抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂的制作方法_2

文档序号:9260399阅读:来源:国知局
消除类风湿因子对检测结果的干扰,同时不会影 响对目的铁蛋白的检出含量。
[002引表11铁蛋白检测试剂R1不同抑对类风湿因子干扰的抑制比较 [0026]
[0027] 同时,将上述五套配制试剂与进口试剂对10份RF阳性血清标本进行铁蛋白含量 检测,并用类风湿因子检测试剂检测样本中RF含量,进一步确认低抑值试剂R1能有效抑 制血清中RF对铁蛋白含量检测的干扰,准确检测血清的铁蛋白含量。
[0028] 表12铁蛋白检测试剂R1不同抑对RF阳性血清铁蛋白含量检测的比较
[0029]
[0030] (2)蛋白变性剂对铁蛋白检测试剂受RF干扰的抑制作用的比较
[003U 铁蛋白检测试剂Rl-A(pH7. 4) ;10mMPB缓冲液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1 %吐 温-20、0. 1%叠氮钢、1% 阳G6000。
[003引铁蛋白检测试剂Rl-B(pH7. 4) ;10mM PB缓冲液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1% 吐 温-20、0.1%叠氮钢、1%阳66000、0.01%尿素。
[003引 铁蛋白检测试剂Rl-C(pH7. 4) ;10mMPB缓冲液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1 %吐 温-20、0. 1 % 叠氮钢、1 % 阳G6000、0. 05 % 尿素。
[0034]铁蛋白检测试剂Rl-D(pH7. 4) ;10mMPB缓冲液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1 % 吐 温-20、0. 1%叠氮钢、1% 阳G6000、0. 1%尿素。
[003引铁蛋白检测试剂Rl-E(pH7. 4) ;10mM PB缓冲液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1% 吐 温-20、0. 1%叠氮钢、1%阳G6000、0. 2%尿素。
[0036] W上配制的五种铁蛋白检测试剂R1 (R1-A、R1-B、R1-C、R1-D、R1-E,各试剂的蛋白 变性剂用量不同)与同一试剂R2配套使用,对待测样本铁蛋白含量进行检测。结果如表13 所示,通过在铁蛋白检测试剂R1中加入少量蛋白变性剂尿素,能部分抑制高值RF对检测试 剂的干扰作用。
[0037] 表13铁蛋白检测试剂R1中不同含量尿素对类风湿因子干扰的抑制作用 [00%]
[0039]W上蛋白变性剂对铁蛋白检测试剂受RF干扰的抑制作用实施方案中,蛋白变性 剂还可W用十二烷基硫酸钢或盐酸脈进行同等替换而不超出本发明要求的保护范围。蛋白 变性剂在R1 中的用量还可W为 0. 〇3%、0. 05%、0. 07%、0. 08%、0. 12%、0. 15%、0. 19%、 0. 2%W及0. 01-0. 2%范围内的其它任意值进行同等替换而不超出本发明要求的保护范 围。
[0040] 实施例二对胃蛋白酶原I检测试剂(胶乳增强免疫比浊法)
[00川 胃蛋白酶原I检测试剂R2(pH7. 5) ;20mMTris缓冲液、150mM化Cl、l%BSA、 0. 1 %吐温-20、0. 1 %叠氮钢、5%海藻糖、0. 15%胃蛋白酶原I单克隆抗体致敏的纳米胶乳 微粒。
[0042] 不同类风湿因子含量的胃蛋白酶原I样本制备:
[0043] 在含有100^3/1胃蛋白酶原1纯品的样品中加入0、20、100、400^/1111^的类风湿 因子,类风湿因子有两种来源,购自两个不同厂家(RF-I、RF-II)。
[0044] (1)不同抑值胃蛋白酶原I检测试剂R1的比较
[0045]胃蛋白酶原I检测试剂Rl-A(pH7. 4)aOOmMMES缓冲液、300mM化Cl、l%BSA、 0. 1 % 吐温-20、0. 1 % 叠氮钢、0. 5 % 阳G6000。
[0046] 胃蛋白酶原I检测试剂Rl-B(p册.0)aOOmMMES缓冲液、300mM化Cl、l%BSA、 0. 1 % 吐温-20、0. 1 % 叠氮钢、0. 5 % 阳G6000。
[0047] 胃蛋白酶原I检测试剂R1-C(抑5. 8)aOOmMMES缓冲液、300mM化Cl、l%BSA、 0. 1 % 吐温-20、0. 1 % 叠氮钢、0. 5 % 阳G6000。
[0048] 胃蛋白酶原I检测试剂Rl-D(p册.7)aOOmMMES缓冲液、300mM化Cl、l%BSA、 0. 1 % 吐温-20、0. 1 % 叠氮钢、0. 5 % 阳G6000。
[0049] 胃蛋白酶原I检测试剂Rl-E(p册.5)aOOmMMES缓冲液、300mM化Cl、l%BSA、 0. 1 % 吐温-20、0. 1 % 叠氮钢、0. 5 % 阳G6000。
[0050]W上配制的五种胃蛋白酶原I检测试剂1?1巧1-4、1?1-8、1?1-(:、1?1-0、1?1-6,各试剂 的PH不同)与同一试剂R2配套使用,对待测样本胃蛋白酶原I含量进行检测。结果如表 21所示,低值RF(20IU/mL)对胃蛋白酶原I检测试剂基本没有干扰,两种高值RF都会对检 测结果造成干扰,尤其是当试剂R1抑值在7. 4时,检测结果受高值RF干扰较大,随R1抑值 降低,RF干扰逐渐降低,但抑值从6. 0到5. 5变化,对RF的抑制效果变化不大,不能完全 消除高值RF的干扰。
[0051] 表21胃蛋白酶原I检测试剂R1不同抑对类风湿因子干扰的抑制比较
[0化2]
[0053] (2)蛋白变性剂对胃蛋白酶原I检测试剂受RF干扰的抑制作用的比较
[0054] 胃蛋白酶原I检测试剂Rl-A(p册.0)aOOmMMES缓冲液、300mM化Cl、l%BSA、 0. 1 % 吐温-20、0. 1 % 叠氮钢、0. 5 % 阳G6000。
[005引 胃蛋白酶原I检测试剂Rl-B(p册.0)aOOmMMES缓冲液、300mM化Cl、l%BSA、 0. 1%吐温-20、0. 1%叠氮钢、0. 5%阳G6000、0. 01%SDS(十二烷基硫酸钢)。
[0056] 胃蛋白酶原I检测试剂Rl-C(p册.0)aOOmMMES缓冲液、300mM化Cl、l%BSA、 0. 1 % 吐温-20、0. 1 % 叠氮钢、0. 5 % 阳G6000、0. 05 %SDS。
[0057] 胃蛋白酶原I检测试剂Rl-D(p册.0)aOOmMMES缓冲液、300mM化Cl、l%BSA、 0. 1 % 吐温-20、0. 1 % 叠氮钢、0. 5 % 阳G6000、0. 1 %SDS。
[005引 胃蛋白酶原I检测试剂Rl-E(p册.0)aOOmMMES缓冲液、300mM化Cl、l%BSA、 0. 1 % 吐温-20、0. 1 % 叠氮钢、0. 5 % 阳G6000、0. 2 %SDS。
[0059] W上配制的五种胃蛋白酶原I检测试剂1?1巧1-4、1?1-8、1?1-(:、1?1-0、1?1-6,各试剂 的蛋白变性剂用量不同)与同一试剂R2配套使用,对待测样本胃蛋白酶原I含量进行检 巧。。结果如表22所示,两种RF产生的干扰效果不同,当R1抑值为6.0,样本中RF-I值高 达lOOIU/mL时,胃蛋白酶原I的检测基本不受影响,而RF-II对胃蛋白酶原I的检测干扰 较明显。通过在胃蛋白酶原I检测试剂R1中加入适量蛋白变性剂SDS,能有效抑制并消除 RF的干扰,同时不会影响对目的胃蛋白酶原I的检出含量。
[0060] 表22胃蛋白酶原I检测试剂R1中不同含量SDS对类风湿因子干扰的抑制作用
[0061]
[0062] 同时,将上述五套配制试剂与进口试剂对20份血清标本进行胃蛋白酶原I含量 的检测,并用类风湿因子检测试剂检测样本中RF含量,进一步确认SDS对血清中RF干扰的 抑制作用,并且适量SDS对胃蛋白酶原I含量的检测没有影响。试剂配方经过优化后,对血 清胃蛋白酶原I含量的检测结果与进口对照试剂基本一致(表23)。
[0063] 表23SDS有效抑制RF对胃蛋白酶原I的干扰
[0064]
[00化]w上蛋白变性剂对胃蛋白酶原I检测试剂受RF干扰的抑制作用实施方案中,蛋 白变性剂还可W用尿素或盐酸脈进行同等替换而不超出本发明要求的保护范围。蛋
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