购买。由于合成效率高、反应步骤少，半抗原只需一步反应即可合成，从而提高了反应的可控性。
【附图说明】
[0047]构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中:
[0048]图1为本发明实施例一所述的诺龙的化学发光免疫分析方法标准曲线；
[0049]图2为本发明实施例一所述的群勃龙的化学发光免疫分析方法标准曲线；
[0050]图3本发明实施例一所述的丙酸诺龙的化学发光免疫分析方法标准曲线；
[0051]图4为本发明实施例一所述的雄诺龙的化学发光免疫分析方法标准曲线；
[0052]图5为本发明实施例一所述的美雄诺龙的化学发光免疫分析方法标准曲线。
【具体实施方式】
[0053]需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0054]下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明创造。
[0055]实施例一
[0056]诺龙半抗原的合成
[0057]称取1.316g诺龙溶于14.5OmL无水四氢呋喃中，并加入0.960g 丁二酸酐、1.32mL三乙胺和0.584g4- 二甲氨基吡啶(DMAP)，在60°C温度下持续反应12h，随后将溶剂旋干，生成物用有机溶剂石油醚/乙酸乙酯(l/l，v/v)溶解。以石油醚/乙酸乙酯(l/l，v/v)为展开剂，进行纯化得到白色晶体，即为诺龙半抗原。
[0058]酶标抗原的合成
[0059]活化酯法:准确称量0.02mmol (7.47mg)溶于300 μ LN-N 二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，分别加入4.78mg(0.02mmol) 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和2.75mg(0.02mmol)N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)避光4°C搅拌反应1h左右，得甲液。
[0060]准确称量10.0Omg辣根过氧化酶(HRP)，加入到4mL的碳酸氢钠缓冲液中(pH7.4)，待完全溶解，得乙液，在冰浴条件下将甲液缓慢加入到乙液中，待完全加入后，4°C避光搅拌12h，然后将反应液在4°C、pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中透析3天，然后精确量取酶标抗原溶液的体积，测定浓度加入硫柳汞，4°C保存。
[0061]抗血清纯化制备诺龙抗体
[0062]具体步骤如下:
[0063]I)定时监测动物抗体效价，当终点效价达到20万以上时，由颈动脉采全血。将采集的全血20°C静置2h后在4°C下静置8h，然后3500转/min离心lOmin，收集上清液于-20°C保存。离心后获得的血清采用proteinA-Sepharose-4B免疫亲和层析柱进一步纯化，制备IgG抗体。平衡柱子:用pH7.4的磷酸盐缓冲液(Binding buffer)冲洗管路，流速6.5mL/min，2min。装柱后再用pH7.4的磷酸盐缓冲液(Binding buffer)平衡柱子，流速lmL/min,直至基线水平。
[0064]2)上样:待基线水平后，将三聚氰胺抗血清用等体积pH7.4的磷酸盐缓冲(Binding buffer)稀释(1:1，V/V)后。
[0065]3)上柱，流速为0.5mL/min。上样结束后，用ρΗ7.4Binding buffer冲柱子，流速ImL/min。抗体被特异性吸附在填料位点上，其他杂蛋白随缓冲液流出，直至基线水平。
[0066]4)洗脱:用pH 2.7的洗脱缓冲液(Elut1n buffer)洗脱柱子上结合的抗体，洗出目的蛋白，流速为0.5mL/min。
[0067]5)测定:在280nm紫外下检测洗脱液蛋白浓度，当吸光度A280 > 0.2时，收集洗脱液，收集完毕后迅速用lmol/L Tris调pH至7.0。
[0068]6)抗体的透析与保存:用pH 7.4抗体透析液(磷酸盐缓冲液，PB)透析所得抗体，4°C透析三天，每天换三次透析，透析后取出，加入0.1 % (W/V)的NaN3,4°C储存备用。
[0069]诺龙、群勃龙、丙酸诺龙、雄诺龙和美雄诺龙等五种蛋白同化激素多残留化学发光免疫分析方法检测步骤:
[0070](I)包被抗体
[0071]在包被抗体时，需要先用磷酸盐缓冲溶液稀释待包被的诺龙抗体，把稀释好的抗体稀释液加入到酶标板中的96微孔中(100 yL/well)，加完后把酶标板置于4°C条件下，过夜，次日，弃去孔中液体，向酶标板中加入250 μ L的洗涤液PBST缓冲液，在震荡器上震荡2min，弃去洗涤液，即为洗板一次，重复洗板3次。
[0072](2)封闭
[0073]紧接上一步，封闭酶标板，向酶标板的每个微孔中加入200 μ L封闭液，加完后把酶标板置于37°C条件下，Ih后取出酶标板弃去封闭液，重复洗板4次。
[0074](3)加酶标抗原
[0075]在步骤(2)之后，向酶标板上的每个微孔先加入50 μ L梯度稀释好的待测物样溶液或样品提取液，然后再向其中加入50 μ L酶标抗原溶液，酶标抗原是用磷酸盐缓冲溶液进行稀释，酶标板被置于37°c条件下孵育Ih之后，重复洗板5次；
[0076](4)读发光值
[0077]将上一步洗好的酶标板置于荧光化学发光分析仪中，设定好相应程序，仪器自动向酶标板的每个微孔中加入100 μ L发光底物，30s后仪器立即测定每个微孔的发光强度值。
[0078]根据发光强度值分别建立诺龙、群勃龙、丙酸诺龙、雄诺龙和美雄诺龙的化学发光免疫分析方法标准曲线，如图1?图5所示。
[0079]使用实施例一中对应的分析方法，诺龙的灵敏度为0.050 μ g/L,最低检出限为
0.00378 μ g/L、群勃龙的灵敏度为0.094 μ g/L,最低检出限为0.00330 μ g/L、丙酸诺龙的灵敏度为0.66 μ g/L,最低检出限为0.259 μ g/L、雄诺龙的灵敏度为1.40 μ g/L,最低检出限为0.0398 μ g/L、美雄诺龙的灵敏度为2.40 μ g/L,最低检出限为0.078 μ g/L。
[0080]效果验证试验一，准确称取猪肉样品lg(精确到0.0lg)加2mL甲醇溶液匀浆振荡提取6111；[11，4<€、9000印111、离心12min，取全部上清液到试管中，氮吹干后，用ImL甲醇复溶，用PBS稀释60倍后配制标准系列绘制基质标准曲线，得出的诺龙的平均回收率为80?100%。
[0081]效果验证试验二，准确称取鸡肉和牛肉样品lg(精确到0.0lg)加2mL甲醇溶液匀楽振荡提取6111；[11，4<€、9000印111、离心12min，取全部上清液到试管中，氮吹干后，用ImL甲醇复溶，用PBS稀释60倍后配制标准系列绘制基质标准曲线，得出的诺龙的平均回收率为80 ?100%。
[0082]以上所述仅为本发明创造的较佳实施例而已，并不用以限制本发明创造，凡在本发明创造的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明创造的保护范围之内。
【主权项】
1.一种用于蛋白同化激素免疫分析的酶标抗原，其特征在于:由诺龙半抗原与辣根过氧化酶连接合成，其制备包括如下步骤； 1)诺龙半抗原的制备，称取0.5?2.0g诺龙溶于10?25mL无水四氢呋喃中，并加入0.5?2.0g 丁二酸酐、0.6?2.0mL三乙胺和0.2?1.5g4_ 二甲氨基吡啶，在62?70°C温度下持续反应8?17h，随后将溶剂旋干，生成物用体积比为1:2?5:6的石油醚与乙酸乙酯的混合液溶解；以体积比为1:2?5:6的石油醚与乙酸乙