专利名称：microRNA基因miR-1291用于预测乳腺癌预后的用途的制作方法
技术领域：
本发明所属领域为基因诊断与肿瘤个体化治疗领域，具体而言是利用病人基因表达特征预测乳腺癌病人预后以采取个性化治疗的生物标志物。
背景技术：
乳腺癌是最常见的女性肿瘤。由于乳腺癌的异质性，目前尚无单个临床分子标志物(如Bcl-2、p53、MDR-I等)能够准确有效地预测药物化疗(包括新辅助治疗Neoadjuvanttherapy)的疗效。基于全基因组水平的基因表达谱分析,按照一种广为认可的乳腺癌分子病理分型系统，可以将乳腺癌分为如下亚型(I)基底细胞样(basal-like)乳腺癌，主要以雌激素受体(ER)阴性、HER2基因阴性为特征；(2) luminal A型，以ER阳性/HER2阴性为特征；(3) luminal B型，以ER阳性/HER2阳性为特征；(4)HER2阳性型。各种亚型的预后、以及对治疗的反应不尽相同。 随着基因组学技术的发展，基于多基因表达谱对乳腺癌化疗药物敏感性进行预测成为可能。Oncotype Dx和MannaPrint基因芯片是获美国FDA批准用于乳腺癌预后预测的两个产品。Oncotype Dx是通过RT-PCR技术，测定21个特定基因的表达情况后，得出复发风险指数(recurrence score, RS)和危险度分级。RS评分主要取决于ER、Her_2基因、以及增殖相关基因的表达情况。Ma_aPrint则是通过基因芯片测试70个与细胞增殖、侵袭、转移、血管新生等生物学过程密切相关的基因，计算得到低危组、高危组分级标准，进而预测预后。已有临床试验提示上述产品在疗效预测方面亦有一定的应用价值。但是，由于恶性肿瘤的异质性，上述分型与分类系统仍不能满足临床要求，同一亚型(或危险度组)的病人，其预后、疗效特征各不相同。最新的研究表明，恶性肿瘤作为一种多基因遗传性疾病，是多因素、多个信号传导通路作用的结果，亦是肿瘤与体内免疫系统相互作用的结果，甚至同一肿瘤组织不同区域的肿瘤细胞其基因组学特征都有可能各不相同，这种高度的异质性(heterogeneity),导致不同患者对同一药物表现出不同的疗效和毒副作用。随着分子标志物指导下的肿瘤个体化治疗(personalizedmedicine,individualized drug therapy)成为肿瘤临床治疗中的共识,亟需发展新的信息维度、新的技术手段，系统地刻画与预测每个患者或肿瘤组织的表型特征，作为对患者进行预后判断与治疗方案的科学决策等。微小RNA(microRNA, miRNA)是一类小的内源性非编码RNA, microRNAs可以调控基因的表达变化，在多种疾病特别是癌症的发生发展中起着重要的调节作用。研究发现，每个microRNA可以有多个靶基因，microRNAs对人类至少1/3的基因具有非常重要的表达调控功能。乳腺癌中有大量miRNA发生了异常表达，以及miRNA在血清中的稳定存在，使得miRNA有望成为新的生物标志物用于乳腺癌的预后预测并服务于个性化的肿瘤治疗。
发明内容
本发明提供一种与乳腺癌预后相关的microRNA的用途，所述microRNA可作为乳腺癌个性化治疗的新的生物标志物。本发明通过如下技术方案实现在本发明的一个方面，提供了一种microRNA用于制备预测乳腺癌病人预后的产品的用途。优选地，所述预测乳腺癌病人的预后包括检测肿瘤转移。优选地，所述预测乳腺癌预后的产品是用实时定量PCR、多重PCR或基因芯片预测乳腺癌病人预后的产品。所述用实时定量PCR或多重PCR预测乳腺癌预后或检测肿瘤转移的产品至少包括一对特异扩增miR-1291的引物。 所述用生物芯片预测乳腺癌病人预后的产品包括至少一个与miR-1291的核酸序列杂交的探针，该探针序列与miR-1291基因序列的任意连续6个核苷酸序列相同或互补。在本发明中，所述探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。在本发明的另一方面，还提供了一种用于预测乳腺癌预后的试剂盒，所述试剂盒包含特异性针对miR-1291基因的引物或探针。通过检测肿瘤病人miR-1291基因的表达情况，从而判断肿瘤病人的生存期，进而制定个性化的治疗方案。在本发明的另一方面，还提供了 miR-1291基因在制备用于治疗肿瘤复发或转移的药物中的用途。在本发明的另一方面，还提供了 miR-1291基因在筛选治疗肿瘤复发或转移的药物中的用途。在本发明的另一方面，还提供了 miR-1291模拟物或抑制剂在中筛选治疗肿瘤复发或转移的药物的用途。优选地,所述治疗肿瘤复发或转移的药物包括抑制miR-1291基因表达或抑制miR-1291调控活性的物质。更优选地,所述治疗肿瘤复发或转移的药物包括通过RNA干扰、与miR-1291序列60%以上相同的miRNA模拟物、与miR-1291序列60%以上互补匹配的miRNA抑制剂来调节miR-1291丰度或活性的核糖核酸，或用于抑制miR-1291的小分子化合物，或用于抑制miR-1291的蛋白质。上述肿瘤包括乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、结肠癌、直肠癌、睾丸癌、口腔鳞状细胞癌或白血病肿瘤，优选为乳腺癌。上述miR-1291 基因由 SEQ ID NO 1 (5’ -UGGCCCUGACUGAAGACCAGCAGU-3’)所示的核酸序列表示。本发明与乳腺癌预后相关的miR-1291基因，可作为早期诊断肿瘤复发或转移的标志物，辅助医生制定个性化的治疗方案、改善患者预后，同时也可作为控制肿瘤转移的药物治疗靶标，为设计和筛选抗肿瘤转移药物提供新的靶点。
下面结合附图和具体实施方式
对本发明作进一步详细的说明。
图I是本发明实施例I的miR-1291基因表达水平与乳腺癌病人预后的相关性结果图。核酸序列表说明SEQ ID NO 1> hsa-miR-1291 MIMAT00058815， -UGGCCCUGACUGAAGACCAGCAGU -3，
具体实施例方式实施例
实施例I、乳腺癌预后预测使用mirVana RNA Isolation Kit (Applied Biosystem p/n AM1556),根据试剂盒所提供的操作步骤，提取乳腺癌病人手术切除样本的总RNA，分装冻存。 RNA质量检测。紫外吸收测定法测定波长260nm和280nm的吸收值，判断RNA样品的浓度，并结合琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量。芯片杂交实验过程严格按照Agilent Human 8*60K miRNA芯片的操作手册进行，基本流程包括去磷酸化、样品变性、连接标记、芯片杂交、芯片洗涤、芯片扫描等步骤。芯片结果采用Agilent扫描仪进行扫描，Feature Extraction软件读取数据Scanresolution 5 μ m, PMT 100 米用 Feature Extraction 进行处理分析。最后应用GENESPRING12. O 进行 shift percentile normalization。使用上述操作流程分析一个乳腺癌病人群体，能够依据mir-1291的表达水平对病人进行分组，其中预后好的病人群体相对于预后差的病人群体，其Log rank测试的P值为 9. 827e-5，其 Hazard ratio 为 2· 5 (图 I)。实施例2、实时定量PCR检测mir-1291基因表达RNA的提取和质量检测同实施例I所述。采用锐博公司mir-1291Bulge-Loop miRNA qPCR检测试剂盒检测。其中，利用茎凸环引物逆转录合成cDNA链，以合成的cDNA作为模板进行实时定量PCR扩增。每个样品检测三次，同时检测每个样品中U6snRNA或5S rRNA含量作为内参，以校正上样误差，分析相对表达水平，并比较不同病人的表达差异。结果表明，在一个52例乳腺癌病人组成的群体中，5年内未转移的乳腺癌病人相对5年内发生了转移的乳腺癌病人，mir-1291表达差异为2. 8倍(p值< O. 0001)。以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
权利要求
1.microRNA基因miR-1291在制备用于预测乳腺癌预后的产品中的用途。
2.根据权利要求I所述的用途，其特征在于，所述预测乳腺癌预后的产品是用实时定量PCR、多重PCR或microRNA芯片进行乳腺癌预后预测的产品。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述用实时定量PCR或多重PCR进行乳腺癌预后预测的产品包括一对特异扩增mir-1291基因的引物；所述用microRNA芯片进行乳腺癌预后预测的产品包括与mir-1291基因的核酸序列互补杂交的探针。
4.根据权利要求I所述的用途，其特征在于，所述mir-1291基因由SEQID NO :1所示的核酸序列表示。
5.一种用于预测乳腺癌预后的试剂盒，所述试剂盒包含特异性针对miR-1291基因的引物或探针。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述mir-1291基因由SEQID N0:1所示的核酸序列表示。
7.miR-1291基因在制备用于治疗肿瘤复发或转移的药物中的用途。
8.miR-1291基因在筛选治疗肿瘤复发或转移的药物中的用途。
9.根据权利要求7或8所述的用途，其特征在于，所述治疗肿瘤复发或转移的药物包括与miR-1291序列60%以上相同的miRNA模拟物或与miR-1291序列60%以上互补匹配的miRNA抑制剂来调节miR-1291丰度或活性的核糖核酸。
10.根据权利要求7或8所述的用途，其特征在于，所述肿瘤为乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、结肠癌、直肠癌、睾丸癌、口腔鳞状细胞癌或白血病肿瘤。
全文摘要
本发明公开microRNA基因miR-1291在制备用于预测乳腺癌预后的产品中的用途。本发明还公开了miR-1291在制备或筛选治疗肿瘤的药物中的用途。本发明与乳腺癌转移相关的miR-1291基因，可作为早期诊断肿瘤转移的标志物，辅助医生制定个性化的治疗方案，同时可作为控制肿瘤转移的药物治疗靶标。
文档编号C12Q1/68GK102965441SQ20121051721
公开日2013年3月13日 申请日期2012年12月6日 优先权日2012年12月6日
发明者杭兴宜, 熊江辉, 于国强, 汤奕, 王晨, 杨正茂, 魏维 申请人:苏州市思玛特电力科技有限公司