专利名称：一种冷解糖芽孢杆菌菌株及其在复合微生物海藻肥料中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种冷解糖芽孢杆菌菌株及其在复合微生物海藻肥料中的应用。
背景技术：
我国各地出现的土传病害越来越严重且呈不断上升的情形，枯萎病、线虫病、疫病和病毒病等病害蔓延。大量化肥农药的使用，虽然一方面解决了粮食的供应问题，增加了经济收入；但是另一方面化学农药也带来了更为严重的负面效应肥料利用率低、环境恶化、 土地质量下降、水源污染、农作物抗病力下降等，很大程度上已经威胁到粮食安全和农业的可持续发展。而微生物肥料在解决这方面问题上有其独到的作用，并取得了良好的使用效果，它将是我国农业技术发展的重点和依托所在。微生物肥料中有益微生物的种类、生命活动是否旺盛是其有效性能的关键，寻找拮抗致病菌或致病害虫的高活性微生物及其代谢产物来预防和解决土传病害是目前微生物肥料的研究热点和突破口。
发明内容
针对现有技术中传统化学肥料和普通微生物肥料的不足，本发明的目的是利用筛选到的一种冷解糖芽孢杆菌菌株制备高效的复合微生物海藻肥料，该复合微生物海藻肥料不仅营养齐全而且抗逆性、抗病虫害、促生长能力突出，可在一定程度上替代农药、化肥、激素，改良土壤性状，改善产品品质，使农产品达到绿色或有机标准。为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现一种冷解糖芽孢杆菌菌株，其分类命名为冷解糖芽孢杆菌(Bacillus psychrosaccharolyticus)，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，其保藏编号为CGMCC No. 4519，它的保藏时间为2010年12月四日。所述冷解糖芽孢杆菌菌株的菌落大小^_32mm，圆形，白色，边缘较整齐且呈隆起状，菌落表面有膜，膜下较湿润、呈粘稠状、透明，易挑取，显微镜下观察菌体呈杆状，芽孢中生，呈椭圆形。所述冷解糖芽孢杆菌菌株对黄瓜尖孢镰刀菌、棉花尖孢镰刀菌、禾谷镰孢菌、黄瓜立枯丝核菌、棉田立枯丝核菌、褐根病菌或茄青枯拉尔氏菌有抑菌作用。本发明还提供所述冷解糖芽孢杆菌菌株在复合微生物海藻肥料中的应用。其中，所述微生物海藻肥料含有冷解糖芽孢杆菌菌株和复配菌株的混合发酵液， 所述复配菌株为枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌中的一种或几种。更进一步的，所述冷解糖芽孢杆菌菌株和复配菌株的混合发酵液的浓度为 1 X 109cfu/ml-5 X 109cfu/ml。 再进一步的，所述微生物海藻肥料中有效活菌数为2亿/g- ο亿/g，有机质含量为20% -40% ο与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是本发明从自然发酵的面酱中分离筛选得到一株冷解糖芽孢杆菌菌株，该菌株不仅具有强降解纤维素和淀粉能力而且具有较广抗菌谱，对尖孢镰刀菌的菌丝生长具有很强的抑制作用，抑制率可达80%，对根结线虫的抑杀作用也在70%以上；将该菌种与传统菌肥常用菌种进行复配，通过复配筛选到复配菌株，各菌种之间可共生，且有一定协同作用，通过混合培养与发酵条件优化，使各菌种之间形成稳定的协同作用，增强了菌种抗逆性和生物活性；复合微生物海藻肥料的制备是将混合发酵菌液、植物生长因子、免疫调节因子、海藻活性提取物、氨基酸、有机质和微量元素按一定比例制备出一种有效活菌数为2亿/g-10亿/g且有机质含量为20% -40%的高效复合微生物海藻肥料，该肥料抗病虫害和促生长的能力显著，作物增产幅度达30%以上。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明的技术方案作进一步详细的说明。(一 )冷解糖芽孢杆菌的分离筛选从自然发酵面酱、堆肥、果树土壤、菜园土壤中取样50-100份，分别取I-IOg样品悬浮在9-100ml生理盐水中，剧烈震荡。分别取IOOyL样品悬浮液均勻涂布平板，本发明实施例中以普通营养肉汤培养基作为无菌营养液，以克每升计算，其成分是蛋白胨10. 0、牛肉粉3. 0、氯化钠5. 0、葡萄糖1. 0、水1000毫升，pH值7. 5，121°C灭菌20分钟，培养温度为 37°C，培养时间为18 M小时。平板菌落计数培养基为营养琼脂培养基，即在普通营养肉汤培养基中添加琼脂，培养温度为37°C，培养时间为18 M小时。将涂布样品悬浮液的营养琼脂培养基平板于25V -50°C培养箱中倒置培养1-36 小时，取出分别在平板中央接种黄瓜尖孢镰刀菌，接种量为100微升，于10°C -40°c培养箱中正置培养Ih 100h，从平板上挑取对黄瓜尖孢镰刀菌具有明显抑制作用的菌落，用划线法接种到营养琼脂培养基平板上，通过反复多次划线得到纯菌，共筛选出22株纯菌，采用平板法再次验证22株纯菌对黄瓜尖孢镰刀菌的抑制作用，结果有9株纯菌对黄瓜尖孢镰刀菌菌丝生长有明显抑制作用，抑制率在50%以上，其中一株芽孢杆菌对黄瓜尖孢镰刀菌菌丝生长的抑制作用最为显著，抑制率在80%以上，经Biolog菌种鉴定此芽孢杆菌为冷解糖芽孢杆菌。(二)冷解糖芽孢杆菌活性检测1.抑菌活性采用平板对峙法测试冷解糖芽孢杆菌对指示菌的抑菌活性，平板中央接种指示菌菌块，平板接种量为100微升，在距离指示菌菌块2. 5cm处接种冷解糖芽孢杆菌单菌落，另一侧不接种冷解糖芽孢杆菌，以供测量空白指示菌半径，10°C -40 °C 恒温培养l-60d，观察指示菌菌丝生长情况，测量抑菌结果。抑制率的计算方法
抑制率=_抑菌宽度(mm)_ ^^^空白指示菌半径(mm)XlUU/°抑菌宽度(mm)=空白侧指示菌半径-接种冷解糖芽孢杆菌侧指示菌半径抑菌结果如下表
权利要求
1.一种冷解糖芽孢杆菌菌株，其特征在于其分类命名为冷解糖芽孢杆菌(Bacillus psychrosaccharolyticus)，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为C GMCC No. 4519。
2.根据权利要求1所述的一种冷解糖芽孢杆菌菌株，其特征在于所述冷解糖芽孢杆菌菌株的菌落大小^_32mm，圆形，白色，边缘较整齐且呈隆起状，菌落表面有膜，膜下较湿润、呈粘稠状、透明，易挑取，显微镜下观察菌体呈杆状，芽孢中生，呈椭圆形。
3.根据权利要求1所述的一种冷解糖芽孢杆菌菌株，其特征在于所述冷解糖芽孢杆菌菌株对黄瓜尖孢镰刀菌、棉花尖孢镰刀菌、禾谷镰孢菌、黄瓜立枯丝核菌、棉田立枯丝核菌、褐根病菌或茄青枯拉尔氏菌有抑菌作用。
4.根据权利要求1所述的一种冷解糖芽孢杆菌菌株在复合微生物海藻肥料中的应用。
5.根据权利要求4所述的一种冷解糖芽孢杆菌菌株在复合微生物海藻肥料中的应用， 其特征在于所述微生物海藻肥料含有冷解糖芽孢杆菌菌株和复配菌株的混合发酵液，所述复配菌株为枯草芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌中的一种或几种。
6.根据权利要求5所述的一种冷解糖芽孢杆菌菌株在复合微生物海藻肥料中的应用，其特征在于所述冷解糖芽孢杆菌菌株和复配菌株的混合发酵液的浓度为IXlO9Cfu/ ml-5X109cfu/ml。
7.根据权利要求4所述的一种冷解糖芽孢杆菌在复合微生物海藻肥料中的应用，其特征在于所述微生物海藻肥料中有效活菌数为2亿/g-10亿/g，有机质含量为20% -40%。
全文摘要
本发明利用筛选到的一株冷解糖芽孢杆菌菌株制备高效的复合微生物海藻肥料，本发明芽孢杆菌菌株的分类命名为冷解糖芽孢杆菌(Bacillus psychrosaccharolyticus)，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.4519。本发明的一株冷解糖芽孢杆菌不仅具有强降解纤维素和淀粉能力而且具有较广抗菌谱；将该菌种与传统菌肥常用菌种进行复配，然后将混合发酵菌液、植物生长因子、免疫调节因子、海藻活性提取物、氨基酸、有机质、微量元素按一定比例制备出一种有效活菌数为2亿/g-10亿/g且有机质含量为20％-40％的高效复合微生物海藻肥料，该肥料抗病虫害和促生长的能力显著，作物增产幅度达30％以上。
文档编号C12N1/20GK102174430SQ201010622849
公开日2011年9月7日 申请日期2010年12月31日 优先权日2010年12月31日
发明者乔来艳, 单俊伟, 宋海妹, 李秀珍, 王海华 申请人:中国海洋大学生物工程开发有限公司