[0039]2.接种及无菌系的建立:
[0040]用无菌摄子将切好的叶片，平放在无菌培养基面上，划过伤口的那侧向下接触培养基，拧紧无菌培养基瓶口，做好记号，放入光照培养箱培养，调节温度为25摄氏度，光照时间为16小时/天，培养1-2周，外植体迅速膨大，产生愈伤组织，并在部分边缘分化出幼苗。
[0041]3.转接与扩繁:
[0042]将分化的外植体取出，切成小段，接种在本发明的专用培养基上，其中2，4-D含量为0.25mg/L，继续培养2-3周后，能够获得大量愈伤组织和无菌丛生芽，增殖量为不含2，4-0的2.3倍。重复以上过程，丛生芽数量迅速增加。此时选取大的芽体单个切下，放入壮苗培养基或生根培养基上，培养2-3周后，将植株取出，洗去培养基，放入阴凉处晾干1-2天，即可移栽到培养土中，获得十二卷属多肉植物幼苗。
[0043]实施例4:
[0044]1.外植体的选择和消毒:
[0045]取生长发育良好的待组培植株侧芽放到清水中冲洗，再放入质量含量约为5%的多菌灵溶液中浸泡10-15分钟，再用清水冲洗干净。
[0046]在超净工作台上放入无菌瓶中倒I %氯化汞溶液处理3-5分钟(根据幼嫩程度和污染程度决定浸泡时间长短)，倒出氯化汞溶液，用冷却的无菌水冲洗3-6次，待接种。
[0047]2.接种及无菌系的建立:
[0048]用无菌摄子将消毒后的侧芽直接斜插入无菌培养基上，顶端向上，拧紧无菌培养基瓶口，做好记号，放入光照培养箱培养，控制温度为25摄氏度，光照时间为16小时/天。培养1-2周，外植体迅速膨大，获得愈伤组织和丛生芽。
[0049]3.转接与扩繁:
[0050]将分化的外植体取出，切成小段，接种在本发明的专用培养基上，其中2，4-D含量为0.lmg/L，继续培养2-3周后，能够获得大量愈伤组织和无菌丛生芽，增值量为不含有2，4-D培养基增殖量的2.2倍。重复以上过程，丛生芽数量迅速增加。此时选取大的芽体单个切下，放入壮苗培养基或生根培养基上，培养2-3周后，可将植株取出，洗出培养基，放入阴凉处晾干1-2天，即可移栽到培养土中，获得十二卷属多肉植物幼苗。
[0051]实施例5:
[0052]1.外植体的选择和消毒:
[0053]取生长发育良好的待组培植株侧芽放到清水中冲洗，再放入质量含量约为5%的多菌灵溶液中浸泡10-15分钟，再用清水冲洗干净。
[0054]在超净工作台上放入无菌瓶中倒I %氯化汞溶液处理3-5分钟(根据幼嫩程度和污染程度决定浸泡时间长短)，倒出氯化汞溶液，用冷却的无菌水冲洗3-6次，待接种。
[0055]2.接种及无菌系的建立:
[0056]用无菌摄子将消毒后的侧芽直接斜插入无菌培养基上，顶端向上，拧紧无菌培养基瓶口，做好记号，放入光照培养箱培养，控制温度为25摄氏度，光照时间为16小时/天。培养1-2周，外植体迅速膨大，获得愈伤组织和丛生芽。
[0057]3.转接与扩繁:
[0058]将分化的外植体取出，切成小段，接种在本发明的专用培养基上，其中2，4-D含量为0.15mg/L，继续培养2-3周后，能够获得无菌丛生芽，重复以上过程，愈伤组织和丛生芽数量迅速增加，增殖量为不添加2，4-D培养基增殖量的2.5倍。此时选取大的芽体单个切下，放入壮苗培养基或生根培养基上，培养2-3周后，可将植株取出，洗出培养基，放入阴凉处晾干1-2天，即可移栽到培养土中，获得十二卷属多肉植物幼苗。
[0059]实施例6:
[0060]1.外植体的选择和消毒:
[0061]取生长发育良好的待组培植株侧芽放到清水中冲洗，再放入质量含量约为5%的多菌灵溶液中浸泡10-15分钟，再用清水冲洗干净。
[0062]在超净工作台上放入无菌瓶中倒I %氯化汞溶液处理3-5分钟(根据幼嫩程度和污染程度决定浸泡时间长短)，倒出氯化汞溶液，用冷却的无菌水冲洗3-6次，待接种。
[0063]2.接种及无菌系的建立:
[0064]用无菌摄子将消毒后的侧芽直接斜插入无菌培养基上，顶端向上，拧紧无菌培养基瓶口，做好记号，放入光照培养箱培养，控制温度为25摄氏度，光照时间为16小时/天。培养1-2周，外植体迅速膨大，获得愈伤组织和丛生芽。
[0065]3.转接与扩繁:
[0066]将分化的外植体取出，切成小段，接种在本发明的专用培养基上，其中2，4-D含量为0.25mg/L，继续培养2-3周后，能够获得无菌丛生芽，重复以上过程，愈伤组织和丛生芽数量迅速增加，增殖量为不添加2，4-D培养基的2.1倍。此时选取大的芽体单个切下，放入壮苗培养基或生根培养基上，培养2-3周后，可将植株取出，洗出培养基，放入阴凉处晾干1-2天，即可移栽到培养土中，获得十二卷属多肉植物幼苗。
【主权项】
1.一种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基及组培方法，其特征是该专用培养基的成分是:基础培养基以及低剂量的2，4-D ; 所述基础培养基成分为:MS20g、卡拉胶lg、6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)0.lmg, KT (氯吡脲)0.5mg ； 所述2，4-D为2，4- 二氯苯氧乙酸，含量范围是0.1-0.25mg/L。2.根据权利要求1所述的一种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基及组培方法，其特征在于，是经过如下步骤: (1)外植体的选择和消毒 取生长发育很好的待组培的植株的叶片(或侧芽)，进行消毒，切成I X Icm2大小，背面划伤的叶片，待接种； (2)接种及无菌系的建立 用无菌摄子将切好的叶片接种到无菌培养基上(侧芽直接斜插入，顶端向上)，叶片平放在无菌培养基面上，划过伤口的那侧向下接触培养基，1-2周后外置体迅速膨大，部分边缘分化出小苗，获得无菌系； (3)转接与扩繁 将获得的无菌系，切成小段，接种在本发明的增殖培养基上，含有0.1-0.25mg/L的2，4-D，进行增殖培养2-3周后，将大的植株单个切下，放入壮苗培养基或生根培养基上，继续培养2-3周，可将植株取出，洗出培养基，放入阴凉处晾干1-2天，移栽到培养土中，即可获得十二卷属植株幼苗。3.根据权利要求2所述一种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基及组培方法，其特征在于，所述步骤(I)中的消毒方法为:将选好的叶片或侧芽用清水中冲洗，放入含量约为5%的多菌灵溶液中浸泡10-15分钟，再用清水冲洗干净；在超净工作台上放入无菌瓶中用I %氯化汞溶液处理3-5分钟(根据幼嫩程度和污染程度决定浸泡时间长短)，倒出氯化汞溶液，用冷却无菌水冲洗3-6次。叶片(或侧芽)切割过程需放到无菌培养皿上，并采用无菌刀片。4.根据权利要求2所述的一种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基及组培方法，其特征在于，所述步骤(2)中的无菌培养基为灭菌后的基础培养基。5.根据权利要求2所述的一种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基及组培方法，其特征在于，所述步骤(2)中的无菌系建立的培养条件是:将接种好的无菌培养基瓶拧紧，放于光照培养箱中进行培养，控制培养箱的温度为25摄氏度，光照时间为16小时/天。6.根据权利要求2所述的一种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基及组培方法，其特征在于，所述步骤(3)中的增殖培养过程可重复操作，可将增殖出的组织或植株作为无菌系接种于本发明的增殖培养基上，进行继代培养。
【专利摘要】本发明提供一种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基及组培方法，其特征在于,专用培养基的成分为础培养基以及低剂量的2,4-D，组培方法包括如下步骤：(1)外植体的选择和消毒，(2)接种及无菌系的建立，(3)转接与扩繁。本发明能够解决十二卷属多肉植物组培繁殖率低的问题，显著提高十二卷属植物的繁殖速度，降低了整个组培成本，提高了产品上市速度。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105010147
【申请号】CN201510502501
【发明人】夏时云, 韩伟, 丁亮
【申请人】泓柯（天津）农业科技有限公司
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年8月14日