本发明涉及红藻多肽复配物的制备领域，尤其是涉及红藻蛋白多肽复配物的制备方法。
技术背景
红藻绝大部分海生，见于热带和亚热带海岸附近，常附著于其他植物。叶状体有丝状、分枝状、羽状或片状。细胞间连以纤细的原生质丝。除叶绿素外，尚含藻红素和藻蓝素，故常呈红色或蓝色。红藻的生殖细胞不能运动。雌性器官称果孢，由单核区和受精丝构成。不动精子在精子囊中单生。重要的食用红藻(如紫菜、掌状红皮藻)煮熟后仍保持其色泽及胶体性质。工业上，角叉菜属(Chondrus)红藻作为明胶的代用品用于布丁、牙膏、冰淇淋及保藏食品中。珊瑚藻属(Corallina)的某些种在形成珊瑚礁与珊瑚岛的过程中起重要作用。主要由江蓠属(Gracilaria)和石花菜属(Gelidium)红藻制备的琼脂是细菌和真菌培养基的重要成分。红藻门的经济价值很高。在红藻类中，紫菜是一种食用藻类，它含有丰富的蛋白质，不仅营养丰富，而且味道鲜美。此外石花菜(Gelidium amansii)、海萝(Gloiopeltis furcata)等均可食用。鹧鸪菜(Caloglossa leprieurii)和海人草(Digenea simples)是常用的小儿驱虫药。从石花菜属、江篱属(Gracilaria)、麒麟菜属(Eucheuma)植物中提取的琼胶(agar)，被应用在医药工业和纺织工业上，并广泛作为培养基。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供红藻蛋白多肽复配物的制备方法，本制备方法简单易行，未添加任何有害有机物，红藻蛋白多肽复配物的螯合率较高，易于机体吸收。
本发明针对
背景技术：
中提到的问题，采取的技术方案为：红藻蛋白多肽复配物的制备方法，包括：提取红藻蛋白、制备红藻蛋白多肽、制备螯合钙、制备复配物，具体包括以下步骤：
提取红藻蛋白：将红藻泥溶于浓度为1-2mmol/L、pH为7.0-7.2的PBS缓冲液中，摇匀后置于-10～-20℃冷冻，30-60分钟后以14-18℃解冻，反复冻融2-3次，在冰浴条件下超声波破碎处理30-45分钟，间隙时间1-2s，超声时间2-4s；取破碎液在2-4℃、10000-12000r/min条件下离心30-35分钟收集上清液，加入硫酸铵达到28%的饱和度，搅拌30-45分钟，0-2℃静置过夜后离心收集上清液，加入硫酸铵达到55%的饱和度，0-2℃静置过夜后离心收集沉淀；将沉淀用浓度为0.01-0.02mol/L、pH为7.0-7.4的PBS缓冲液溶解后装入截留量为8-14 ku的透析袋透析去盐，再次离心，收集上清液，真空冷冻干燥成红藻蛋白干粉；以冻融配合超声波破碎法破碎红藻细胞，不会对细胞内容物造成破坏，而且又可以较为彻底的粉碎细胞，析出细胞内的蛋白质，提取方法简单易行，不添加有机试剂；
制备红藻蛋白多肽：将粗蛋白粉末按料液比1:10-12溶解于蒸馏水中，加入粗蛋白粉末5000-5600u/g的中性蛋白酶，在45-47℃、pH6.6-6.8的条件下水解30-45分钟，在酶解过程的中间阶段加入中性蛋白酶重量12-18‰的（R）-1,1’-联萘-2,2’-酚基二异丙氧钛；酶解完成后高温灭酶，经4000-4500r/min、2-4℃离心30-45分钟，取上清液低温干燥得红藻蛋白多肽；（R）-1,1’-联萘-2,2’-酚基二异丙氧钛能够作用于蛋白酶的金属原子活性中心，降低蛋白酶与底物之间的能量壁垒，增大酶与底物之间的反应活性，从而大大提高蛋白酶的酶解活性，加速酶解；红藻蛋白多肽富含红藻多肽和游离氨基酸，具有抗氧化、抗肿瘤、抑菌、降血压、保护基因组DNA和提高机体免疫力等多重功效，具有较好的医疗保健效果；
制备螯合钙：将红藻蛋白多肽复溶成20-25%的肽液，调整pH为8.2-8.5，按肽钙质量比1:2.5-3.5加入无水氯化钙，再加入红藻蛋白多肽质量5-6‰的维生素C，震荡混匀后，在23-25℃恒温螯合，螯合45-60分钟后，加入溶液体积6-7倍的无水乙醇，静置沉淀3-5小时后，在2-4℃、6000-6500r/min条件下离心30-45分钟，取下层沉淀物冻干得红藻蛋白多肽螯合钙粉；谷氨酸和天冬氨酸等酸性氨基酸对螯合的贡献最大，红藻蛋白多肽螯合钙以Ca-多肽的形式进入细胞，然后在细胞中主动分裂，释放出Ca2+便被细胞利用，从而促进金属离子吸收，是一种优质的补钙剂，同时红藻蛋白多肽也可以增强机体体质、降低血压血脂；
制备复配物：将红藻蛋白多肽复溶成10-12%的肽液，调节pH值至7.2-7.5，取80-100份肽液，加入120-150份1.0-1.2mol/L的氯化亚铁溶液，再加入3-4mg的维生素C，在30-33℃温度下震荡合成20-30分钟，于2-4℃、6000-7000r/min条件下离心浓缩20-45分钟，弃沉淀，上清液低温干燥后即得红藻蛋白多肽亚铁螯合粉，将红藻蛋白多肽螯合钙粉与红藻蛋白多肽亚铁螯合粉按照1:2-3的比例混合即得红藻蛋白多肽复配物；红藻蛋白多肽亚铁螯合物易于被机体吸收，避免了无机铁盐稳定性差、胃肠刺激大、易受到肠内容物干扰、生物利用率低、存在一定毒副作用等缺点，红藻蛋白多肽复配物有助于钙铁的吸收，同时红藻蛋白多肽可以补充机体所需氨基酸，降低血压、血脂，具有较好的保健功效，是一种高效的红藻蛋白多肽复配物。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
1）（R）-1,1’-联萘-2,2’-酚基二异丙氧钛能够作用于蛋白酶的金属原子活性中心，降低蛋白酶与底物之间的能量壁垒，增大酶与底物之间的反应活性，从而大大提高蛋白酶的酶解活性，加速酶解；红藻蛋白多肽富含红藻多肽和游离氨基酸，具有抗氧化、抗肿瘤、抑菌、降血压、保护基因组DNA和提高机体免疫力等多重功效，具有较好的医疗保健效果；
2）红藻蛋白多肽复配物的螯合率较高，易于被机体吸收，红藻蛋白多肽螯合亚铁避免了无机铁盐稳定性差、胃肠刺激大、易受到肠内容物干扰、生物利用率低、存在一定毒副作用等缺点；红藻蛋白多肽螯合钙以Ca-多肽的形式进入细胞，然后在细胞中主动分裂，释放出钙离子可以被细胞利用，并可促进亚铁离子等其他金属离子吸收，同时红藻蛋白多肽可以补充机体所需氨基酸，降低血压、血脂，具有较好的保健功效，是一种高效的红藻蛋白多肽复配物。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
红藻蛋白多肽复配物的制备方法，包括以下步骤：
1）将红藻泥溶于浓度为1mmol/L、pH为7.0的PBS缓冲液中，摇匀后置于-10℃冷冻，30分钟后以14℃解冻，反复冻融2次，在冰浴条件下超声波破碎处理30分钟，间隙时间1s，超声时间2s；取破碎液在2℃、10000r/min条件下离心30分钟收集上清液，加入硫酸铵达到28%的饱和度，搅拌30分钟，0℃静置过夜后离心收集上清液，加入硫酸铵达到55%的饱和度，0℃静置过夜后离心收集沉淀；将沉淀用浓度为0.01mol/L、pH为7.0的PBS缓冲液溶解后装入截留量为8-14 ku的透析袋透析去盐，再次离心，收集上清液，真空冷冻干燥成红藻蛋白干粉；2）将粗蛋白粉末按料液比1:10溶解于蒸馏水中，加入粗蛋白粉末5000u/g的中性蛋白酶，在45℃、pH6.6的条件下水解30分钟，在酶解过程的中间阶段加入中性蛋白酶重量12‰的（R）-1,1’-联萘-2,2’-酚基二异丙氧钛；酶解完成后高温灭酶，经4000r/min、2℃离心30分钟，取上清液低温干燥得红藻蛋白多肽；3）将红藻蛋白多肽复溶成20%的肽液，调整pH为8.2，按肽钙质量比1:2.5加入无水氯化钙，再加入红藻蛋白多肽质量5‰的维生素C，震荡混匀后，在23℃恒温螯合，螯合45分钟后，加入溶液体积6倍的无水乙醇，静置沉淀3小时后，在2℃、6000r/min条件下离心30分钟，取下层沉淀物冻干得红藻蛋白多肽螯合钙粉；4）将红藻蛋白多肽复溶成10%的肽液，调节pH值至7.2，取80份肽液，加入120份1.0mol/L的氯化亚铁溶液，再加入3mg的维生素C，在30℃温度下震荡合成20分钟，于2℃、6000r/min条件下离心浓缩20分钟，弃沉淀，上清液低温干燥后即得红藻蛋白多肽亚铁螯合粉，将红藻蛋白多肽螯合钙粉与红藻蛋白多肽亚铁螯合粉按照1:2的比例混合即得红藻蛋白多肽复配物。
实施例2：
红藻蛋白多肽复配物的制备方法，包括以下步骤：
1）提取红藻蛋白：将红藻泥溶于浓度为2mmol/L、pH为7.2的PBS缓冲液中，摇匀后置于-20℃冷冻，60分钟后以18℃解冻，反复冻融3次，在冰浴条件下超声波破碎处理45分钟，间隙时间2s，超声时间4s；取破碎液在4℃、12000r/min条件下离心35分钟收集上清液，加入硫酸铵达到28%的饱和度，搅拌45分钟，2℃静置过夜后离心收集上清液，加入硫酸铵达到55%的饱和度，2℃静置过夜后离心收集沉淀；将沉淀用浓度为0.02mol/L、pH为7.4的PBS缓冲液溶解后装入截留量为14 ku的透析袋透析去盐，再次离心，收集上清液，真空冷冻干燥成红藻蛋白干粉；以冻融配合超声波破碎法破碎红藻细胞，不会对细胞内容物造成破坏，而且又可以较为彻底的粉碎细胞，析出细胞内的蛋白质，提取方法简单易行，不添加有机试剂；
2）制备红藻蛋白多肽：将粗蛋白粉末按料液比1:12溶解于蒸馏水中，加入粗蛋白粉末5600u/g的中性蛋白酶，在47℃、pH6.8的条件下水解45分钟，在酶解过程的中间阶段加入中性蛋白酶重量18‰的（R）-1,1’-联萘-2,2’-酚基二异丙氧钛；酶解完成后高温灭酶，经4500r/min、4℃离心45分钟，取上清液低温干燥得红藻蛋白多肽；（R）-1,1’-联萘-2,2’-酚基二异丙氧钛能够作用于蛋白酶的金属原子活性中心，降低蛋白酶与底物之间的能量壁垒，增大酶与底物之间的反应活性，从而大大提高蛋白酶的酶解活性，加速酶解；红藻蛋白多肽富含红藻多肽和游离氨基酸，具有抗氧化、抗肿瘤、抑菌、降血压、保护基因组DNA和提高机体免疫力等多重功效，具有较好的医疗保健效果；
3）制备螯合钙：将红藻蛋白多肽复溶成25%的肽液，调整pH为8.5，按肽钙质量比1:3.5加入无水氯化钙，再加入红藻蛋白多肽质量6‰的维生素C，震荡混匀后，在25℃恒温螯合，螯合60分钟后，加入溶液体积7倍的无水乙醇，静置沉淀5小时后，在4℃、6500r/min条件下离心45分钟，取下层沉淀物冻干得红藻蛋白多肽螯合钙粉；谷氨酸和天冬氨酸等酸性氨基酸对螯合的贡献最大，红藻蛋白多肽螯合钙以Ca-多肽的形式进入细胞，然后在细胞中主动分裂，释放出Ca2+便被细胞利用，从而促进金属离子吸收，是一种优质的补钙剂，同时红藻蛋白多肽也可以增强机体体质、降低血压血脂；
4）制备复配物：将红藻蛋白多肽复溶成12%的肽液，调节pH值至7.5，取100份肽液，加入150份1.2mol/L的氯化亚铁溶液，再加入4mg的维生素C，在33℃温度下震荡合成30分钟，于4℃、7000r/min条件下离心浓缩45分钟，弃沉淀，上清液低温干燥后即得红藻蛋白多肽亚铁螯合粉，将红藻蛋白多肽螯合钙粉与红藻蛋白多肽亚铁螯合粉按照1:3的比例混合即得红藻蛋白多肽复配物；红藻蛋白多肽亚铁螯合物易于被机体吸收，避免了无机铁盐稳定性差、胃肠刺激大、易受到肠内容物干扰、生物利用率低、存在一定毒副作用等缺点，红藻蛋白多肽复配物有助于钙铁的吸收，同时红藻蛋白多肽可以补充机体所需氨基酸，降低血压、血脂，具有较好的保健功效，是一种高效的红藻蛋白多肽复配物。
实施例3：
红藻蛋白多肽复配物的制备方法，包括：提取红藻蛋白、制备红藻蛋白多肽、制备螯合钙、制备复配物，具体包括以下步骤：
提取红藻蛋白：将红藻泥溶于浓度为1.8mmol/L、pH为7.0的PBS缓冲液中，摇匀后置于-18℃冷冻，45分钟后以15℃解冻，反复冻融2次，在冰浴条件下超声波破碎处理30分钟，间隙时间2s，超声时间3s；取破碎液在3℃、10500r/min条件下离心32分钟收集上清液，加入硫酸铵达到28%的饱和度，搅拌35分钟，2℃静置过夜后离心收集上清液，加入硫酸铵达到55%的饱和度，2℃静置过夜后离心收集沉淀；将沉淀用浓度为0.02mol/L、pH为7.2的PBS缓冲液溶解后装入截留量为10 ku的透析袋透析去盐，再次离心，收集上清液，真空冷冻干燥成红藻蛋白干粉；以冻融配合超声波破碎法破碎红藻细胞，不会对细胞内容物造成破坏，而且又可以较为彻底的粉碎细胞，析出细胞内的蛋白质，提取方法简单易行，不添加有机试剂；
制备红藻蛋白多肽：将粗蛋白粉末按料液比1:10溶解于蒸馏水中，加入粗蛋白粉末5500u/g的中性蛋白酶，在46℃、pH6.7的条件下水解35分钟，在酶解过程的中间阶段加入中性蛋白酶重量15‰的（R）-1,1’-联萘-2,2’-酚基二异丙氧钛；酶解完成后高温灭酶，经4200r/min、2-4℃离心30-45分钟，取上清液低温干燥得红藻蛋白多肽；（R）-1,1’-联萘-2,2’-酚基二异丙氧钛能够作用于蛋白酶的金属原子活性中心，降低蛋白酶与底物之间的能量壁垒，增大酶与底物之间的反应活性，从而大大提高蛋白酶的酶解活性，加速酶解；红藻蛋白多肽富含红藻多肽和游离氨基酸，具有抗氧化、抗肿瘤、抑菌、降血压、保护基因组DNA和提高机体免疫力等多重功效，具有较好的医疗保健效果；
制备螯合钙：将红藻蛋白多肽复溶成24%的肽液，调整pH为8.4，按肽钙质量比1:3.0加入无水氯化钙，再加入红藻蛋白多肽质量5‰的维生素C，震荡混匀后，在24℃恒温螯合，螯合45分钟后，加入溶液体积6倍的无水乙醇，静置沉淀4小时后，在3℃、6000r/min条件下离心32分钟，取下层沉淀物冻干得红藻蛋白多肽螯合钙粉；谷氨酸和天冬氨酸等酸性氨基酸对螯合的贡献最大，红藻蛋白多肽螯合钙以Ca-多肽的形式进入细胞，然后在细胞中主动分裂，释放出Ca2+便被细胞利用，从而促进金属离子吸收，是一种优质的补钙剂，同时红藻蛋白多肽也可以增强机体体质、降低血压血脂；
制备复配物：将红藻蛋白多肽复溶成10%的肽液，调节pH值至7.4，取90份肽液，加入130份1.1mol/L的氯化亚铁溶液，再加入3mg的维生素C，在32℃温度下震荡合成25分钟，于3℃、6500r/min条件下离心浓缩35分钟，弃沉淀，上清液低温干燥后即得红藻蛋白多肽亚铁螯合粉，将红藻蛋白多肽螯合钙粉与红藻蛋白多肽亚铁螯合粉按照1:2.5的比例混合即得红藻蛋白多肽复配物；红藻蛋白多肽亚铁螯合物易于被机体吸收，避免了无机铁盐稳定性差、胃肠刺激大、易受到肠内容物干扰、生物利用率低、存在一定毒副作用等缺点，红藻蛋白多肽复配物有助于钙铁的吸收，同时红藻蛋白多肽可以补充机体所需氨基酸，降低血压、血脂，具有较好的保健功效，是一种高效的红藻蛋白多肽复配物。
本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。