取 纤维头顶空吸附30min收集挥发性物质，GC/MS进样分析检测，以无菌麦麸作为空白对照；
[0039] 气相色谱条件：色谱柱型号：VF-5MS30mX0.25mmX0.25ym;进样口温度： 250°C;载气：He，纯度99. 999% ;分流比：10:1 ;流速：lmL/min;程序升温：初始温度40°C， 保持3min，以4°C/min升至150°C，保持lmin，以8°C/min升至250°C，保持6min，根据气相 色谱峰面积归一法确定各组分含量；
[0040]质谱条件：质量分离器：离子阱；离子源：EI;电离能量：70eV;离子阱温度： 220°C;传输线温度：280°C;溶剂延迟时间：1. 5min;全扫描方式；扫描范围：43-500m/z;检 索谱库：NIST05。
[0041] 本发明取得的优点和积极效果是：
[0042] L本发明将白黄链霉菌（Streptomycesalboflavus)TD-I应用在番前灰霉病害 防治中，该白黄链霉菌对番茄灰霉病具有较强的抑制效果，为生物防治灰霉病害提供了一 种新的微生物菌株，将其应用在番茄灰霉病害防治中，长期使用不会造成环境污染、残毒积 累，不会危及人畜健康。
[0043] 2?本发明是利用白黄链霉菌（Streptomycesalboflavus)TD-I液体发酵培养后 获得的发酵液防治灰霉病，该发酵液应用于植物真菌病害的生物防治，为微生物应用于生 物防治的开发提供了新的途径。
[0044] 3?本发明是利用白黄链霉菌（Streptomycesalboflavus)TD-I麦麸培养物产生 的挥发性物质防治灰霉病，和直接接触防病相比，具有更加安全、方便的优势，有利于开发 为微生物熏蒸剂。
[0045] 4.本发明以灰霉病菌为指示菌，在离体条件下对S.alboflavusTD-I代谢产生的 挥发性物质进行了抑菌活性实验，结果表明：VOCs能有效的抑制灰霉病菌菌丝生长和产孢 量，并使细胞膜通透性增大、细胞形态异常、菌丝表面粗糙、分节增多。此现象可以为将该菌 作为生物熏蒸剂的来源提供依据，有实际应用价值。
【附图说明】
[0046] 图1为本发明白黄链霉菌TD-I在高氏1号培养基上划线培养的菌落形态图；
[0047] 图2为本发明白黄链霉菌TD-I与灰霉病菌的对峙培养图，其中图2-1为对照组， 图2-2为处理组；
[0048] 图3为本发明白黄链霉菌TD-I发酵液对灰霉病菌丝生长的抑制图，其中A为对照 组，B为发酵液稀释15倍组，C为稀释10倍组，D为稀释5倍组，E为发酵原液组；
[0049] 图4为本发明白黄链霉菌TD-I对灰霉病菌孢子萌发抑制图；
[0050] 图5为本发明白黄链霉菌TD-I麦麸培养物产生的挥发性物质对灰霉病菌的抑制 效果图，其中5-1为对照组，5-2为处理组；
[0051] 图6为本发明白黄链霉菌TD-IVOCs对灰霉病菌产孢能力的影响图；
[0052] 图7为本发明白黄链霉菌TD-IVOCs对灰霉病菌细胞膜通透性的影响图；
[0053] 图8为本发明白黄链霉菌生物显微镜观察TD-IVOCs对灰霉病菌孢子和菌丝影响 图；其中，（A)正常菌丝及孢子；(B)受VOCs抑制的菌丝；（C)正常萌发的孢子；(D)受VOCs 抑制的孢子；
[0054] 图9为本发明白黄链霉菌扫描电子显微镜观察TD-IVOCs对灰霉病菌菌丝形态的 影响图；其中，（A)正常菌丝及孢子；(B)受抑制菌丝及孢子；
[0055] 图10为本发明白黄链霉菌TD-I挥发性物质对离体果实上灰霉病菌的防治效果 图；其中，A为挥发物质作用组（观察4d) ;B为空白对照组（观察4d) ;C为挥发物质作用组 (观察l〇d) ;D为空白对照组（观察IOd);
[0056] 图11为本发明发酵8d的白黄链霉菌TD-I麦麸培养物VOCs总离子流图；
[0057] 图12为本发明白黄链霉菌TD-I抑制番茄灰霉病的离体叶片试验图，其中图12-1 为对照组，图12-2为处理组；
[0058] 图13为本发明白黄链霉菌TD-I抑制番茄灰霉病的盆栽试验图，其中图13-1为对 照组，图13-2为处理组。
【具体实施方式】
[0059] 为能进一步了解本发明的内容、特点及功效，兹例举以下实施例，并配合附图详细 说明如下。需要说明的是，本实施例是描述性的，不是限定性的，不能由此限定本发明的保 护范围。
[0060] 本发明中所使用的试剂，如无特殊规定，均为本领域的常规试剂；本发明中所使用 的方法，如无特殊规定，均为本领域的常规方法。
[0061] -种白黄链霉菌（StreptomycesalbofIavus)在番前灰霉病害防治中的应用，本 发明所使用的白黄链霉菌TD-1，是从天津市宝坻区饲料厂储粮仓周围的土壤中分离得到 的，属于放线菌目（Actinomycete)，链霉菌属（Streptomyces)，已于2011年3月15日保藏 在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCCNo. 4666,地址：北京 市朝阳区北辰西路1号院3号，本发明白黄链霉菌TD-I在高氏1号培养基上划线培养的菌 落形态图见图1，所述白黄链霉菌TD-I的活菌体、发酵液、麦麸培养物、麦麸培养物的固态 菌剂或麦麸培养物产生的挥发性物质均可以应用在番茄灰霉病防治中。
[0062] 在本发明中，所述白黄链霉菌TD-I的发酵液的制备步骤可以如下：
[0063] (1)菌种的活化培养：
[0064] 将分离保存的白黄链霉菌（Streptomycesalboflavus)TD-1菌株转接到PDA固体 培养基上，30°C条件下培养5-6d，保存备用。
[0065] (2)菌株ID-I孢子悬浮液的制备：
[0066] 取PDA平板上活化的白黄链霉菌TD-1，用无菌水洗下平板表面的孢子，配成孢子 悬浮液，并调整孢子浓度为I. 〇XIO6个/mL。
[0067] (3)菌株TD-I种子培养液的制备：
[0068] 种子液培养基为每1000 mL水中含有可溶性淀粉，20.Og;黄豆粉，10.Og;KN03， I.Og;K2HP04,0.5g;NaCl，0.5g;MgS04.7H20,0.5g;FeS04.7H20,0. 01g，每 250mL三角瓶装培 养基IOOmL;配制后121°C灭菌20min，待冷却后在无菌条件下按1%的接种量将TD-I孢子 悬浮液接种于培养基内，30°C，180r/min摇床培养48h，得到菌株TD-I种子液。
[0069] (4)ID-I菌株发酵液的制备：
[0070]TD-I菌株发酵培养基的配制与（3)中种子液培养基配方一致，121°C灭菌20min， 待冷却后在无菌条件下按1〇%的比例接种了〇-1种子液，3〇1：，18〇1'/1^11摇床培养6(1， 5000r/min离心15min，取上清液备用，用于对灰霉菌抑菌活性的检测。
[0071] 在本发明中，所述白黄链霉菌TD-I的麦麸培养物的制备步骤可以如下：
[0072] 称取20_30g的干燥麦麸，按照料水比1:1的比例添加蒸馏水，121 °C灭菌20min，冷 却后按20%的比例接种链霉菌TD-I的种子培养液，在30°C条件下培养8d，称取一定量的麦 麸培养物用平皿对扣实验测定抑菌活性，结果表明，TD-I麦麸培养物的抑菌率为55. 43%。
[0073] 在本发明中，所述白黄链霉菌TD-I麦麸培养物的固态菌剂的制备步骤可以如下：
[0074] 称取20_30g的无菌麦麸，按20%的接种量，接种链霉菌TD-I种子液，30°C发酵 2d，待菌种适应生长环境后，将发酵物置于30°C烘箱中干燥24h，再按2%(mL/g)的比例添 加司盘60:吐温80(1:1)乳化剂到干燥后的固态发酵物中，分装于自封袋中4°C条件下保存 两个月后，复水活化，用平皿对扣实验测定抑菌活性，结果表明，抑菌率为40. 85%。
[0075] 本发明白黄链霉菌TD-I的相关应用的相关验证结果：
[0076] -、白黄链霉菌TD-I活菌体对灰霉病菌的拮抗效果
[0077] 采用平板对峙法，测定链霉菌TD-I对灰霉病菌的拮抗效果。在无菌的PDA平板上 以原点为中心划十字线，中心点接链霉菌TD-I菌饼= 6.Omm)，以中心点接无菌PDA菌 饼为对照，于28°C培养3d后，在两条直线的两端距中心相同距离处接已培养好的灰霉菌菌 饼（菌饼直径=6.Omm)，但不能与TD-I相连，于28°C培养4-5d，测定抑菌带宽度，按以下公 式计算抑菌率，做3次重复。
[0078] 抑菌率=(对照菌落抑菌带宽度一处理菌落抑菌带宽度）/对照菌落抑菌带宽 度X100%〇
[0079] 实验结果见附图2,结果表明：链霉菌TD-I对灰霉病菌有抑制作用，能在平皿内产 生明显的抑菌带，抑菌带平均宽度为11. 69mm，抑菌率为87. 17%。
[0080] 二、白黄链霉菌TD-I发酵液对灰霉菌的抑制效果
[0081](一）链霉菌TD-I发酵液对灰霉菌菌丝生长的抑制作用
[0082]TD-I发酵上清液加入到融化的PDA培养基中，制成不同浓度发酵液平板（稀释15 倍、稀释10倍、稀释5倍、发酵原液），以不加发酵液的PDA平板作为空白对照，再将制备好 的灰霉病菌的菌饼=6.Omm)置于平板中央，于25°C下培养5d。用十字交叉法测量供 试真菌菌落生长直径，重复3次，计算菌丝生