5ml，再加乙醚15ml，振摇，放置使分层。取乙醚层，挥干乙醚，余残留液。(3)测定方法精密量取残留液0.2ul，注入气相色谱仪中，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品图谱中如显杂质峰,各杂质峰面积的和不得超过总面积的3%。以下是发明人给出的按照上述方法对双丙戊酸钠有关物质测定的具体实施例，本发明不限于这些实施例。实施例1:(1)色谱条件AEPEG-20M毛细管色谱柱30m*0.25mm*0.25um。进样口温度240°C;柱温130°C;载气氢气。(2)样品制备取双丙戊酸钠约lg，加水30ml，加热溶解，放凉加稀盐酸3ml，再加环己烷10ml，振摇，放置使分层。取环己垸层，挥干，余残留液。(3)测定法精密量取残留液0.lul，注入气相色谱仪中，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品谱图中如显杂质峰，各杂质峰面积的和不得超过总面积的3%。实施例2:(1)色谱条件DB-WAX毛细管色谱柱30m*0.25mm*0.25um。进样口温度220°C;柱温150°C;载气氮气。(2)样品制备取双丙戊酸钠约5g，加水100ml，加热溶解，放凉加磷酸溶液2.5ml，再加石油醚35ml，振摇，放置使分层。取石油醚，挥干，余残留液。(3)测定法精密量取残留液O.lul，注入气相色谱仪中，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。谱图中如显杂质峰，各杂质峰面积的和不得超过总面积的3%。实施例3:(1)色谱条件DV-17毛细管柱30m*0.25mm*0.25"m。进样口温度250°C;柱温170°C;载气氢气。(2)样品制备取双丙戊酸钠约1.5g，加水30ml，加热溶解，放凉加醋酸溶液2.5ml，再加三氯甲烷18ml，振摇，放置使分层。取三氯甲垸，挥干，余残留液。(3)测定法精密量取残留液0.2ul，注入气相色谱仪中，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。谱图中如显杂质峰，其各杂质峰面积的和不得超过总面积的3%。权利要求1、一种双丙戊酸钠中有关物质的测定方法，其特征在于，该方法将固态双丙戊酸钠转化成液态的丙戊酸，制备双丙戊酸钠样品，然后以气相色谱仪根据对照物质丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸、(R，S)-2-异丙基戊酸对双丙戊酸钠样品中的有关物质的进行检测，具体包括下列步骤1)选择对照物质对照物质选择丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸、(R，S)-2-异丙基戊酸、丙戊酸；2)样品制备取双丙戊酸钠原料适量，加水溶解，加酸适量使双丙戊酸钠全部酸化，再加有机溶剂适量进行萃取，挥干有机溶剂，余残留液；3)色谱条件毛细管色谱柱选择固定相为强极性的聚乙二醇或者聚乙二醇改良毛细色谱柱；进样口温度为220℃～300℃；柱温100℃～200℃，载气为氦气、氮气或氢气；4)测定精密量取残留液0.1～0.2μl，注入气相色谱仪中，记录色谱图，图谱中若显杂质峰，其各杂质峰面积的和不得超过总面积的3％。2、如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述的色谱柱包括但不局限于DB-WAX毛细管色谱柱或AEPEG-20M毛细管色谱柱或FFAP通用毛细管柱。3、如权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述的优选柱温为130°C160°C。4、如权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述的优选进样口温度为245。C275。C5、如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述的酸包括磷酸、盐酸、硫酸、醋酸等有机酸或无机酸。6、如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述的有机溶剂包括乙醚、石油醚、戊烷、己烷、环己垸、辛烷、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷或低沸点易挥发的有机溶剂。7、如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述的双丙戊酸钠存在于缓释型、控释型或普通型的片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、针剂、膜剂、气雾剂或注射剂的各类剂型中。全文摘要本发明公开了一种双丙戊酸钠中有关物质的测定方法，该方法将固态双丙戊酸钠转化成液态的丙戊酸，制备双丙戊酸钠样品，然后以气相色谱仪根据对照物质丁酸、戊酸、二烯丙基乙酸、(R，S)-2-异丙基戊酸对双丙戊酸钠样品中的有关物质的进行检测，能够对存在于缓释型、控释型及普通型的片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、针剂、膜剂、气雾剂或注射剂的各类剂型中的双丙戊酸钠进行有关物质检查，提高现有的双丙戊酸钠的质量标准，为今后制定双丙戊酸钠的有关物质测定标准提供依据。文档编号G01N30/00GK101393181SQ200810231809公开日2009年3月25日申请日期2008年10月20日优先权日2008年10月20日发明者毛幼桦申请人:陕西天森药物研究开发有限公司