专利名称：一株金黄垂直链霉菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株金黄垂直链霉菌及其应用。
背景技术：
植物病害生物防治强调生态系统的良性循环和环境保护，可以有效地避免化学农药所带来的一系列问题，由于其社会效益、生态效益、长远利益显著而愈来愈引起人们的重视。随着人们对生态平衡和绿色健康概念越来越重视，生物防治措施在农业生产中得到了前所未有的关注。进入21世纪以来，各国政府和民众更加重视生物农药的开发和应用，生物农药在整个农药市场的份额正在逐年上升。在环境污染日益严重的今天，生物防治更是农业发展的必由之路。放线菌是最早应用到生产中的生防微生物，其重要经济价值是由于它们所产生的抗生素能有效地防治人类和动物的传染性病害，特别是细菌性的病害以及农作物的某些病害，其在植物病害生物防治中发挥了巨大的作用。目前从微生物中发现的大约8000种生物活性物质中，有近70%是放线菌产生的。利用放线菌的次生代谢产物-抗生素制备的新农药，由于其具有无污染、无残留、可再生、易于产业化、成本低等特点已成为无公害农药的主体和未来农药的发展方向。
发明内容
本发明的一个目的是提供一株金黄垂直链霉菌。本发明所提供的金黄垂直链霉菌为金黄垂直链霉菌(Sti^ptomyces aureoverticillatus)HN6，其保藏编号为 CCTCC No. M2010293o本发明的另一个目的是提供一种用于生物防治植物病害的菌剂。本发明所提供的用于生物防治植物病害的菌剂，其活性成分为金黄垂直链霉菌 (Streptomyces aureovertici 1 latus)HN6CCTCC No. M2010293 或发酵金黄垂直链霉菌 (Streptomyces aureovertici 1 latus)HN6CCTCC No. M2010293 得到的发酵液。上述菌剂中，所述植物病害为香蕉枯萎病。上述任一所述菌剂中，所述香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)弓丨起的；所述尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)具体为尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)[艮口尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense) F0C4]。金黄垂直链霉菌(Str印tomycesaureovertici 1 latus) HN6CCTCC Νο·Μ2010293在生物防治植物病害中的应用也属于本发明的保护范围。上述应用中，所述植物病害为香蕉枯萎病。上述任一所述应用中，所述香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型 (Fusariumoxysporum f. sp. cubense)弓|起的；所述尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)具体为尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)[艮口尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp.cubense)F0C4]。金黄垂直链霉菌(Sti^ptomycesaureovertici 1 latus) HN6CCTCC Νο·Μ2010293在拮抗细菌和/或真菌中的应用也属于本发明的保护范围；所述应用中不包括疾病的治疗方法。上述应用中，所述细菌为如下中的至少一种丁香假单胞菌(I^eudomonas syringae)、古月萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora var. carotovora)、苜猜黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris pv. alfalfae)、马铃薯环腐棒杆菌(Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus)、i^|状芽 包杆菌(Bacillus cereus)禾口金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)；所述真菌为如下中的至少一种尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)、苜猜镰孢菌(Fusarium solani)、苜猜尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、燕麦键抱菌(Fusarium avenaceum)、苜猜匍柄霉(Stemphylium botryosum)、 立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、禾谷镰孢菌(Peronospora aestivalis)、半裸镰刀菌(Fusarium semitectum)、瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)、苜猜壳针抱叶斑病菌(Septoria medicaginis)、灰葡萄抱(Botrytis cinerea)、瓜类壳二抱(Ascochyta citrullina)、大 _ 轮枝菌(Verticillium dahlia)、禾顶囊壳(Gaeumannomyces graminis)、月交 包炭Si 菌(Colletotrichum gloeosporioides)、禾弯抱霄菌(Curvularia lunata)、大斑突 M 3 (Exserohilumleonard turcicum)、1 (疫 β 菌(Phytophthora capsici)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)禾口粉红聚端抱(Trichothecium roseum)。中，古月胃卜 @冑11^ :! (Erwinia carotovora var. carotovora) 为胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora var. carotovora)CGMCC 1.1000,所述马
(Clavibacter michiganensis subsp. Sepedonicus) |if (Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus)ACCC 01233，所述M状芽 包杆菌 (Bacillus cereus)为赌状芽孢杆菌(Bacillus cereus)CGMCC 1. ；348，所述金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ACCCO1336 ；上述应用中，所述尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense) 为尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)4号生理小种[即尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)F0C4]，所述燕麦镰孢菌 (Fusarium avenaceum)为燕麦镰孢菌(Fusarium avenaceum)ACCC 30065,所述立枯丝核菌 (Rhizoctonia solani)为立枯丝核菌(Rhizoctonia solani) ACCC 30332，所述禾谷镰孢菌 (Peronospora aestivalis) ^/7^ 1! (Peronospora aestivalis)ACCC 30068,
裸镰刀菌(Fusarium semitectum)为半裸镰刀菌(Fusarium semitectum)ACCC31945，所述 /1^ ^ (Pythium aphanidermatum)为/11 ] (Pythium aphanidermatum)ACCC 36125, 所述灰葡萄孢(Botrytis cinerea)为灰葡萄孢(Botrytis cinerea)ACCC30091，所述瓜类壳二孢(Ascochyta citrullina)为瓜类壳二孢(Ascochyta citrullina)ACCC 36440，所述大丽轮枝菌(Verticillium dahlia)为大丽轮枝菌(Verticillium dahlia)ACCC 36109， 所述禾顶囊壳(Gaeumannomyces graminis)为禾顶囊壳(Gaeumannomyces graminis) ACCC 30310，所述禾弯孢霉菌(Curvularia lunata)为禾弯孢霉菌(Curvularia lunata) ACCC 36580，所述辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)为辣椒疫霉菌(Phytophthoracapsici) ACCC 36279,所述核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)为核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)ACCC 30096，所述粉红聚端孢(Trichothecium roseum)为粉红聚端孢 (Trichothecium roseum)ACCC 36459。本发明的另一个目的是提供一种细菌和/或真菌的拮抗剂。本发明所提供的细菌和/或真菌的拮抗剂，其活性成分为金黄垂直链霉菌 (Streptomyces aureovertici1latus)HN6CCTCC No. M2010293。上述拮抗剂中，所述细菌为如下中的至少一种丁香假单胞菌O^eudomonas syringae)、古月萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora var. carotovora)、苜猜黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris pv. alfalfae)、马铃薯环腐棒杆菌(Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus)、錯状芽抱杆菌(Bacillus cereus)禾口金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)；所述真菌为如下中的至少一种尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)、苜猜前镰孢菌(Fusarium solani)、苜猜尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、燕麦德抱菌(Fusarium avenaceum)、苜猜匍柄霉(Stemphylium botryosum)、 立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、禾谷镰孢菌(Peronospora aestivalis)、半裸镰刀菌(Fusarium semi tectum)、瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)、苜猜壳针抱叶斑病菌(Septoria medicaginis)、灰葡萄抱(Botrytis cinerea)、瓜类壳二抱(Ascochyta citrullina)、大 HI3 轮枝菌(Verticillium dahlia)、禾丁页囊壳(Gaeumannomyces graminis)、胶抱炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、禾弯抱霉菌(Curvularia lunata)、大斑突赃抱(Exserohilumleonard turcicum)、辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)禾口粉红聚端抱(Trichothecium roseum)。上述拮抗剂中，所述胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora var. carotovora)力古月胃卜&冑1^ " (Erwinia carotovora var. carotovora)CGMCC L 1000，所述马铃薯环腐棒杆菌(Clavibacter michiganensis subsp. Sepedonicus)为马铃薯环腐棒杆菌(Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus) ACCC 01233，所述蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)为錯状芽孢杆菌(Bacillus cereus)CGMCC 1.348，所述金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) ACCCO1336 ；上述拮抗剂中，所述尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)为尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)4号生理小禾中 [即尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense) F0C4]，所述燕麦镰孢菌 (Fusarium avenaceum)为燕麦镰孢菌(Fusarium avenaceum) ACCC 30065，所述立枯丝核菌 (Rhizoctonia solani)为立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)ACCC 30332，所述禾谷镰孢菌 (Peronospora aestivalis)为禾谷,廉抱菌(Peronospora aestivalis)ACCC 30068，所述半裸镰刀菌(Fusarium semitectum)为半裸镰刀菌(Fusarium semitectum)ACCC31945，所述瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)为瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum) ACCC 36125， 所述灰葡萄孢(Botrytis cinerea)为灰葡萄孢(Botrytis cinerea)ACCC30091，所述瓜类壳二孢(Ascochyta citrullina)为瓜类壳二孢(Ascochyta citrullina)ACCC 36440，所述大丽轮枝菌(Verticillium dahlia)为大丽轮枝菌(Verticillium dahlia)ACCC 36109，所述禾顶囊壳(Gaeumannomyces graminis)为禾顶囊壳(Gaeumannomyces graminis) ACCC 30310，所述禾弯孢霉菌(Curvularia lunata)为禾弯孢霉菌(Curvularia lunata) ACCC 36580，所述辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)为辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici) ACCC 36279,所述核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)为核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)ACCC 30096，所述粉红聚端孢(Trichothecium roseum)为粉红聚端孢 (Trichothecium roseum)ACCC 36459。本发明首次从海南省植物园园区土壤样品中分离筛选到一株金黄垂直链霉菌 (Streptomyces aureoverticillatus)HN6，实验证明，该菌株对20种病原真菌和6种病原细菌有显著拮抗作用，抗菌谱广，且该菌株对香蕉枯萎病有很好的防治效果，因此，本发明菌株在植物病害的生物防治领域将有广阔的应用前景。
图1为菌株HN6气生菌丝及孢子、孢子丝形态图。图2为HN6菌株系统进化树构建。
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、菌的分离和鉴定一、菌株的分离高氏一号培养基按照如下方法制备将可溶性淀粉20g、琼脂20g、KN03lg、 K2HPO4O. 5g、MgSO4 · 7H20 0. 5g、NaCl 0. 5g、FeSO4 · 7H20 0. Olg 和蒸溜水 IOOOmL 混合，得到的混合物即为高氏一号培养基；高氏一号培养基的PH 7. 2-7. 4。PDA平板马铃薯(去皮)200g加入IOOOmL蒸馏水，煮30min，过滤，滤液用蒸馏水补足至IOOOmL,加入蔗糖(或葡萄糖)20g、琼脂粉20g，pH自然。植物病原真菌为尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense F0C4)在文献“麦明晓，黄惠琴，鲍时翔.香蕉镰刀菌枯萎病4号生理小种研究进展[J].中国生物防治，2009，25 (增1) :71-75. ”中公开过，公众可从海南大学获得。采用平板稀释法分离放线菌菌株土样采自海南省植物园，称取土样25g加入到 225mL无菌水中，180r/min摇床振荡15min，静置IOmin后，用无菌水将上清液依次稀释至 10_2、10-3、10-4、10_5、10-6。用移液器吸取不同浓度的稀释液均勻涂布接种于高氏一号平板表面，每浓度3次重复，置于的培养箱中培养5-10d，观察菌落生长情况。挑取单菌落稀释划线法纯化培养菌株。纯化后的放线菌在高氏一号培养基上繁殖保存。共获得89株放线菌。皿内抑菌活性筛选试验将89株放线菌接种于高氏一号培养平板内培养 5d，待用。植物病原真菌接种于PDA平板，25°C培养5d，待用。菌株的筛选采用平板对峙法对供试放线菌进行抑菌活性的初筛将培养好的放线菌用灭菌打孔器取直径5mm的菌碟置于12cm PDA平板中间，然后将同样大小尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense F0C4)菌饼对峙接于距放线菌4cm处，
625°C下培养5d，测量抑(溶)菌圈的直径，筛选抑(溶)菌圈直径> 35cm菌株。最终获得 1株目的菌株，将其命名为HN6。二、菌株的鉴定1、菌丝形态及培养特征观察将菌株HN6在高氏一号培养基上培养7d后，用普通显微镜及扫描电镜进行常规的菌丝形态观察、照相。结果如图1所示。结果显示菌株HN6菌落较小，干燥，气生菌丝茂盛，呈粉白色，基内菌丝橙红色，无可溶性色素。经普通显微镜及扫描电镜进行菌丝形态观察发现，菌株气生菌丝纤细、多分枝，孢子丝直，孢子圆柱形。在高氏一号、察氏、葡萄糖-天冬素、克氏一号、马铃薯浸汁、葡萄糖酵母膏琼脂及马铃薯块培养基上接种菌株HN6，置于培养，定期观察其菌落特征及菌体颜色，并记载气生菌丝的颜色、基质丝体的颜色和可溶性色素的颜色，作为鉴定种的依据。HN6在各种培养基上的特征如表1，可见该菌在不同的培养基上的培养性状是不同的，另外该菌只在葡萄糖酵母膏琼脂上会产生可溶性色素外，在其他几种供试培养基上都不产生色素。 表1、菌株HN6的培养特征
权利要求
1.金黄垂直链霉菌(Sti^ptomycesaureoverticillatus)HN6，其保藏编号为 CCTCC No.M2010293。
2.一种用于生物防治植物病害的菌剂，其活性成分为金黄垂直链霉菌(Sti^ptomyces aureoverticillatus)HN6CCTCC No. M2010293 或发酵金黄垂直链霉菌(Sti^ptomyces aureoverticillatus)HN6CCTCC No. M2010293 得到的发酵液。
3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于所述植物病害为香蕉枯萎病。
4.根据权利要求3所述的菌剂，其特征在于所述香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)弓I起的。
5.金黄垂直链霉菌(Sti^ptomycesaureovertici 1 latus) HN6CCTCC No. M2010293 在生物防治植物病害中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述植物病害为香蕉枯萎病。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)弓I起的。
8.金黄垂直链霉菌(Str印tomycesaureovertici 1 latus) HN6CCTCC No. M2010293在拮抗细菌和/或真菌中的应用；所述应用中不包括疾病的治疗方法。
9.细菌和/或真菌的拮抗剂，其活性成分为金黄垂直链霉菌(Streptomyces aureoverticillatus)HN6CCTCC No.M2010293。
10.根据权利要求8所述的应用或权利要求9所述的拮抗剂，其特征在于所述细菌为如下中的至少一种丁香假单胞菌O^seudomonas syringae)、胡萝卜软腐欧文氏菌 (Erwinia carotovora var. carotovora)、首猜黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris pv. alfalfae)、马胃(Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus) 状芽孢杆菌(Bacillus cereus)禾口金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)；所述真菌为如下中的至少一种尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense)、苜猜前德抱菌(Fusarium solani)、苜猜尖抱德刀菌(Fusarium oxysporum)、 燕麦镰孢菌(Fusarium avenaceum)、苜猜匍柄霉(Stemphylium botryosum)、立枯丝核菌 (Rhizoctonia solani)、禾谷,廉抱菌(Peronospora aestivalis)、半裸,廉刀菌(Fusarium semitectum)、瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)、苜猜壳针孢叶斑病菌(Septoria medicaginis)、灰葡萄抱(Botrytis cinerea)、瓜类壳二抱(Ascochyta citrullina)、 大 I 轮枝菌(Verticillium dahlia)、禾丁页囊壳(Gaeumannomyces graminis)、胶抱炭 Ia M (Colletotrichum gloeosporioides)、弯子包毒菌(Curvularia lunata)、大斑突赃抱(Exserohilumleonard turcicum)、辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、核盘菌 (Sclerotiniasclerotiorum)禾口粉红聚端抱(Trichothecium roseum)。
全文摘要
本发明公开了一株金黄垂直链霉菌及其应用。该金黄垂直链霉菌为金黄垂直链霉菌(Streptomyces aureoverticillatus)HN6，其保藏编号为CCTCC No.M2010293。本发明的链霉菌能拮抗多种真菌和细菌，且对香蕉枯萎病的防治效果好，因此，本发明链霉菌在植物病害的生物防治领域将有广阔的应用前景。
文档编号A01P3/00GK102206593SQ20111006214
公开日2011年10月5日 申请日期2011年3月15日 优先权日2011年3月15日
发明者徐林波, 狄彩霞, 王兰英, 穆大伟, 骆焱平 申请人:海南大学