专利名称：单链抗体a1－甲基对硫磷水解酶融合蛋白及其制备方法
技术领域：
本发明涉及水产养殖生物病毒抗体，更具体涉及对虾白斑综合症病毒单链抗体和甲基对硫磷水解酶融合蛋白。
背景技术：
1993年以来，我国虾病爆发性流行，引起养殖的对虾大面积死亡，经济损失惨重。研究表明，其主要是由一种新的对虾白斑综合症病毒所致。该病毒可以感染我国所有人工养殖的对虾种类，感染性强，发病快，死亡率高，给对虾养殖业带来极大的危害。目前，对对虾病毒病尚无有效的治疗方法，避免与病毒病源接触被认为是最有效的预防措施，而这主要依赖于早期的快速诊断。目前的诊断方法主要有核酸探针技术和酶联免疫吸附技术。核酸探针技术对技术条件要求高，广大虾农掌握此技术难度很大，难以推广；酶联免疫吸附技术虽可在养虾场应用，但由于此法所需的多克隆抗体和单克隆抗体制备麻烦、费用高，限制了该技术的应用和发展。为此我们利用目前最先进的制备抗体的方法——噬菌体展示技术，制备了特异识别对虾白斑综合症病毒的单链抗体A1。
“一种识别对虾白斑杆状病毒的单链抗体A1极其用途”，专利号ZL00131231.6。该专利是用噬菌体抗体展示的新技术，制备出识别对虾白斑杆状病毒的单链抗体A1。关于“对虾白斑杆状病毒”的名称现在由国际病毒命名委员会统一命名为“对虾白斑综合症病毒”(www.ncbi.nlm.nih.gov/ICTVdb/Ictv/index.htm)。因此，本发明所述的“对虾白斑综合症病毒”即为专利号ZL00131231.6中的“对虾白斑杆状病毒”。
用对虾白斑综合症病毒的单链抗体A1检测对虾白斑综合症病毒的过程为先将对虾血淋巴液点在硝酸纤维素膜上，然后与单链抗体A1相互作用，然后再用识别单链抗体上的E-tag的抗体作为二抗，与A1结合，最后通过测定与二抗偶联的辣根过氧化物酶的活力确定病毒的含量。虽然该检测方法所用抗体的制备，比传统的多克隆抗体和单克隆抗体更简便，成本更低，但在检测程序上还是需要二抗及其偶联其上的辣根过氧化物酶用于颜色反应。
甲基对硫磷水解酶是由楚晓娜、张先恩等于2003年筛选出的一株甲基对硫磷降解菌(Pseudomonas sp.WBC-3)中分离确定的(“假单胞菌WBC-3甲基对硫磷水解酶性质的初步研究”《微生物学报》2003，43(4)453-459)。该论文介绍了甲基对硫磷水解酶可以甲基对硫磷为唯一碳源、氮源，将其彻底降解为生长基质。定位于大质粒上的甲基对硫磷水解酶基因是一个新的基因，命名为mph。甲基对硫磷水解酶作为标记酶具有以下优点1)甲基对硫磷水解酶(MPH)的分子量较小适合与其它蛋白进行融合；2)其检测底物范围较广，相对于碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶标记酶，其底物价格低廉，其产物在405nm处有特定的吸收峰，可以方便地进行检测；3)此外，它可以在大肠杆菌表达系统中进行表达，生长周期相对于酵母短，更适合于大规模的生产；4)其最大的优点在于其与底物反应速度快、反应灵敏，能够在短时间内检测到酶的存在。此外，对虾血淋巴液中具有较强的与碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶底物反应的活力，却没有与甲基对硫磷水解酶底物反应的活力。因此，用甲基对硫磷水解酶作为标记酶，可以使样品中的干扰信号大大降低。
发明内容
本发明的目的是提供一种单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶的融合蛋白。本发明的另一目的是提供该融合蛋白的制备方法。该方法将特异识别对虾白斑综合症病毒的单链抗体A1与甲基对硫磷水解酶通过基因融合，用该融合蛋白可直接与病毒结合，并通过酶学反应产生颜色反应，由此可以省去用识别对虾白斑综合症病毒的单链抗体A1检测病毒时必须的二抗操作步骤，简化了操作程序，并降低了检测成本。
本发明所述单链抗体A1是指“一种识别对虾白斑杆状病毒的单链抗体A1及其用途”专利号ZL00131231.6中所述的识别对虾白斑杆状病毒的单链抗体A1。由于“对虾白斑杆状病毒”的名称已由国际病毒命名委员会统一命名为“对虾白斑综合症病毒”，其英文名称为“White Spot Syndrome Virus”，网站www.ncbi.nlm.nih.gov/ICTVdb/Ictv/index.htm可查到此内容。因此，本发明所述的“对虾白斑综合症病毒”即为专利号ZL00131231.6中的“对虾白斑杆状病毒”。
为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案
单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶融合蛋白的DNA序列为ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTAGCGCAGGGTACAGCCGCACCGCAGGTGCGCACCTCGGCCCCCGGCTACTACCGGATGCTGCTGGGCGACTTCGAAATCACCGCGCTGTCGGACGGCACGGTGGCGCTGCCGGTCGACAAGCGGCTGAACCAGCCGGCCCCGAAGACGCAGAGCGCGCTGGCCAAGTCCTTCCAGAAAGCGCCGCTCGAAACCTCGGTCACCGGTTACCTCGTCAACACCGGCTCCAAGCTGGTGCTGGTGGACACCGGCGCGGCCGGCCTGTTCGGCCCCACCCTGGGCCGGCTGGCGGCCAACCTCAAGGCCGCAGGCTATCAGCCCGAGCAGGTCGACGAGATCTACATCACCCACATGCACCCCGACCACGTGGGCGGCTTGATGGTGGGTGAGCAACTGGCGTTCCCGAACGCGGTGGTGCGTGCGGACCAGAAAGAAGCCGATTTCTGGCTCAGCCAGACCAACCTCGACAAGGCCCCGGACGACGAGAGCAAAGGCTTCTTCAAAGGCGCCATGGCCTCGCTGAACCCCTATGTGAAGGCCGGCAAGTTCAAGCCTTTCTCGGGGAACACCGACCTGGTGCCCGGCATCAAAGCGCTGGCCAGCCACGGCCACACCCCGGGCCACACCACCTACGTGGTCGAAAGCCAGGGGCAAAAGCTCGCCCTGCTCGGCGACCTGATACTCGTCGCCGCGGTGCAGTTCGACGACCCCAGCGTCACGACCCAGCTCGACAGCGACAGCAAGTCCGTCGCGGTGGAGCGCAAGAAGGCCTTCGCGGATGCCGCCAAGGGCGGCTACCTGATCGCGGCGTCCCACCTGTCGTTCCCCGGCATCGGCCACATCCGCGCCGAAGGCAAGGGCTACCGTTTCGTGCCGGTGAACTACTCGGTCGTCAACCCCAAGTCTAGAAGCGGCTCTGGTTCCGGTAGCGGTTCCGGCACTAGTATGGCCGAGGTGAAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAAGTTTCTGGCTTCAACATTAAAGACTACTATATGAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAATGGATTGGATGGATTTATCCTGACAATGGTAATACTATATATGACCCGAAGTTCCAGGGCAAGGCCAGAATAACAGCAGATACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGTTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTGCTAGTGGTGGTAACCCCTGGTACTGGGGTCAAGGCACCACTCTCTCCGTGTCGACAGGTGGAGGCGGCTCTGGTGGCGGTGGCAGTGGCGGCGGAGGTTCTGACGTCGTGATGACCCAGTCTCAAAAATTCATGTCCACATCAGTAGGAGACAGGGTCAGCGTCACCTGCAAGGCCAGTCAGAATGTGGGTACTAATGTAGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGGCGATCTCCTAAAACACTGATTTACTCGGCATCCTACCGGTACAGTGGAGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAATGTGCAGTCTGAAGACTTGGCAGAGTATTTCTGTCAGCAATATAGCAGCTATCCTCTCACATTCGGTGGTGGGACCAAGTTGGAAATCAAGCGCGCGGCCGCAGGTGCGCCGGTGCCGTATCCGGATCCGCTGGAACCGCGTGCCGCATAG用单链抗体A1与甲基对硫磷水解酶制备单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶融合蛋白的方法按下列步骤进行1、用带有Spe I内切酶位点的上游引物5’-CCCCGACTAGTATGGCCGAGGTGAAGCT-3’和带有HindIII内切酶位点的下游引物5’-CACCAAGCTTTTAGCGCTTGATTTCCAAC-3’，通过PCR，将单链抗体A1-E-tag的基因从原噬菌粒载体pCANTAB5E-A1E中扩增下来。将PCR扩增的片段首先克隆到pGEM-T载体上。将连接的A1基因用Spe I和HindIII内切酶酶切下来，用Gel Extraction Kit(Sigma公司)进行纯化和回收。
2、用带有SnaB I内切酶位点的上游引物5’-TATTACGTACAGCCGCACCGCAGGT-3’，和带有Xba I内切酶位点的下游引物5’-TGGGCTCTAGACTTGGGGTTGACGA-3’，通过PCR，将甲基对硫磷水解酶基因从原载体pET5a-MPH中扩增下来。将PCR扩增的片段首先克隆到pGEM-T载体上。将连接的MPH基因用SnaB I和Xba I内切酶酶切下来，用Gel Extraction Kit(Sigma公司)进行纯化和回收。
3、将人工合成的、N端具有Xba I内切酶切口和C端具有Spe I内切酶切口序列的、编码[-(Gly-Ser)5-]小肽的寡核苷酸片段互补链，在65℃中保温5分钟退火使其形成互补的双链DNA小片段5’-CTAGAAGCGGCTCTGGTTCCGGTAGCGGTTCCGGCA-3’3’-TTCGCCGAGACCAAGGCCATCGCCAAGGCCGTGATC-5’4、将这个DNA小片段作为连接物(L)与上述已用相应的内切酶进行酶切后的A1E基因片段和MPH基因片段进行连接，形成MPH-L-A1E的融合基因，并克隆到具有Stu l/HindIII内切酶切口的pASK75载体上(SnaB I和Stu I均为平端酶，二者所切出的切口可以连接)得到连接产物pASK75-MPH-L-A1E。
5、将上述连接产物pASK75-MPH-L-A1E电转移到大肠杆菌SM547中。
6、将具有融合蛋白基因的大肠杆菌在LB broth培养液中生长至对数期，然后用200μg/ml的四环素诱导融合蛋白的表达。通过离心收集菌体，利用渗透休克法制备融和蛋白的周质空间提取物。
7、将融和蛋白的周质空间提取物用RPAS Purification Module(Pharmacia公司)进行纯化，得到单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶融合蛋白。
本发明所述的“引物”和“DNA小片段”只要设计好其序列，均有公司可商业化生产。
用单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶融合蛋白检测对虾白斑综合症病毒的方法为用2倍PBS稀释剃度6.25～100纳克蛋白量的对虾白斑综合症病毒包被96孔酶标板，4℃过夜，然后用4％脱脂牛奶/PBS封闭，37℃2小时。用PBS和PBST溶液各洗3次后，每孔加入100μl的单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶融合蛋白，在37℃保温1.5小时。用PBS和PBST溶液各洗3次后，每孔加入100μl含有0.25mM底物O，O-Dimethyl-O-(4-Nitrophenylmethyl)phosphorothioate(pH9.0)的溶液，在室温下反应60分钟。通过在405nm波段的光吸收值，按照阳性样品吸收值为阴性对照吸收值的2倍，来确定单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶融合蛋白所能检测出的最小病毒量。
本发明的优点与效果本发明结合了单链抗体易于基因操作的优点，和甲基对硫磷水解酶分子量小，酶活力易于检测的优点，通过基因融合的方法，将特异识别对虾白斑综合症病毒的单链抗体A1与甲基对硫磷水解酶进行了融合。用该融合蛋白可直接与病毒结合，并产生颜色反应，由此可以省去用识别对虾白斑综合症病毒的单链抗体A1检测病毒时必须的二抗操作步骤，简化了操作程序，并降低了检测成本。
图1是重组质粒pASK75-MPH-L-A1E质粒图谱。
图2是融和蛋白检测2倍稀释对虾白斑综合症病毒的ELISA结果。
具体实施例方式用单链抗体A1与甲基对硫磷水解酶制备单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶融合蛋白的方法按下列步骤进行1、用带有Spe I内切酶位点的上游引物5’-CCCCGACTAGTATGGCCGAGGTGAAGCT-3’和带有HindIII内切酶位点的下游引物5’-CACCAAGCTTTTAGCGCTTGATTTCCAAC-3’，通过PCR，将单链抗体A1的基因从噬菌粒载体pCANTAB5E-A1E中扩增下来。PCR的条件为94℃5分钟；94℃45秒，44℃1分钟，72℃2分钟，5个循环；94℃45秒，62℃1分钟，72℃2分钟，25个循环；72℃7分钟；4℃10分钟。将PCR扩增的片段首先克隆到pGEM-T载体上，通过PCR和内切酶分析，挑选出连接有A1基因的克隆子。将连接的A1基因用Spe I和HindIII内切酶酶切下来，酶切条件为Spe I和HindIII双酶切37℃4小时，然后用Gel Extraction Kit(Sigma公司)进行纯化和回收。
2、用带有SnaB I内切酶位点的上游引物5’-TATTACGTACAGCCGCACCGCAGGT-3’，和带有Xba I内切酶位点的下游引物5’-TGGGCTCTAGACTTGGGGTTGACGA-3’，通过PCR，将甲基对硫磷水解酶(MPH)基因从原由载体pET5a-MPH中扩增下来。PCR的条件是94℃5分钟；94℃45秒，44℃1分钟，72℃2分钟，5个循环；94℃45秒，62℃1分钟，72℃2分钟，25个循环；72℃7分钟；4℃10分钟。将PCR扩增的片段首先克隆到pGEM-T载体上，通过PCR和内切酶分析，挑选出连接有MPH基因的克隆子。将连接的MPH基因用SnaB I和Xba I内切酶酶切下来，酶切条件为首先用SnaB I 37℃酶切2小时，将酶切产物用PCR回收试剂盒(Sigma公司)纯化回收；Xba I 37℃酶切纯化产物2小时，然后用GelExtraction Kit(Sigma公司)进行纯化和回收。
3、将人工合成的、N端具有Xba I内切酶切口和C端具有Spe I内切酶切口序列的、编码[-(Gly-Ser)5-]小肽的寡核苷酸片段互补链，在65℃中保温5分钟退火使其形成互补的双链DNA小片段5’-CTAGAAGCGGCTCTGGTTCCGGTAGCGGTTCCGGCA-3’3’-TTCGCCGAGACCAAGGCCATCGCCAAGGCCGTGATC-5’4、将这个DNA小片段作为连接物(L)与上述已用相应的内切酶进行酶切后的A1E基因片段和MPH基因片段进行连接，形成MPH-L-A1E的融合基因，并克隆到具有Stu I/HindIII内切酶切口的pASK75载体上(SnaB I和Stu I均为平端酶，二者所切出的切口可以连接)得到连接产物pASK75-MPH-L-A1E(该重组质粒图谱如图1所示)。
5、将上述连接产物pASK75-MPH-L-A1E电转移到大肠杆菌SM547中。
6、将具有融合蛋白基因载体的大肠杆菌在LB broth培养液中，37℃下生长至对数期，然后用200μg/ml的四环素在28℃中诱导表达16小时。通过6000转/分钟离心10分钟收集细菌，用French渗透休克方法制备融和蛋白的周质空间提取物。
7、将融和蛋白的周质空间提取物用RPAS Purification Module(Pharmacia公司)进行纯化，得到单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶融合蛋白。
用单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶融合蛋白检测对虾白斑综合症病毒的方法为用2倍PBS稀释剃度6.25～100纳克蛋白量的对虾白斑综合症病毒包被96孔酶标板，4℃过夜，然后用4％脱脂牛奶/PBS封闭，37℃2小时。用PBS和PBST溶液各洗3次后，每孔加入100μl的单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶融合蛋白，在37℃保温1.5小时。用PBS和PBST溶液各洗3次后，每孔加入100μl含有0.25mM底物O，O-Dimethyl-O-(4-Nitrophenylmethyl)phosphorothioate(pH9.0)的溶液，在室温下反应60分钟。通过在405nm波段的光吸收值，按照阳性样品吸收值为阴性对照吸收值的2倍，来确定单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶融合蛋白所能检测出的最小病毒量(结果如图2所示)。
权利要求
1.一种单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶融合蛋白，其特征在于，该融合蛋白的DNA序列为ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTAGCGCAGGGTACAGCCGCACCGCAGGTGCGCACCTCGGCCCCCGGCTACTACCGGATGCTGCTGGGCGACTTCGAAATCACCGCGCTGTCGGACGGCACGGTGGCGCTGCCGGTCGACAAGCGGCTGAACCAGCCGGCCCCGAAGACGCAGAGCGCGCTGGCCAAGTCCTTCCAGAAAGCGCCGCTCGAAACCTCGGTCACCGGTTACCTCGTCAACACCGGCTCCAAGCTGGTGCTGGTGGACACCGGCGCGGCCGGCCTGTTCGGCCCCACCCTGGGCCGGCTGGCGGCCAACCTCAAGGCCGCAGGCTATCAGCCCGAGCAGGTCGACGAGATCTACATCACCCACATGCACCCCGACCACGTGGGCGGCTTGATGGTGGGTGAGCAACTGGCGTTCCCGAACGCGGTGGTGCGTGCGGACCAGAAAGAAGCCGATTTCTGGCTCAGCCAGACCAACCTCGACAAGGCCCCGGACGACGAGAGCAAAGGCTTCTTCAAAGGCGCCATGGCCTCGCTGAACCCCTATGTGAAGGCCGGCAAGTTCAAGCCTTTCTCGGGGAACACCGACCTGGTGCCCGGCATCAAAGCGCTGGCCAGCCACGGCCACACCCCGGGCCACACCACCTACGTGGTCGAAAGCCAGGGGCAAAAGCTCGCCCTGCTCGGCGACCTGATACTCGTCGCCGCGGTGCAGTTCGACGACCCCAGCGTCACGACCCAGCTCGACAGCGACAGCAAGTCCGTCGCGGTGGAGCGCAAGAAGGCCTTCGCGGATGCCGCCAAGGGCGGCTACCTGATCGCGGCGTCCCACCTGTCGTTCCCCGGCATCGGCCACATCCGCGCCGAAGGCAAGGGCTACCGTTTCGTGCCGGTGAACTACTCGGTCGTCAACCCCAAGTCTAGAAGCGGCTCTGGTTCCGGTAGCGGTTCCGGCACTAGTATGGCCGAGGTGAAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAAGTTTCTGGCTTCAACATTAAAGACTACTATATGAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGAACAGGGCCTGGAATGGATTGGATGGATTTATCCTGACAATGGTAATACTATATATGACCCGAAGTTCCAGGGCAAGGCCAGAATAACAGCAGATACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGTTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTGCTAGTGGTGGTAACCCCTGGTACTGGGGTCAAGGCACCACTCTCTCCGTGTCGACAGGTGGAGGCGGCTCTGGTGGCGGTGGCAGTGGCGGCGGAGGTTCTGACGTCGTGATGACCCAGTCTCAAAAATTCATGTCCACATCAGTAGGAGACAGGGTCAGCGTCACCTGCAAGGCCAGTCAGAATGTGGGTACTAATGTAGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGGCGATCTCCTAAAACACTGATTTACTCGGCATCCTACCGGTACAGTGGAGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAATGTGCAGTCTGAAGACTTGGCAGAGTATTTCTGTCAGCAATATAGCAGCTATCCTCTCACATTCGGTGGTGGGACCAAGTTGGAAATCAAGCGCGCGGCCGCAGGTGCGCCGGTGCCGTATCCGGATCCGCTGGAACCGCGTGCCGCATAG
2.实现权利要求1所述的单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶融合蛋白，其特征在于，该融合蛋白的制备方法按下列步骤进行a、用带有Spe I内切酶位点的上游引物5’-CCCCGACTAGTATGGCCGAGGTGAAGCT-3’和带有HindIII内切酶位点的下游引物5’-CACCAAGCTTTTAGCGCTTGATTTCCAAC-3’，通过PCR，将单链抗体A1的基因从噬菌粒载体pCANTAB5E-A1E中扩增下来，PCR的条件为94℃5分钟；94℃45秒，44℃1分钟，72℃2分钟，5个循环；94℃45秒，62℃1分钟，72℃2分钟，25个循环；72℃7分钟；4℃10分钟；将PCR扩增的片段首先克隆到pGEM-T载体上，通过PCR和内切酶分析，挑选出连接有A1基因的克隆子。将连接的A1基因用Spe I和HindIII内切酶酶切下来，酶切条件为Spe I和HindIII双酶切37℃4小时，然后用Gel Extraction Kit进行纯化和回收；b、用带有SnaB I内切酶位点的上游引物5’-TATTACGTACAGCCGCACCGCAGGT-3’，和带有Xba I内切酶位点的下游引物5’-TGGGCTCTAGACTTGGGGTTGACGA-3’，通过PCR，将甲基对硫磷水解酶基因从原由载体pET5a-MPH中扩增下来；PCR的条件是94℃5分钟，94℃45秒，44℃1分钟，72℃2分钟，5个循环；94℃45秒，62℃1分钟，72℃2分钟，25个循环；72℃7分钟；4℃10分钟；将PCR扩增的片段首先克隆到pGEM-T载体上，通过PCR和内切酶分析，挑选出连接有MPH基因的克隆子；将连接的MPH基因用SnaB I和Xba I内切酶酶切下来，酶切条件为首先用SnaB I 37℃酶切2小时，将酶切产物用PCR回收试剂盒纯化回收；Xba I 37℃酶切纯化产物2小时，然后用Gel Extraction Kit进行纯化和回收；c、将人工合成的、N端具有Xba I内切酶切口和C端具有Spe I内切酶切口序列的、编码[-(Gly-Ser)5-]小肽的寡核苷酸片段互补链，在65℃中保温5分钟退火使其形成互补的双链DNA小片段5’-CTAGAAGCGGCTCTGGTTCCGGTAGCGGTTCCGGCA-3’3’-TTCGCCGAGACCAAGGCCATCGCCAAGGCCGTGATC-5’；d、将上述DNA小片段作为连接物与上述已用相应的内切酶进行酶切后的A1E基因片段和MPH基因片段进行连接，形成MPH-L-A1E的融合基因，并克隆到具有Stu I/HindIII内切酶切口的pASK75载体上，得到连接产物pASK75-MPH-L-A1E；e、将上述连接产物pASK75-MPH-L-A1E电转移到大肠杆菌SM547中；f、将具有融合蛋白基因载体的大肠杆菌在LB broth培养液中，37℃下生长至对数期，然后用200μg/ml的四环素在28℃中诱导表达16小时。通过6000转/分钟离心10分钟收集细菌，用French渗透休克方法制备融和蛋白的周质空间提取物；g、将融和蛋白的周质空间提取物用RPAS Purification Module进行纯化，得到单链抗体A1-甲基对硫磷水解酶融合蛋白。
全文摘要
本发明公开了一种识别对虾白斑杆状病毒单链抗体Al－甲基对硫磷水解酶融合蛋白及其制备方法，涉及水产养殖生物病毒抗体。单链抗体基因与甲基对硫磷水解酶基因通过与一编码[－(Gly－Ser)
文档编号C12N15/09GK1800402SQ20051002001
公开日2006年7月12日 申请日期2005年12月16日 优先权日2005年12月16日
发明者戴和平, 张先恩, 周亚凤, 杨薇, 张晓华, 戴玲芬, 张治平 申请人:中国科学院水生生物研究所, 中国科学院武汉病毒研究所