本发明属于生物制剂领域，尤其涉及一种复合型合生元微生态制剂及其制备方法。
背景技术：
目前，我国合生元微生态制剂在动物的生产中的应用研究还较少，畜牧业动物食用添加剂中微生态制剂的使用情况还较少，人们对微生态制剂适用添加比较模糊，即混淆有针对性的添加对象，导致动物生长的效果往往低于预期效果。
在文献“罗佳捷，张彬，王洁.合生素在动物生产中的应用研究进展.动物营养.2011(4).”中，作者列举了合生元微生态制剂在动物生产中的应用，采用宏观方式清晰地比较出合生元微生态制剂与传统的动物食用添加剂之间的区别。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种复合型合生元微生态制剂及其制备方法，旨在解决目前动物用合生元微生态制剂吸收利用率低，无针对性，简单机械混合且益生元与所添加的益生菌对应关系不明确，应用效果差，将益生菌或益生元直接作为添加剂的不足和对动物肠道微生态系统影响不明确问题。
本发明是这样实现的，一种复合型合生元微生态制剂，该复合型合生元微生态制剂组分为肠道益生菌、益生菌营养物质、低聚糖；所述各组分按重量比为：肠道益生菌为0.02-15g/kg，益生菌营养物质为0.05-80g/kg，低聚糖为0.01-90g/kg；所述肠道益生菌组分由乳杆菌、双歧杆菌、变量X菌组成，所述变量X菌为芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌﹑粪链球菌、嗜热链球菌﹑乳链球菌、乳酸片球菌、肠球菌、拟杆菌﹑鼠李糖杆菌中的任意一种或几种细菌的混合物；根据不同的动物有机体变量X菌的添加量进行调整。(标准菌株均购自北京北纳创联生物技术研究院)
进一步，所述低聚糖为含酸化剂的低聚糖。
进一步，当变量X菌为零时该复合型合生元微生态制剂用于合生元母本，在此母本基础上添加与不同动物相应的益生菌和相应的益生菌对应的益生元制成专有动物合生元；益生菌和相应的益生菌对应的益生元按重量比为：益生菌：益生元＝1:1～5，所述益生元为木寡糖、寡甘露糖、果寡糖、低聚异麦芽糖、乳寡糖、乳酮糖、低聚半乳糖、大豆低聚糖﹑低聚壳聚糖中的一种或多种混合物。
本发明另一目的在于提供一种复合型合生元微生态制剂的制备方法，所述复合型合生元微生态制剂的制备方法，首先分别在不同的环境下筛选出肠道益生菌，通过对筛选出的肠道益生菌的功能和生物学特性比较，并且在模拟肠道环境下比较益生菌的活菌数变化，筛选出最佳的菌株，将各类低聚糖含量进行测定，选择出最佳添加量，将肠道益生菌和低聚糖混合制成复合型合生元微生态制剂。
进一步，该复合型合生元微生态制剂的制备方法具体包括：
步骤一、从动物的胃肠道、养殖场附近的土壤、喂养牲畜的酒糟中分离筛选出乳杆菌、双歧杆菌、变量X菌的益生菌，分析分离得到的乳杆菌、双歧杆菌、变量X菌的益生菌形态特征，并进行菌种的鉴定；
步骤二、将分离得到的乳杆菌、双歧杆菌、变量X菌的益生菌进行生物学特性、功能的比较以及安全性的鉴定，并进行体外益生效果评价，初步筛选优质益生菌；
步骤三、在人工模拟的胃肠道液中培养初步筛选后的优质益生菌，测定各类益生菌的活菌数，繁殖代数，进行更进一步的筛选，选出最佳的菌株；
步骤四：根据益生菌的种类、各类益生元的功能特性以及与相应益生菌的利用程度选择由低聚糖和酸化剂组成的益生元，优化出低聚糖和酸化剂最佳添加量；
步骤五、对步骤三筛选的益生菌株与步骤四选择出的益生元，再加入益生菌营养物质混合制成复合型合生元微生态制剂。
进一步，步骤一中进行菌种的鉴定包括：
常规鉴定：乳杆菌为革兰氏阳性无芽孢杆菌，细胞形态呈链杆状或球杆状，双歧杆菌为革兰氏阳性的无芽孢杆菌，长短不等，双歧杆菌有V字型或Y字型，排列呈单、双、短链、X、Y、V或栅状；
生物学鉴定：提取细菌DNA或RNA，采取PCR技术进行DNA或者RNA鉴定。
进一步，步骤二中初步筛选方法为：根据生物学鉴定明确各分离菌株是否为目标益生菌；所述目标益生菌为：乳杆菌选用戊糖乳杆菌或植物乳杆菌，双歧杆菌的选育为双叉双歧杆菌、婴儿双歧杆菌(B.infantis)、青春双歧杆菌(B.adolescentis)、长双歧杆菌(B.longum)和短双歧杆菌(B.breve)中的一种，芽孢杆菌选用能产生多种消化酶的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌中的一种；酵母菌选用饲料酵母、面包酵母、茶酵母或者啤酒酵母中的一种，尽量避免使用目前尚无定论，作用有争议的细菌，如酿酒酵母等。
进一步，步骤三筛选最佳的菌株中优选为：2株乳杆菌、1株双歧杆菌和变量X菌，当变量X菌为零时该复合型合生元微生态制剂用于合生元母本，在此母本基础上添加与不同动物相应的益生菌和相应的益生菌对应的益生元制成专有动物合生元；益生菌和相应的益生菌对应的益生元按重量比为：益生菌：益生元＝1:1～5；
进一步，步骤四中低聚糖最佳添加量分别为木寡糖0.05-5g/kg、寡甘露糖0.25-2g/kg、果寡糖0.02-2g/kg、低聚异麦芽糖0.5-3g/kg、乳寡糖0.5-3g/kg；添加由乳酸、柠檬酸、延胡索酸物质组成的酸化剂0.1％-0.5％。
进一步，步骤五中益生菌营养物质各组分按重量比为：蛋白胨1-100g/kg、牛肉膏2-8g/kg、蔗糖1-50g/kg、酵母粉1-20g/kg、碘酸钾1-3g/kg、磷酸二氢钠0.5-2.5g/kg、硫酸镁0.1-1g/kg、复合维生素0.01-10g/kg,、复合氨基酸0.01-10g/kg，哺乳类动物NaCl浓度为0.85-0.9％，两栖类动物NaCl浓度为0.67-0.7％。
进一步，所述复合型合生元微生态制剂根据不同的动物填料混合，所述填料为速溶豆浆粉。
本发明提供的复合型合生元微生态制剂及其制备方法，解决了由传统的抗生素而带来的药物残留、产生抗药性、动物肠道微生态平衡遭到破坏及降低肉制品质量等食品安全与质量问题；如猪用抗生素必须在宰前停药，有些停药天数需要达到1个半月方能屠宰，大大影响了养猪业的生产、销售；洛克沙胂因无机砷会在动物肝脏或卵细胞中富集致癌，在蛋鸡产蛋期被严格禁用，这使易患球虫病的蛋鸡饲养业带来极大不便和不小的损失，磺胺类药物是广谱抗生素，不仅会造成机体耐药性还会对动物本身体内正常微生物菌群带来毁灭性的破坏，造成动物代谢失调严重影响动物生长生产；而合生元微生态制剂不会造成机体耐药性，更不会破坏机体肠道微生物菌群，从而对动物的生产具有很大提高和促进的作用。动物饲料添加该微生态制剂会带来:a.提高饲料转化率,促进动物生长；b.产生营养物质,并可以调节动物体内酶的活性；c.增强动物体的免疫功能；d.提高动物的成活率；e.提高动物的日增重；f.增强动物的非特异性免疫功能；g.提高动物的瘦肉率；h.增加动物肉质口感等。步骤四中低聚糖最佳添加量分别为木寡糖0.05-5g/kg、寡甘露糖0.25-2g/kg、果寡糖0.02-2g/kg、低聚异麦芽糖0.5-3g/kg、乳寡糖0.5-3g/kg；添加由乳酸、柠檬酸、延胡索酸物质组成的酸化剂0.1％-0.5％带来的直接效果：在最佳酸化剂添加量下:a.动物的消化道环境能得到改善，从而改善动物的健康状况和生长性能；b.提高胃肠道的酸度，从而提高胃蛋白酶的活性；c.改善胃肠道内微生物区系，抑制有害微生物的繁殖；d.促进动物体对矿物质元素和维生素的吸收；e.促进有益菌的增殖，能够替代某些抗生素的功能。
目前使用的抗生素替代品功能还比较单一，虽然针对性较强，能起到治疗作用，但极易产生耐药性且副作用较大，也未能做到完全无残留(如氟哌酸的替代品泰妙灵)，而本发明所得的复合型微生态制剂充分克服了这一缺点，通过将各种益生菌与益生元以最适的比例混合实现了调节动物肠道微生物平衡，维持肠道健康，刺激有益菌群的生长，竞争性抑制有害菌，最终达到促进动物的生长，提高动物的免疫力的目的，而且无污染、无残留；
现有技术只是概念性运用益生菌添加，与益生元的对应关系阐释并不清晰，目前市场较好的类似产品也只是把二者随机搭配、机械混合，基本无针对性，造成目前市场益生添加剂效果并不明显的现象；而本发明所得微生态制剂是将各种益生菌与益生元根据每类益生菌各自的特点、动物肠道系统特点与益生元的对应关系，按照最佳的组合与比例精制而成，极具针对性，效果也很明显且无不良后果。
本发明能避免单独使用益生菌产品的弱点，并且适合于多种牲畜，扬长避短，促进了外源性益生菌在动物肠道的定植，并且选择性刺激多种益生菌的生长和繁殖，从而达到促进动物健康的目的，减少了动物食用添加剂对动物本身的影响，更加经济适用；
本发明能够调节动物肠道微生物平衡，维持肠道健康，刺激有益菌群的生长，竞争性抑制有害菌，最终达到促进动物的生长，提高动物的免疫力的目的；获得的菌种能够直接运用于微生态制剂的制备，无污染、无残留，是现阶段标准的绿色动物食用添加剂，满足人们对食品的健康标准，符合日益提高的食品安全与质量要求；这种复合型合生元微生态制剂在畜牧业中发挥着重要作用，不仅可以促进动物生长，还能提高饲料的转化率，并且符合食品质量与安全的标准。
附图说明
图1是本发明实施例提供的复合型合生元微生态制剂的制备方法流程图。
具体实施方式
为能进一步了解本发明的发明内容、特点及功效，兹例举以下实施例，并配合附图详细说明如下：
本发明的复合型合生元微生态制剂，首先，筛选的多种益生菌是经过多次试验筛选出的条件最佳的种类，这样结合了多种益生菌的优良特性，相辅相成起到事半功倍的效果，益生特性更加显著；其次，添加以低聚糖为主的益生元，解决了低聚糖的难以被消化利用的问题，适量的低聚糖能够促进肠道有益菌增殖，并给机体健康作用；最后，根据各种益生菌所需益生元的不同，配置出更佳的比例，带来更具经济效益和适用性的复合型益生元微生态制剂。
为了解决滥用抗生素导致越来越多的致病菌产生抗药性，药物残留，降低动物产品品质以及对人类身体健康带来的严重影响，生产替代抗生素的动物食用添加剂。该添加剂效果好，无药物残留的绿色添加剂。本发明为寻找替代型的新型动物食用添加剂是来解决畜牧行业面临的重要任务提供了一种复合型合生元微生态制剂。旨在弥补将益生菌或益生元直接作为添加剂的不足和对动物的影响，并且适合于多种牲畜，能够提高生产质量，研制出新型合生元微生态制剂对畜牧产业进行更新换代。
下面结合附图对本发明做详细说明。
本发明实施例提供的复合型合生元微生态制剂，该复合型合生元微生态制剂组分为肠道益生菌、益生菌营养物质、低聚糖；所述各组分按重量比为：肠道益生菌为0.02-15g/kg，益生菌营养物质为0.05-80g/kg，低聚糖为0.01-90g/kg；所述肠道益生菌组分由乳杆菌、双歧杆菌+变量X菌组成，所述变量X菌为芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌﹑粪链球菌、嗜热链球菌﹑乳链球菌、乳酸片球菌、肠球菌、拟杆菌﹑鼠李糖杆菌中的任意一种或几种细菌的混合物；根据不同的动物有机体变量X菌的添加量进行调整。
进一步，所述低聚糖为含酸化剂的低聚糖。
进一步，当变量X菌为零时该复合型合生元微生态制剂用于合生元母本，在此母本基础上添加与不同动物相应的益生菌和相应的益生菌对应的益生元制成专有动物合生元；益生菌和相应的益生菌对应的益生元按重量比为：益生菌：益生元＝1:1～5，所述益生元为木寡糖、寡甘露糖、果寡糖、低聚异麦芽糖、乳寡糖、乳酮糖、低聚半乳糖、大豆低聚糖﹑低聚壳聚糖中的一种或多种混合物。
本发明另一目的在于提供一种复合型合生元微生态制剂的制备方法，所述复合型合生元微生态制剂的制备方法，首先分别在不同的环境下筛选出肠道益生菌，通过对筛选出的肠道益生菌的功能和生物学特性比较，并且在模拟肠道环境下比较益生菌的活菌数变化，筛选出最佳的菌株，将各类低聚糖含量进行测定，选择出最佳添加量，将肠道益生菌和低聚糖混合制成复合型合生元微生态制剂。
如图1所示：该复合型合生元微生态制剂的制备方法具体包括：
S101:从动物的胃肠道、养殖场附近的土壤、喂养牲畜的酒糟中分离筛选出乳杆菌、双歧杆菌、变量X菌的益生菌，分析分离得到的乳杆菌、双歧杆菌、变量X菌的益生菌形态特征，并进行菌种的鉴定；
S102:将分离得到的乳杆菌、双歧杆菌、变量X菌的益生菌进行生物学特性、功能的比较以及安全性的鉴定，并进行体外益生效果评价，初步筛选优质益生菌；
S103:在人工模拟的胃肠道液中培养初步筛选后的优质益生菌，测定各类益生菌的活菌数，繁殖代数，进行更进一步的筛选，选出最佳的菌株；
S104:根据益生菌的种类、各类益生元的功能特性以及与相应益生菌的利用程度选择由低聚糖和酸化剂组成的益生元，优化出低聚糖和酸化剂最佳添加量；
S105:对S103筛选的益生菌株与S104选择出的益生元，再加入益生菌营养物质混合制成复合型合生元微生态制剂。
S101中进行菌种的鉴定包括：
常规鉴定：乳杆菌为革兰氏阳性无芽孢杆菌，细胞形态呈链杆状或球杆状，双歧杆菌为革兰氏阳性的无芽孢杆菌，长短不等，双歧杆菌有V字型或Y字型，排列呈单、双、短链、X、Y、V或栅状；
生物学鉴定：提取细菌DNA或RNA，采取PCR技术进行DNA或者RNA鉴定。
S102中初步筛选方法为：根据生物学鉴定明确各分离菌株是否为目标益生菌；所述目标益生菌为：乳杆菌选用戊糖乳杆菌或植物乳杆菌，双歧杆菌的选育为双叉双歧杆菌、婴儿双歧杆菌(B.infantis)、青春双歧杆菌(B.adolescentis)、长双歧杆菌(B.longum)和短双歧杆菌(B.breve)中的一种，芽孢杆菌选用能产生多种消化酶的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌中的一种；酵母菌选用饲料酵母、面包酵母、茶酵母或者啤酒酵母中的一种，尽量避免使用目前尚无定论，作用有争议的细菌，如酿酒酵母等。
S103筛选最佳的菌株中优选为：2株乳杆菌、1株双歧杆菌和变量X菌，当变量X菌为零时该复合型合生元微生态制剂用于合生元母本，在此母本基础上添加与不同动物相应的益生菌和相应的益生菌对应的益生元制成专有动物合生元；益生菌和相应的益生菌对应的益生元按重量比为：益生菌：益生元＝1:1～5；
该动物饲料添加该微生态制剂会带来的直接效果有:a.提高饲料转化率,促进动物生长；b.产生营养物质,并可以调节动物体内酶的活性；c.增强动物体的免疫功能；d.提高动物的成活率；e.提高动物的日增重；f.增强动物的非特异性免疫功能；g.提高动物的瘦肉率；h.增加动物肉质口感，等。
S104中低聚糖最佳添加量分别为木寡糖0.05-5g/kg、寡甘露糖0.25-2g/kg、果寡糖0.02-2g/kg、低聚异麦芽糖0.5-3g/kg、乳寡糖0.5-3g/kg；添加由乳酸、柠檬酸、延胡索酸物质组成的酸化剂0.1％-0.5％(带来的直接效果：在最佳酸化剂添加量下:a.动物的消化道环境能得到改善，从而改善动物的健康状况和生长性能；b.提高胃肠道的酸度，从而提高胃蛋白酶的活性；c.改善胃肠道内微生物区系，抑制有害微生物的繁殖；d.促进动物体对矿物质元素和维生素的吸收；e.促进有益菌的增殖，能够替代某些抗生素的功能，等)。
S105中益生菌营养物质各组分按重量比为：蛋白胨1-100g/kg、牛肉膏2-8g/kg、蔗糖1-50g/kg、酵母粉1-20g/kg、碘酸钾1-3g/kg、磷酸二氢钠0.5-2.5g/kg、硫酸镁0.1-1g/kg、复合维生素0.01-10g/kg,、复合氨基酸0.01-10g/kg、特制生理盐水若干，所述生理盐水的哺乳类动物NaCl浓度为0.85-0.9％，两栖类动物NaCl浓度为0.67-0.7％。
所述复合型合生元微生态制剂根据不同的动物填料混合，所述填料为速溶豆浆粉。
将最后制得的产品进行动物实验。
本发明解决了由传统的抗生素而带来的药物残留、产生抗药性、动物肠道微生态平衡遭到破坏及降低肉制品质量等食品安全与质量问题；
该复合型合生元微生态制剂能避免单独使用益生菌产品的弱点，并且适合于多种牲畜，扬长避短，促进了外源性益生菌在动物肠道的定植，并且选择性刺激多种益生菌的生长和繁殖，从而达到促进动物健康的目的，减少了动物食用添加剂对动物本身的影响，更加经济适用；
该复合型合生元微生态制剂能够调节动物肠道微生物平衡，维持肠道健康，刺激有益菌群的生长，竞争性抑制有害菌，最终达到促进动物的生长，提高动物的免疫力的目的；获得的菌种能够直接运用于微生态制剂的制备，无污染、无残留，是现阶段标准的绿色动物食用添加剂，满足人们对食品的健康标准，符合日益提高的食品安全与质量要求；这种复合型合生元微生态制剂在畜牧业中发挥着重要作用，不仅可以促进动物生长，还能提高饲料的转化率，并且符合食品质量与安全的标准。
下面结合具体实施例对本发明进一步说明。
实施例1：从动物肠道中初步筛选乳杆菌、双歧杆菌益生菌。
第一步：含益生菌样品的采集。选择各个大型屠宰场为样品采集目的地，随机切取不同健康现杀动物的肠道组织，装入已灭菌的自封袋中，并快速带回实验室置于4℃冰箱中保存备用；
第二步：益生菌的富集、分离。在无菌条件下，将肠道组织样品内表面物质加入到富集培养液中培养，形成菌落，再将菌种接种到加入无菌生理盐水制成菌悬液，再用10序列递减法稀释成不同的浓度梯度，将不同的溶度梯度样品进行平板菌落计数，每个稀释度做3个平行，由此制成的平板放入保温箱中培养24-72h；
第三步：益生菌的分离纯化。在无菌条件下，将经过鉴别后的益生菌用接种环接种于无菌生理盐水中，制成菌悬液，再接种于平板上，培养后观察，循环操作，直到获得纯菌落，斜面接种保存备用；
第四步：益生菌的鉴别。将分离纯化后的乳杆菌进行形态观察，生理生化特性测定和16S rDNA序列测定的等方法，分别对不同的菌落进行鉴定，达到对其知类辨名的目的。
实施例2：益生菌菌株的进一步筛选。
第一步：分别将初步筛选的益生菌进行功能试验测定，例如将新培养的益生菌接种到不同浓度的胆盐培养基中，测定胆盐耐受性；在低pH的环境下培养益生菌3-5天，然后判断益生菌耐酸程度；
第二步：在人工模拟胃肠道的微生态环境中培养初步筛选后的益生菌，对各类益生菌的存活率，繁殖代数进行测定，筛选出生长状况较好的益生菌；
第三步：以上各项测定合格的益生菌为最终筛选的益生菌，最终得到2株乳杆菌、1株双歧杆菌；
实施例3：复合型合生元微生态制剂的制备。
第一步：根据益生菌的种类、各类益生元的功能特性以及与相应益生菌的利用程度选择由低聚糖和酸化剂组成的益生元，可选择的低聚糖为寡甘露糖，果寡糖,低聚异麦芽糖,乳寡糖等，酸化剂使用由乳酸、柠檬酸、延胡索酸等物质组成的复合酸化剂；
第二步：测试各类低聚糖的添加量，各类低聚糖的添加量为木寡糖0.05-5g/kg，寡甘露糖0.25-2g/kg，果寡糖0.01-3g/kg，低聚异麦芽糖0.01-3g/kg，乳寡糖0.01-3g/kg。添加由乳酸、柠檬酸、延胡索酸等物质组成的复合酸化剂0.1％-0.5％；
第三步：将几种益生菌和选择出的益生元有机结合起来，再加入有益于有利于益生菌生长的营养物质，制成复合型合生元微生态制剂；
第四步：最后制成的产品添加到动物食用料中进行动物实验，根据实验动物的增重量、饲料消耗量和料肉比等来判断实验动物的生产性能情况。
本发明益生菌生理生化特性一览表:
表1益生菌生理生化特性一览表
以上所述仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。