专利名称：一种北冬虫夏草的固体培养方法
技术领域：
本发明是一种提高人工培养北冬虫夏草(简称北虫草)的功能成分含量的固体培养基配方，属于北冬虫夏草的人工栽培的技术领域。专用于提高人工栽培的北冬虫夏草子实体中的功能成分含量，有利于提高人工北冬虫夏草的保健功效和药用价值。
二、技术背景北冬虫夏草作为著名的食、药用真菌，其主要活性成分为虫草素(3’-脱氧腺苷)、虫草酸(D-甘露醇)及虫草多糖等。虫草素具有诸多生理活性成分和医疗保健功效，如抗肿瘤作用、抗病毒作用、抗菌作用、增强免疫功能作用等，并被作为衡量虫草品质好坏的主要指标。北冬虫夏草是虫草素的主要产生菌，因其培养基的配方不同，虫草菌素的含量也有所不同。用本发明提供的培养基栽培的北虫草中虫草素含量是野生冬虫夏草的几倍乃至几十倍，同时虫草酸和虫草多糖的含量也很高。提高北冬虫夏草的品质，主要就是进一步提高虫草素等活性成分的含量，特别是虫草素的含量。人们已认识到北冬虫夏草在医疗保健领域中的重要价值，正积极研究、培养和开发北冬虫夏草。
目前普遍使用的北冬虫夏草人工栽培的培养基质中缺乏专门针对提高北冬虫夏草功能成分虫草素的生物激励因子。生产的人工北虫草功能成分含量偏低。限制了北冬虫夏草的后继开发和产业化。因此、在扩大规模和增加产量的同时，提高北冬虫夏草的内外品质，已成为我们迫切需要解决的问题。
发明内容
技术问题 北虫草产生虫草菌素要求培养基能提供丝肽类营养成分，而目前的固体培养基大都采用添加蚕蛹粉提供营养物质。本发明通过改进北冬虫夏草的固体培养基配方，使得人工北虫草子实体中功能成分虫草菌素(3′-脱氧腺苷)含量提高，达到具有推广性强、效果明显，无毒副作用，无药残的目的。
技术方案 一种北冬虫夏草的固体培养方法，其特征在于1000ML虫草培养营养液中含葡萄糖15-25g、蛋白胨15-25g、硫酸镁1.5-2.5g、磷酸二氢钾0.5-1.5g、柠檬酸三氨1.5-2.5g、维生素B1200-250mg；每栽培瓶固体培养基中籼米30-40g、蚕虫粉0.5-1.5g。
上述一种北冬虫夏草的固体培养方法，其特征在于葡萄糖、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾、柠檬酸三氨、维生素B1均为分析纯。蚕虫粉为四龄蚕虫在40℃以下低温烘干后粉碎并过60目筛备用。营养液配置方法为先将葡萄糖、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾、柠檬酸三氨、维生素B1、水按比例在自来水中溶解，再添加蚕虫粉、籼米，然后混合均匀，高压灭菌1.0小时后即可。
有益效果本发明与现有的人工北虫草固体培养基质相比，具有如下优点(1)目前的北虫草人工培养基质中大都以蚕蛹粉作为北虫草生长所需要的蛋白质来源。本研究组对各种生物性和非生物性激励因子进行了优化组合研究，在配方中添加了四龄蚕虫粉，北虫草中虫草素的含量比原配方提高10％以上，北虫草产量提高10％以上。
(2)本发明采用活体四龄蚕虫低温烘干粉碎后加入培养基中，避免了采用蚕蛹粉在蚕蛹加工中引起污染。
(3)本发明所提供的培养基配方，成本低、工艺简单，生产者容易接受，具有推广性强、效果明显，无毒副作用，无药残的优点。
具体实施例方式
一种提高人工培养北冬虫夏草的功能成分含量的固体培养基配方，其组分含量为1000g虫草培养营养液中中含葡萄糖20g、蛋白胨20g、硫酸镁2g、磷酸二氢钾1g、柠檬酸三氨2g、维生素B1200mg；每栽培瓶培养基中籼米35g、蚕虫粉1g.
其制备方法为(1)、营养液配制方法准确称量上述营养液中各组分，按比例溶解于所需要量的水中，备用。
(2)、把蚕虫粉、籼米放入洗净的耐高温高压的的栽培容器(玻璃广口瓶)，每瓶放入籼米35g、蚕虫粉1g。
(3)、每瓶加入配制好的营养液55～60ML。
(4)、选用5丝的耐高温高压的聚丙烯塑料薄膜封住玻璃瓶口。
(5)、将配制好的培养基放入高压灭菌锅，在121℃、1.05Mpa的条件下保持1.0小时。
(6)、将灭菌后的培养基质放入接种室，对接种室进行整体消毒后在超净工作台中进行接种生产。
(7)接种后虫草栽培瓶放进虫草专用栽培室，按北虫草生长不同阶段的常规培养方法对其湿、光、湿度进行调控。
五、一种提高人工培养北冬虫夏草中草素含量培养基配方的功效试验试验方法由江苏省农科院食用菌研究开发中心提供北虫草生产栽培种CM-4。采用对比配方(目前现有的配方)为葡萄糖2％、蛋白胨2％、硫酸镁0.2％、磷酸二氢钾0.1％、柠檬酸三氨0.2％、维生素B1微量、籼米93％、蚕蛹粉1g、水1∶1.5，制备方法同上。每种培养基质各小试生产1000瓶。按照人工北虫草的生产工艺，培养基经接种、发菌、出草。采收得到北虫草子实体进鼓风干燥箱低温烘干至恒重。计算每瓶得产量平均值。
试验结果实验组1000瓶有污染50瓶。对照组污染120瓶。
经过计算实验组平均每瓶烘干子实体重量为2.75g，对照组每瓶平均产量为2.51g..实验组比对照组产量平均每瓶增加0.24g，产量提高10％左右。
虫草素的测定采用HPLC法测定。随机取样0.5g。样品用50％乙醇超声提取。测定条件为以AgilentODS(4.6mm×250mm，5μl)为色谱柱，检测波长260nm，流速1ml/min，柱温25℃条件，乙腈-水进行洗脱。对照品购于中国药品生物制品检定所。
经HPLC法测定虫草素含量。每组测三个平行，结果取平均值。实验组虫草素含量为1.342％，对照组虫草素含量为0.122％.虫草素含量提高了约10％。
推广验证本发明在江苏省农科院食用菌研究开发中心示范应用了3批次共5万瓶北虫草。其虫草产量和品质都比原来有很大的提高，其中虫草素的含量提高10％，其子实体的产量提高13％。符合功效试验结果。
一种提高人工培养北冬虫夏草中虫草菌素含量培养基配方功效总结经过试验和示范应用的结果，证明本发明的配方能提高人工栽培北虫草子实体中的主要功能成分的含量，虫草素的含量可提高10％左右。同时也能提高其子实体的产量10％左右。
权利要求
1.一种北冬虫夏草的固体培养方法，其特征在于
1000ML虫草培养营养液中含葡萄糖15-25g、蛋白胨15-25g、硫酸镁1.5-2.5g、磷酸二氢钾0.5-1.5g、柠檬酸三氨1.5-2.5g、维生素B1200-250mg；每栽培瓶固体培养基中籼米30-40g、蚕虫粉0.5-1.5g。
2.根据权利要求1所述一种北冬虫夏草的固体培养方法，其特征在于葡萄糖、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾、柠檬酸三氨、维生素B1均为分析纯。
3.根据权利要求1或2所述一种北冬虫夏草的固体培养方法，其特征在于蚕虫粉为四龄蚕虫在40℃以下低温烘干后粉碎并过60目筛备用。
4.根据权利要求1或2所述一种北冬虫夏草的固体培养方法，其特征在于营养液配置方法为先将葡萄糖、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾、柠檬酸三氨、维生素B1、水按比例在自来水中溶解，再添加蚕虫粉、籼米，然后混合均匀，高压灭菌1.0小时后即可。
5.根据权利要求3所述一种北冬虫夏草的固体培养方法，其特征在于营养液配置方法为先将葡萄糖、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾、柠檬酸三氨、维生素B1、水按比例在自来水中溶解，再添加蚕虫粉、籼米，然后混合均匀，高压灭菌1.0小时后即可。
全文摘要
本发明公开了一种北冬虫夏草的固体培养方法，属于北冬虫夏草的人工栽培的技术领域。目前还未见相同的培养基报道。含葡萄糖、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾、柠檬酸三氨、维生素B
文档编号A01G1/04GK1650686SQ20051003762
公开日2005年8月10日 申请日期2005年1月6日 优先权日2005年1月6日
发明者张平, 蒋宁 申请人:江苏省农业科学院