茶叶中儿茶素类含量的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种茶叶中儿茶素类含量的检测方法，采用水来代替稳定溶液来配置测试液及标样工作液，提高了测试液及标样工作液分离效果，使基本上可以回到基线，且可以保存的时间较长，保存在-4℃条件下，至少半年以上。而且无论是标样工作液还是测试液，七种化合物都能完全分离，且分离效果良好。色谱峰的保留时间重现性也相对较好。并且，有效避免了现有采用稳定液存在的容易污染排气阀滤心、造成堵塞的问题。还通过改进色谱条件，提高了液相色谱柱的选择范围。
【专利说明】茶叶中儿茶素类含量的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种茶叶科学领域，特别是一种茶叶中儿茶素类含量的检测方法。
【背景技术】
[0002]现在,普遍厂家的C18 (粒径5um , 250mmX 4.6mm )色谱柱不能分离EGCG和EC,这也是多家实验室反映的问题。经咨询标准起草人，也说是柱子的问题，推荐买大连依利特Hyspersil 0DS2 C18 (粒径5um , 250mmX 4.6mm )色谱柱后,标样基本上可以分开,但也不是很理想，而样品的分离效果就更差一些。且在EGC和+C色谱峰的右侧或者左侧出现一干扰峰，致使其分离度降低，峰形不对称，拖尾严重，给积分造成较大误差。
现有的方法中，用稳定液配制的标样工作液分离效果不如用水的好，且不能保存较长时间。而且用稳定液配制测试液容易污染排气阀滤心，造成堵塞。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是:提供一种茶叶中儿茶素类含量的检测方法，它能将标样工作液或样品测试液中的多种化合物完全分离，且分离效果良好，色谱峰的保留时间重现性也相对较好，以克服现有技术的不足。
本发明的是这样实现的:茶叶中儿茶素类含量的检测方法，包括如下步骤:
1)将待测茶叶磨碎，将磨碎的茶叶加入70°c的质量百分比为70%的甲醇溶液中，将溶液搅拌均匀后，在70°C的水浴中进行浸提，使浸提溶液自然冷却至室温；将冷却后的浸提溶液进行离心提取，取上清液；再将离心提取的残渣重复上述步骤进行提取，将提取液合并摇匀，进行过滤后，获得母液备用；
2)将母液加水定容后，进行过滤，获得测试液；然后将测试液按照色谱条件为90~80%A 相、10 ~20% B 相一>10 ~15min 内由 90 ~80%A 相—80% ~75%A 相、20 ~25%B相一>20 ~25min 内由 80% ~75%A 相 A 相—70% ~60A 相、30 ~40%B 相一>25 ~30min内由70%~60A相一90~80%A相、10~20% B相一>90~80%A相、10~20% B相保持5min,进行色谱分析，待压力和柱温稳定后，进行空白运行；准确吸取混合标准系列工作液注射入HPLC，在相同的色谱条件下注射与标准系列工作液相同体积的测试液；测试液以峰面积定量；流动相A为水，流动相B为N，N 二甲基甲酰胺、甲醇及乙酸的组合为，N，N 二甲基甲酰胺、甲醇及乙酸之间的体积比为35~45:1.5~2.5:1.5~2。
3)将测试的结果带入公式(I)计算获得儿茶素含量。
【权利要求】
1.一种茶叶中儿茶素类含量的检测方法，其特征在于:包括如下步骤: 1)将待测茶叶磨碎，将磨碎的茶叶加入70°c的质量百分比为70%的甲醇溶液中，将溶液搅拌均匀后，在70°C的水浴中进行浸提，使浸提溶液自然冷却至室温；将冷却后的浸提溶液进行离心提取，取上清液；再将离心提取的残渣重复上述步骤进行提取，将提取液合并摇匀，进行过滤后，获得母液备用； 2)将母液加水定容后，进行过滤，获得测试液；然后将测试液按照色谱条件为:90~80%A 相、10 ~20% B 相一>10 ~15min 内由 90 ~80%A 相—80% ~75%A 相、20 ~25%B相一>20 ~25min 内由 80% ~75%A 相 A 相—70% ~60A 相、30 ~40%B 相一>25 ~30min内由70%~60A相一90~80%A相、10~20% B相一>90~80%A相、10~20% B相保持5min，进行色谱分析，待压力和柱温稳定后，进行空白运行；准确吸取混合用水配制的标准工作液注射入HPLC，在相同的色谱条件下注射与标准工作液相同体积的测试液；测试液以峰面积定量；流动相A为水，流动相B为N，N 二甲基甲酰胺、甲醇及乙酸的组合为，N，N 二甲基甲酰胺、甲醇及乙酸之间的体积比为35~45:1.5~2.5:1.5~2 ;3)将测试的结果带入公式(I)计算获得儿茶素含量.，
2.根据权利要求1所述的茶叶中儿茶素类含量的检测方法，其特征在于:步骤I)中所述的浸提的时间为10分钟，每隔5分钟进行一次搅拌。
3.根据权利要求1所述的茶叶中儿茶素类含量的检测方法，其特征在于:步骤I)中所述的离心提取的转速为3500r/min，提取时间为10分钟。
4.根据权利要求1所述的茶叶中儿茶素类含量的检测方法，其特征在于:步骤I)及步骤2)中所述的过滤采用0.45 μ m膜进行过滤。
5.根据权利要求1所述的茶叶中儿茶素类含量的检测方法，其特征在于:所采用的液相色谱柱的型号为C18,粒径为5 μ m, 250mmX 4.6mm或粒径为5 μ m, 150mmX 4.6mm。
【文档编号】G01N30/02GK103940920SQ201310485392
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2013年10月16日 优先权日:2013年10月16日
【发明者】周顺珍, 龚雪, 周国兰, 郭灿, 郑文莉 申请人:贵州省茶叶研究所